本文選題：巨噬細(xì)胞 + 過氧化物酶體類�。� 參考：《解放軍醫(yī)學(xué)雜志》2008年04期

【摘要】：目的觀察巨噬細(xì)胞過氧化物酶體在鼠傷寒沙門菌感染中的作用。方法將感染及未感染鼠傷寒沙門菌的鼠巨噬細(xì)胞RAW264.7以氮?dú)鈮浩确呀?逐級離心,用制備的TassC多抗磁珠純化得到粗提液,用Western blot法鑒定TassC多抗磁珠與細(xì)胞結(jié)合物的性質(zhì);用pDs Red2-Perxi質(zhì)粒轉(zhuǎn)染RAW264.7細(xì)胞以標(biāo)記細(xì)胞中的過氧化物酶體,用三維熒光顯微鏡觀察感染細(xì)胞中過氧化物酶體(紅色)與表達(dá)綠色熒光蛋白的鼠傷寒沙門菌突變株的相互作用。結(jié)果Western blot分析顯示TassC多抗磁珠可以結(jié)合細(xì)胞內(nèi)的TassC,并與細(xì)胞內(nèi)的過氧化物酶體結(jié)合,也可以與感染細(xì)胞中的iNOS結(jié)合,而未感染樣本中未檢測到iNOS。磁珠洗脫物中未檢測到溶酶體標(biāo)志物L(fēng)AMP1,也未檢測到受染菌標(biāo)志物;免疫熒光顯示感染的巨噬細(xì)胞中過氧化物酶體聚集在鼠傷寒沙門菌突變株SCV周圍,甚至發(fā)生重疊,隨感染時間延長(1h或24h),過氧化物酶體數(shù)量增加(1.2倍或1.3倍),而胞內(nèi)菌數(shù)量下降。結(jié)論TassC可能定位于過氧化物酶體而不是溶酶體;感染鼠傷寒沙門菌的巨噬細(xì)胞中iNOS可能與過氧化物酶體結(jié)合而參與殺滅微生物的作用。
[Abstract]:Objective to observe the role of macrophage peroxisome in the infection of Salmonella typhimurium.Methods the RAW264.7 of murine macrophages infected and uninfected with Salmonella typhimurium was decomposed by nitrogen pressure method and centrifuged step by step. The crude extract was obtained by purification of prepared TassC multi-diamagnetic beads. The properties of TassC multi-diamagnetic beads and cell conjugates were identified by Western blot method.RAW264.7 cells were transfected with pDs Red2-Perxi plasmid to label peroxisome. The interaction of peroxisome (red) in infected cells with mutant strain of Salmonella typhimurium expressing green fluorescent protein was observed by three dimensional fluorescence microscope.Results Western blot analysis showed that TassC multi-diamagnetic beads could bind to TassCin, peroxisome and iNOS in infected cells, but no iNOS was detected in uninfected samples.No lysosomal marker LAMP1 or bacterial marker was detected in magnetic bead elution, and the peroxisome in infected macrophages gathered around and even overlapped around the mutant strain of Salmonella typhimurium by immunofluorescence.The number of peroxisome increased 1.2 times or 1.3 times, while the number of intracellular bacteria decreased with the increase of infection time for 1 h or 24 h.Conclusion TassC may be located in peroxisome rather than lysosome, and iNOS in macrophages infected with Salmonella typhimurium may play a role in killing microorganisms by binding to peroxisome.
【作者單位】：
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助課題(30170891) 全軍“十五”科研規(guī)劃面上項(xiàng)目資助課題(01MA144)
【分類號】：R378

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本文編號：1770802