本文選題：細(xì)胞編程 + 逆轉(zhuǎn)錄病毒�。� 參考：《南方醫(yī)科大學(xué)》2012年博士論文

【摘要】：研究背景和目的 心血管疾病是威脅人類(lèi)健康的“頭號(hào)殺手”,占疾病死亡原因的35%,而心肌梗死和心力衰竭是心血管疾病死亡的主要原因。心肌梗死是由于冠狀動(dòng)脈血管閉塞,導(dǎo)致心臟血液供應(yīng)中斷,形成以心肌細(xì)胞損傷、壞死為特征的疾病。心力衰竭是心肌細(xì)胞收縮和(或)舒張功能障礙,引起心輸出量降低為特征的一類(lèi)疾病。心肌梗死患者由于冠狀動(dòng)脈血管閉塞導(dǎo)致梗死區(qū)域內(nèi)的心肌細(xì)胞壞死,周?chē)毖獏^(qū)域內(nèi)的心肌細(xì)胞損傷,部分心肌細(xì)胞發(fā)生凋亡,從而造成有功能心肌細(xì)胞數(shù)目減少,由于心肌細(xì)胞缺乏必要的增殖分化能力,只能由成纖維細(xì)胞填充替代,形成瘢痕組織、心室壁變薄、室壁瘤形、心室重構(gòu)、心臟收縮舒張功能減退、心電活動(dòng)紊亂等原因,最終可導(dǎo)致患者死亡。目前實(shí)施的藥物靜脈溶栓治療、冠狀動(dòng)脈介入治療、冠狀動(dòng)脈旁路搭橋手術(shù),心力衰竭再同步化治療均無(wú)法使已經(jīng)壞死或纖維化的心肌細(xì)胞恢復(fù)正常功能。心臟移植雖然是晚期心力衰竭最有效的方法,但是面臨著供體器官短缺、醫(yī)療費(fèi)用昂貴、手術(shù)要求高、自體免疫排斥反應(yīng)等一系列的問(wèn)題,因此,在臨床實(shí)踐過(guò)程中受到了很大限制。干細(xì)胞是一種未分化的多潛能細(xì)胞,具有自我更新、無(wú)限增殖和多向分化潛能,干細(xì)胞移植治療可以修復(fù)損傷壞死心肌細(xì)胞,為心血管疾病患者的治療帶來(lái)新的希望,如心肌梗死、心力衰竭、心肌病、完全性房室傳導(dǎo)阻滯及病態(tài)竇房結(jié)綜合癥等患者。 1981年Evnas和Martin研究小組首先建立了小鼠胚胎干細(xì)胞系,1998年Thomson和Shamblott研究小組分別利用人類(lèi)體外受精囊胚和流產(chǎn)胎兒首次建立人類(lèi)胚胎干細(xì)胞(Embryonic stem cells,ES)。隨后一些研究發(fā)現(xiàn)人類(lèi)胚胎干細(xì)胞可以被誘導(dǎo)分化為神經(jīng)細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、心肌細(xì)胞、造血細(xì)胞等200多種細(xì)胞。1999年Bjornson等將鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)的神經(jīng)干細(xì)胞橫向分化為血細(xì)胞,進(jìn)一步證明了成體干細(xì)胞同樣具有橫向分化潛能。根據(jù)干細(xì)胞的不同發(fā)育階段,目前可將其劃分為：①胚胎干細(xì)胞；②成體干細(xì)胞,包括造血干細(xì)胞、骨髓間質(zhì)干細(xì)胞、肌肉干細(xì)胞、脂肪干細(xì)胞等。根據(jù)干細(xì)胞的分化潛能,又可將其劃分為：①全能干細(xì)胞；②多能干細(xì)胞；③單能干細(xì)胞。胚胎干細(xì)胞和成體干細(xì)胞是干細(xì)胞移植治療心血管疾病的兩種候選細(xì)胞。胚胎干細(xì)胞為多潛能干細(xì)胞,可以分化為多種類(lèi)型的心肌細(xì)胞,因受到倫理學(xué)問(wèn)題的限制,目前僅限于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。成體干細(xì)胞具有橫向分化潛能,在一定條件下培養(yǎng)可以分化為心肌細(xì)胞�；颊咦陨沓审w干細(xì)胞移植克服了免疫排斥反應(yīng)和倫理學(xué)問(wèn)題的爭(zhēng)論,是干細(xì)胞移植治療心血管疾病的種子細(xì)胞,但是,在臨床應(yīng)用過(guò)程中也面臨著許多問(wèn)題有待于進(jìn)一步解決。 