發(fā)布時間：2018-04-17 23:20

  本文選題：RNA干擾 + PC12細胞　； 參考：《昆明醫(yī)學院》2011年碩士論文

【摘要】：[目的]研究磷酸吡哆醛激酶(pyridoxal kinase, PDXK)、電壓依賴性陰離子通道2(VDAC2, voltage-dependent anion channels 2)、鳥苷酸解離抑制因子α(RhoGDP dissociation inhibitor, RhoGDI-α)、原肌球蛋白4(tropomyosin 4, TM4)、β-突軸核蛋白(β-synuclein,β-sncb)在PC12細胞生長中的作用。 [方法]化學合成三條分別針對PDXK、VDAC2、RhoGDI-α、TM4、β-sncb五個基因的siRNA序列(Si-r-PDXK_K1、2、3, Si-r-VDAC2_1、2、3, Si-r-RhoGDI-a_1、2、3, Si-r-TM4_1、2、3, Si-r-β-sncb_1、2、3),同時化學合成一條隨機陰性序列對照siRNA SCR(scramble siRNA);使用陽離子脂質(zhì)體Lipofectamine2000TM作為轉(zhuǎn)染試劑,將PDXK、VDAC2、RhoGDI-α、TM4、β-sncb基因的siRNA轉(zhuǎn)染入大鼠腎上腺嗜鉻瘤細胞(PC12細胞),RT-PCR技術(shù)篩選出最佳干擾序列；24h時用免疫細胞化學染色觀察細胞內(nèi)五種蛋白表達情況、MTT法檢測五種基因干擾對PC12細胞增殖和細胞形態(tài)及數(shù)量的影響。 [結(jié)果] 1、PDXK基因干擾結(jié)果：Si-r-PDXK_1組與siRNA SCR組相比,PDXK mRNA表達明顯被抑制,胞漿內(nèi)PDXK蛋白表達明顯下降,而Si-r-PDXK_2組和Si-r-PDXK_3組與siRNA SCR組相比PDXK mRNA表達未被抑制(P0.05),說明Si-r-PDXK_1能有效干擾靶基因PDXK表達水平。MTT檢測及細胞計數(shù)結(jié)果顯示Si-r-PDXK_1組終濃度為80nM、100nM組細胞活力明顯降低且細胞數(shù)量明顯減少(P0.05)。 2、VDAC2基因干擾結(jié)果：與siRNA SCR組相比,Si-r-VDAC2_1、2、3各濃度組VDAC2 mRNA均表達明顯被抑制(P0.05); MTT檢測結(jié)果顯示Si-r-VDAC2_1終濃度為100nM、Si-r-VDAC2_3終濃度為50nM組別細胞活力與siRNA SCR組細胞活力相比均減低(P0.05)；細胞計數(shù)結(jié)果顯示Si-r-VDAC2 3終濃度為50nM與siRNA SCR組細胞數(shù)比較,Si-r-VDAC2_3終濃度為50nM組別細胞數(shù)量明顯減少(P0.05)。 3、RhoGDI-α基因干擾結(jié)果：與siRNA SCR組比較,Si-r-RhoGDI-α_1終濃度為50nM、100nM, Si-r-RhoGDI-α_2終濃度為100nM, Si-r-RhoGDI-α_3終濃度為50nM、100nM對RhoGDI-αmRNA表達均具有抑制作用(P0.05)；但Si-r-RhoGDI-a_1、2、3干擾對細胞活力及細胞數(shù)量無明顯影響(P0.05)。 4、TM4基因干擾結(jié)果：與siRNA SCR組比較,Si-r-TM4_2終濃度為80nM及Si-r-TM4_3終濃度為50nM、80nM、100nM對TM4 mRNA的表達具有抑制作用(P0.05)；MTT檢測結(jié)果提示Si-r-TM4_1終濃度為50nM組和Si-r-TM4_3終濃度為80nM及100nM組細胞活力與siRNA SCR組細胞活力相比均減低(P0.05)。細胞計數(shù)結(jié)果提示Si-r-TM4_1終濃度為50nM、80nM及Si-r-TM4_3終濃度為50nM、80nM、100nM與siRNA SCR組比較,細胞數(shù)量明顯減少(P0.05)。 5、β-sncb基因干擾結(jié)果：MTT檢測結(jié)果提示,Si-r-β-sncb_2終濃度為50nM組別及Si-r-β-sncb_3終濃度為100nM組別細胞活力與siRNA SCR組細胞活力相比均減低(P0.05)；細胞計數(shù)結(jié)果提示Si-r-β-sncb_3終濃度為80nM與siRNASCR組比較,數(shù)量明顯減少(P0.05)。 [結(jié)論] 特異性siRNA在相應干擾序列和相應濃度下,可有效降低PC12細胞PDXK、VDAC2、RhoGDI-a、TM4、β-sncb基因表達,其中PDXK、VDAC2、TM4、β-sncb表達降低后可明顯抑制PC12細胞增殖及生長。然而盡管RhoGDI-a基因被有效干擾,但對PC12細胞生長沒有明顯影響。本實驗不僅建立了體外RNA干擾技術(shù),而且利用該技術(shù)發(fā)現(xiàn)四種基因能影響PC12細胞存活及生長,從而為研究損傷狀態(tài)下這些基因的體內(nèi)功能提供了前期實驗證據(jù)。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：昆明醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2011
【分類號】：R346

【參考文獻】

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本文編號：1765756