本文選題：臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞 + 體外培養(yǎng)��； 參考：《胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志》2012年06期

【摘要】：目的分離、培養(yǎng)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(hUC-MSCs),并探討體外培養(yǎng)過程中表觀遺傳學(xué)的改變。方法隨機選取足月順產(chǎn)健康胎兒臍帶,采取復(fù)合酶消化法從臍帶膠質(zhì)中獲得hUC-MSCs。流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞表面標(biāo)志物。分化培養(yǎng)基誘導(dǎo)hUC-MSCs分化。β-半乳糖苷酶染色檢測細(xì)胞衰老。甲基化特異性PCR(MSP)檢測hUC-MSCs在不同培養(yǎng)時期特定基因的甲基化狀態(tài)。蛋白免疫印記(Western blot)檢測hUC-MSCs在不同培養(yǎng)時期MGMT基因的蛋白表達(dá)。結(jié)果按整根臍帶30 cm計算,可收獲(3～6)×106hUC-MSCs。培養(yǎng)的hUC-MSCs高表達(dá)CD29、CD73、CD105、CD90和CD44,不表達(dá)CD45、CD34和HLA-DR。hUC-MSCs可定向分化為成脂、成骨和成軟骨細(xì)胞。隨著細(xì)胞的傳代,衰老細(xì)胞占細(xì)胞總數(shù)的比例增加。培養(yǎng)后期的hUC-MSCs出現(xiàn)MGMT基因甲基化。結(jié)論復(fù)合酶消化法可從臍帶膠質(zhì)中獲得具有間充質(zhì)干細(xì)胞(MSC)特性的細(xì)胞。隨著傳代次數(shù)的增多,DNA修復(fù)基因MGMT出現(xiàn)甲基化,可能參與hUC-MSCs衰老調(diào)控。
[Abstract]:Objective to isolate and culture human umbilical cord mesenchymal stem cells (hUC-MSCsS) and to investigate the epigenetic changes during in vitro culture. Methods Human umbilical cord (HUC-MSCs) was obtained from umbilical cord glia by complex enzyme digestion. Cell surface markers were detected by flow cytometry. Differentiation medium induced hUC-MSCs differentiation. 尾-galactosidase staining was used to detect cell senescence. Methylation specific PCR MSPs were used to detect the methylation status of specific genes in hUC-MSCs at different culture stages. Western blot was used to detect the protein expression of MGMT gene in different culture stages of hUC-MSCs. Results according to the 30 cm of the whole umbilical cord, the harvest of UC-MSCs was 6 脳 10 6 h. CD29, CD73, CD105, CD90 and CD44 were highly expressed in cultured hUC-MSCs, but CD45, CD34 and HLA-DR.hUC-MSCs could be differentiated into lipids, osteoblasts and chondroblasts. With the passage of cells, aging cells increased in proportion to the total number of cells. MGMT gene methylation occurred in hUC-MSCs at the late stage of culture. Conclusion combined enzyme digestion can obtain mesenchymal stem cell (MSCs) cells from umbilical cord glia. The methylation of MGMT may be involved in the regulation of hUC-MSCs senescence with the increase of passage times.
【作者單位】： 內(nèi)蒙古大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;內(nèi)蒙古干細(xì)胞醫(yī)學(xué)工程技術(shù)研究中心;北京京蒙高科干細(xì)胞技術(shù)有限公司;中國人民解放軍總醫(yī)院消化科;
【基金】：內(nèi)蒙古自然科學(xué)基金資助項目(2011BS0507)
【分類號】：R329

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本文編號：1798683