細(xì)胞編程是將已分化成熟的體細(xì)胞在體外編程后,將其逆轉(zhuǎn)為一種未分化狀態(tài),被逆轉(zhuǎn)后的細(xì)胞具有多能性。細(xì)胞多能性是指其能夠分化為機(jī)體內(nèi)多種細(xì)胞類(lèi)型的潛能。誘導(dǎo)性多潛能干細(xì)胞是近年來(lái)干細(xì)胞領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。2006年8月日本京都大學(xué)Yamanaka研究小組首次將小鼠成纖維細(xì)胞誘導(dǎo)為多潛能干細(xì)胞(Induced pluripotent stem cells,iPS),簡(jiǎn)稱(chēng)"iPS細(xì)胞”。iPS細(xì)胞是將已分化成熟體細(xì)胞重編程為類(lèi)似于胚胎干樣細(xì)胞(Embryonic Stem Cells,ES)。iPS細(xì)胞不僅在細(xì)胞形態(tài)、表面抗原、基因表達(dá)、增殖及分化潛能方面類(lèi)似于胚胎干細(xì)胞,而且,擺脫了圍繞人類(lèi)胚胎干細(xì)胞使用問(wèn)題的政治和倫理爭(zhēng)論,避免了患者異體干細(xì)胞移植引起的免疫排斥反應(yīng)等優(yōu)點(diǎn),為干細(xì)胞移植治療心血管疾病提供了新的思路和方法。建立iPS細(xì)胞大致包括以下主要環(huán)節(jié)：①選擇體細(xì)胞及編程因子；②將編程因子轉(zhuǎn)染入體細(xì)胞內(nèi)；③體細(xì)胞的培養(yǎng)和編程；④iPS細(xì)胞的篩選；⑤iPS細(xì)胞的鑒定。 2009年我國(guó)科學(xué)家利用四倍體囊胚注射法得到了iPS細(xì)胞來(lái)源的小鼠,首次證明了iPS細(xì)胞具有多向分化潛能。這一研究成果表明,iPS細(xì)胞可以分化為所有類(lèi)型的心臟細(xì)胞,可用于心血管疾病的干細(xì)胞治療。干細(xì)胞移植治療心血管疾病的種子細(xì)胞應(yīng)該具備以下特點(diǎn)：①來(lái)源充足,取材方便,易被患者接受；②移植后患者無(wú)自身免疫排斥反應(yīng),并具有良好的生物安全性；③無(wú)社會(huì)倫理學(xué)問(wèn)題的爭(zhēng)議。本實(shí)驗(yàn)首先,利用酶消化法原代培養(yǎng)UMC細(xì)胞,組織塊貼壁法原代培HSF細(xì)胞。其次,以逆轉(zhuǎn)錄病毒介導(dǎo)系統(tǒng)作為外源性基因(Sox2、K1f4、Oct4、c-Myc)轉(zhuǎn)移載體,將UMC細(xì)胞和HSF細(xì)胞體外誘導(dǎo)為iPS細(xì)胞。最后,對(duì)建立的iPS細(xì)胞系進(jìn)行基因表達(dá)量檢測(cè)、細(xì)胞核型分析、ES細(xì)胞特異性蛋白質(zhì)檢測(cè)、體內(nèi)分化畸胎瘤、體外分化擬胚體等實(shí)驗(yàn),對(duì)iPS細(xì)胞的生物學(xué)特性進(jìn)行鑒定。 研究方法 1人誘導(dǎo)性多潛能干細(xì)胞的建立 1.1原代培養(yǎng)UMC和HSF細(xì)胞手術(shù)切取正常新生兒臍帶(1例)和急性心肌梗死患者皮膚(1例),利用酶消化法原代分離培養(yǎng)UMC細(xì)胞,組織塊貼壁法原代分離培養(yǎng)HSF細(xì)胞。 1.2制備CF-1小鼠胚胎成纖維細(xì)胞(MEF)滋養(yǎng)層選擇一只孕13.5天CF-1小鼠,分離胚胎組織,用剪刀將其剪碎,利用0.15%胰酶消化15分鐘,分離成纖維細(xì)胞。擴(kuò)增原代培養(yǎng)的MEF細(xì)胞至P3代,應(yīng)用10ug/ml濃度的絲裂霉素C工作液處理P3代細(xì)胞3小時(shí)。最后將新制備的MEF飼養(yǎng)層細(xì)胞進(jìn)行凍存,以備日后應(yīng)用。 1.3包裝生產(chǎn)逆轉(zhuǎn)錄病毒復(fù)蘇凍存293T細(xì)胞,細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)100%進(jìn)行分盤(pán),質(zhì)粒轉(zhuǎn)染前分盤(pán)后293T細(xì)胞生長(zhǎng)密度應(yīng)達(dá)到80%-85%左右。