本文選題：肺炎衣原體 + Cpn　； 參考：《中國免疫學(xué)雜志》2012年09期

【摘要】：目的:構(gòu)建Cpn0308重組質(zhì)粒pcDNA3.1/His A-Cpn0308,將重組質(zhì)粒腹腔注射小鼠后觀察小鼠免疫反應(yīng)變化,以期為進一步研究Cpn0308免疫保護性奠定基礎(chǔ)。方法:構(gòu)建pcDNA3.1/His A-Cpn0308,并用菌落PCR、雙酶切、序列測定等多種技術(shù)確定其正確性;將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HeLa細(xì)胞,間接免疫熒光法檢測細(xì)胞內(nèi)蛋白表達情況;重組質(zhì)粒免疫BALB/c小鼠,一定時間后Western blot檢測血清Cpn0308抗體特異性,間接ELISA法檢測小鼠血清中Cpn0308 IgG抗體水平、ELISA試劑盒檢測血清中細(xì)胞因子。結(jié)果:pcDNA3.1/His A-Cpn0308重組質(zhì)粒構(gòu)建成功且序列正確;重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的HeLa細(xì)胞胞漿觀察到黃綠色熒光,對照組無熒光;重組質(zhì)粒組血清抗體A450x±s為0.343±0.024,pcDNA3.1/His A質(zhì)粒組為0.174±0.018,PBS組為0.156±0.023,WB結(jié)果顯示重組質(zhì)粒組小鼠血清稀釋800倍后仍有特異性目的條帶出現(xiàn),對照組不出現(xiàn);重組質(zhì)粒組小鼠IFN-γ濃度均值為264 ng/L,IL-4濃度均值為22 ng/L,pcDNA3.1/His A質(zhì)粒組為:IFN-γ120 ng/L,IL-4 10 ng/L,PBS組為:IFN-γ99 ng/L,IL-4 9 ng/L。重組質(zhì)粒組IgG抗體水平和細(xì)胞因子水平明顯升高,與對照組相比有統(tǒng)計學(xué)差異。結(jié)論:pcDNA3.1/His A-Cpn0308真核表達重組質(zhì)粒構(gòu)建成功,且能夠在真核細(xì)胞中表達目的蛋白;重組質(zhì)粒對小鼠進行免疫后,提高了小鼠血清IgG抗體水平和細(xì)胞因子水平,為進一步研究Cpn DNA疫苗以及研究該蛋白的生物學(xué)功能提供實驗基礎(chǔ)。
[Abstract]:Aim: to construct Cpn0308 recombinant plasmid pcDNA3.1/His A-Cpn0308, and observe the changes of immune response in mice after intraperitoneal injection of the recombinant plasmid, so as to lay a foundation for further study on the protection of Cpn0308. Methods: pcDNA3.1/His A-Cpn0308 was constructed, and its correctness was confirmed by colony PCR, double enzyme digestion, sequencing, etc. The recombinant plasmid was transfected into HeLa cells, and the expression of intracellular protein was detected by indirect immunofluorescence. BALB/c mice were immunized with recombinant plasmid. After a certain period of time, Western blot was used to detect the specificity of serum Cpn0308 antibody, indirect ELISA method was used to detect the level of Cpn0308 IgG antibody in mouse serum and Elisa kit was used to detect cytokines in serum. Results the recombinant plasmid of 1% pcDNA3.1% his A-Cpn0308 was successfully constructed and the sequence was correct. The cytoplasm of HeLa cells transfected with the recombinant plasmid showed yellowish green fluorescence, while the control group had no fluorescence. The serum antibody A450x 鹵s of recombinant plasmid group was 0.343 鹵0.024% pcDNA3.1% of his A plasmid group was 0.174 鹵0.018 + PBS group: 0.156 鹵0.023 group. The results showed that there were still specific bands of purpose after the serum dilution of the recombinant plasmid group, but not in the control group. The average concentration of IFN- 緯 in recombinant plasmid group was 264 ng / L ~ (-1) IL-4 = 22 ng / L ~ (-1 / L) pcDNA3.1 / his A plasmid group: 1% IFN- 緯 ~ (120) ng / L ~ (-1) IL-4 / L ~ (10) ng / L ~ (-1) PBS group:: IFN- 緯 ~ (99) ng / L ~ (99) ng / L ~ (-9) ng 路L ~ (-1). The levels of IgG antibody and cytokines in the recombinant plasmid group were significantly higher than those in the control group. Conclusion the recombinant plasmid of pcDNA3.1 / his A-Cpn0308 was successfully constructed and could express the target protein in eukaryotic cells, and the level of serum IgG antibody and cytokine were increased after immunizing mice with the recombinant plasmid. It provides experimental basis for further study of Cpn DNA vaccine and the biological function of the protein.
【作者單位】： 河北北方學(xué)院醫(yī)學(xué)檢驗學(xué)院;
【分類號】：R392.1

【參考文獻】

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本文編號：1785283