本文選題：骨髓間充質(zhì)干細胞 + 燙傷�。� 參考：《新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)》2012年碩士論文

【摘要】：研究目的：建立倉鼠BMSCs穩(wěn)定的擴增方法。通過動物實驗，探索簡單方便、易于控制且重復(fù)性高的燙傷動物模型建立方法，摸索對倉鼠皮膚的燙傷時間、燙傷程度以及燙傷面積的方法控制，通過對皮膚肥大細胞糜蛋白酶的檢測從而探討骨髓間充質(zhì)干細胞移植后對皮膚深Ⅱ度燙傷機理研究。方法：采用全骨髓培養(yǎng)法從幼年倉鼠骨髓中分離BMSCs，進行純化、擴增。通過對培養(yǎng)細胞形態(tài)及生物學(xué)特性的觀察，確立穩(wěn)定的擴增體系，并鑒定P5代細胞。取健康成年倉鼠9只，用氯胺酮（45mg/kg）腹腔麻醉，待動物麻醉后，背部用硫化鈉脫毛劑備皮，分為65℃12秒，75℃12秒，85℃12秒三個創(chuàng)面組，每組3只；用直徑為3cm去底的50ml注射器置于動物背部，每只按各個時間組20ml熱水進行燙傷，于燙傷后30min觀察創(chuàng)面變化，并于燙傷后12小時將每組的創(chuàng)面取材行組織學(xué)檢查，并對模型進行比較，找出制作深Ⅱ度燙傷模型的條件。將40只倉鼠復(fù)制皮膚深Ⅱ度燙傷模型并隨機分為：干細胞移植組（A組n=20）和模型對照組（B組n=20），將體外培養(yǎng)至第5代的BMSCs，數(shù)目為1×10~7個/ml,通過局部皮下注射加表面涂抹上清的方法移植至干細胞移植組燙傷部位，對照組給予等量的生理鹽水，觀察創(chuàng)面變化、肉芽組織生長和創(chuàng)面愈合情況;分別于移植后1,3,7,14天每組5只取組織標本按常規(guī)方法作蘇木精一伊紅(HE)染色進行組織學(xué)觀察。取不同時間點創(chuàng)面組織，通過PCR技術(shù)對皮膚肥大細胞糜蛋白酶表達水平檢測。結(jié)果：采用全骨髓法分離培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細胞，獲得的細胞數(shù)量多，細胞貼壁后增殖較為迅速，BMSCs約3-5日形成成纖維樣細胞集落，原代細胞鋪滿整個培養(yǎng)瓶所需時間為7d左右，原代細胞純度不高，傳代后，可獲得純度較高的BMSCs。對三種模型制作方法的觀察，85℃12秒組12小時后全部死亡，65℃12秒與75℃12秒組全部存活，但75℃12秒組精神狀態(tài)較差，通過組織病理觀察，65℃12秒組未能達到深Ⅱ度燙傷要求，而75℃12秒組符合深Ⅱ度燙傷模型要求。對干細胞移植組與對照組創(chuàng)面愈合觀察，兩組動物皮膚經(jīng)深Ⅱ度燙傷即刻，皮膚紅腫，6h后，表皮灰白。燙傷24h，表皮開始變硬，72h干細胞移植組皮膚開始形成焦痂，A、B兩組在結(jié)痂時間上差異不顯著（P0.05）。在愈合率方面，以90%為愈合參照標準，燙傷后14d，A、B兩組間差異具有顯著性（P0.05）。燙傷后第7d，鏡下觀察A組成纖維細胞，毛細血管數(shù)量較B組豐富，并有少量的膠原組織形成。14d時，與對照組相比成纖維細胞數(shù)量，毛細血管組織明顯增多，并形成肉芽組織層，膠原大量沉積。對燙傷后創(chuàng)面1、3、7、14d的組織通過PCR的方法進行糜蛋白酶基因檢測，均檢測出糜蛋白酶基因，在基因檢出方面兩組差異不顯著（P0.05）。但通過對糜蛋白酶各檢測時間點mRNA水平比較，，第3d處于最高表達，與對照組相比，移植組7、14d的mRNA水平存在顯著性差異（P0.05）。結(jié)論：本研究建立了體外分離純化、培養(yǎng)擴增倉鼠骨髓MSCs的方法。通過動物實驗，得到一種簡單方便、易于控制且重復(fù)性高的燙傷動物模型制作方法。通過干細胞移植證明BMSCs能促進創(chuàng)面愈合；皮膚肥大細胞糜蛋白酶可能參與了創(chuàng)面愈合過程。
[Abstract]:Objective : To establish a stable method for the treatment of skin deep 鈪

本文編號：1752927