應(yīng)用磷酸鈣法將pMX-hOCT-4、pMX-hSOX-2、pMX-hKLF-4、pMX-hc-MYC、pMX-GFP及pCL包裝質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染到293T細(xì)胞內(nèi),12-16小時(shí)更換培養(yǎng)液,包裝生產(chǎn)攜帶外源性目的基因的逆轉(zhuǎn)錄病毒上清液,36-48小時(shí)收集病毒感染UMC和HSF細(xì)胞。 1.4收集病毒感染UMC和HSF細(xì)胞復(fù)蘇凍存UMC和HSF細(xì)胞,按4×104/每孔密度將UMC和HSF細(xì)胞分盤(pán)到六孔板中。收集包裝生產(chǎn)逆轉(zhuǎn)錄病毒上清液,經(jīng)0.45um濾過(guò)膜過(guò)濾,加入polybrene(8ug/ml)混勻,分別感染UMC和HSF細(xì)胞。 1.5病毒感染后UMC和HSF細(xì)胞培養(yǎng)病毒感染第2天將細(xì)胞培養(yǎng)基更換為DFBS培養(yǎng)基,第6天將感染后的UMC和HSF細(xì)胞接種到MEF飼養(yǎng)層細(xì)胞培養(yǎng),第18天將DFBS培養(yǎng)基更換為KSR培養(yǎng)基。 1.6挑取iPS細(xì)胞克隆挑取iPS細(xì)胞克隆前一天,復(fù)蘇MEF飼養(yǎng)層細(xì)胞到12孔板,第2天更換為KSR培養(yǎng)基。挑取iPS細(xì)胞克隆前,制作圓頭和斷口吸管,在顯微鏡下選取形態(tài)上類(lèi)似于ES樣的iPS細(xì)胞,應(yīng)用圓頭吸管切割細(xì)胞克隆,用斷頭吸管將切割好的細(xì)胞克隆吸出,移入鋪有MEF飼養(yǎng)層的12孔板中 1.7飼養(yǎng)層和無(wú)飼養(yǎng)層培養(yǎng)系統(tǒng)培養(yǎng)iPS細(xì)胞將被挑取的iPS細(xì)胞克隆接種到MEF飼養(yǎng)層細(xì)胞進(jìn)行純化和擴(kuò)增培養(yǎng)。將在飼養(yǎng)層細(xì)胞培養(yǎng)的iPS細(xì)胞,再接種到無(wú)飼養(yǎng)層培養(yǎng)系統(tǒng)進(jìn)行培養(yǎng),提取iPS細(xì)胞DNA和RNA檢測(cè)細(xì)胞基因表達(dá)量水平。 2人誘導(dǎo)性多潛能干細(xì)胞的鑒定 2.1基因表達(dá)量應(yīng)用RT-PCR方法檢測(cè)iPS細(xì)胞外源性基因Sox2、Klf4、 c-Myc和內(nèi)源性基因Oct4、Rex1、Sox2的相對(duì)表達(dá)量。 2.2外源性基因插入鑒定應(yīng)用1%瓊脂糖凝膠電泳法鑒定外源性基因Sox2、Klf4、Oct4、c-Myc是否被插入到iPS細(xì)胞核內(nèi)。 2.3iPS細(xì)胞核型分析應(yīng)用G顯帶核型分析法對(duì)iPS細(xì)胞進(jìn)行核型分析,判斷體細(xì)胞被重編程為iPS細(xì)胞后能否保持正常的細(xì)胞核型。 2.4iPS細(xì)胞堿性磷酸酶(Alkaline phosphatasee, AP)染色檢測(cè)iPS細(xì)胞堿性磷酸酶活性。 2.5iPS細(xì)胞免疫熒光染色檢測(cè)iPS細(xì)胞是否表達(dá)ES細(xì)胞特異性膜蛋白(SSEA3、SSEA4)、質(zhì)蛋白(TRA-1-60、TRA-1-81)和核蛋白(Nanog) 2.6Nanog、Oct4甲基化測(cè)序應(yīng)用DNA甲基化測(cè)序法檢測(cè)iPS細(xì)胞的Nanog、Oct4基因是否發(fā)生了去甲基化反應(yīng)。 2.7體內(nèi)分化畸胎瘤實(shí)驗(yàn)將iPS細(xì)胞分別注射到SCID小鼠背部和大腿內(nèi)側(cè),兩個(gè)月后觀察是否有畸胎瘤形成,并對(duì)形成的畸胎瘤實(shí)體進(jìn)行組織切片蘇木精-伊紅染色(Hematoxylin-eosin staining, HE)判斷iPS細(xì)胞是否具有向三胚層組織細(xì)胞分化的潛能。 2.8體外分化擬胚體實(shí)驗(yàn)iPS細(xì)胞在體外先懸浮培養(yǎng)形成擬胚體,然后進(jìn)行貼壁擴(kuò)增培養(yǎng)。裂解擬胚體細(xì)胞提取細(xì)胞RNA,應(yīng)用RT-PCR方法檢測(cè)內(nèi)源性基因(Nanog、Oct-4)、內(nèi)胚層基因(AFP、GATA4、SOX17)、中胚層基因(TBX1)、外胚層基因(PAX6、SOX1)的相對(duì)表達(dá)量。 研究結(jié)果 1iPS細(xì)胞的建立 1.1原代培養(yǎng)UMC、HSF細(xì)胞利用酶消化法在體外成功分離培養(yǎng)出UMC細(xì)胞,應(yīng)用皮膚組織塊貼壁法在體外成功分離培養(yǎng)出HSF細(xì)胞。 1.2制備MEF飼養(yǎng)層細(xì)胞應(yīng)用絲裂霉素C處理P3代CF-1小鼠胚胎成纖維細(xì)胞3小時(shí)。鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)未發(fā)生改變、細(xì)胞無(wú)大量死亡、細(xì)胞數(shù)量未增加,表明細(xì)胞在保持生存能力的同時(shí),細(xì)胞增殖能力又受到了有效抑制。 1.3包裝生產(chǎn)逆轉(zhuǎn)錄病毒應(yīng)用磷酸鈣法成功的將外源性基因Sox2、Klf4、 Oct4、c-Myc轉(zhuǎn)染到293T細(xì)胞內(nèi),293T細(xì)胞包裝生產(chǎn)攜帶目的基因的逆轉(zhuǎn)錄病毒上清液。 1.4收集病毒感染UMC和HSF細(xì)胞收集包裝生產(chǎn)的逆轉(zhuǎn)錄病毒上清液分兩次感染UMC和HSF細(xì)胞,體細(xì)胞成功的被攜帶目的基因的逆轉(zhuǎn)錄病毒上清液感染。 1.5病毒感染后UMC和HSF細(xì)胞培養(yǎng)病毒感染細(xì)胞第4-5天,UMC和HSF細(xì)胞形態(tài)發(fā)生改變,呈類(lèi)圓形,細(xì)胞發(fā)生聚集；第10-12天,在MEF飼養(yǎng)層細(xì)胞培養(yǎng)的UMC和HSF細(xì)胞出現(xiàn)iPS樣細(xì)胞克隆增生；隨著細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間的推移,iPS細(xì)胞克隆體積不斷增大、邊緣清晰,周?chē)休^多雜細(xì)胞。 1.6挑取iPS細(xì)胞克隆病毒感染第28-30天,在顯微鏡下分別挑取5株UMC和3株HSF細(xì)胞來(lái)源的iPS細(xì)胞克隆,分別命名為UMC-iPS-C1、 UMC-iPS-C2、UMC-iPS-C3、UMC-iPS-C4、UMC-iPS-C5、HSF-iPS-C1、 HSF-iPS-C2、HSF-iPS-C3。 1.7飼養(yǎng)層和無(wú)飼養(yǎng)層培養(yǎng)系統(tǒng)培養(yǎng)iPS細(xì)胞iPS細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好,細(xì)胞呈球形,形態(tài)均一,克隆聚集成團(tuán),邊緣整齊。在iPS細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中,及時(shí)處理了已發(fā)生分化、衰老和死亡的iPS細(xì)胞。 2iPS細(xì)胞的鑒定 2.1iPS細(xì)胞基因相對(duì)表達(dá)量①iPS細(xì)胞內(nèi)源性多能基因Nanog、Oct4、 Rex1、Sox2的相對(duì)表達(dá)量,明顯高于編程前UMC和HSF細(xì)胞,并與ES細(xì)胞基因表達(dá)譜相類(lèi)似。②外源性編程基因Sox2、Klf4、Oct4、c-Myc在iPS細(xì)胞表達(dá)量明顯低于病毒感染第6天的UMC和HSF細(xì)胞,其中,UMC-iPS-C2、 UMC-iPS-C3、HSF-iPS-C1、HSF-iPS-C3細(xì)胞克隆外源性基因沉默相對(duì)較好,被選入下一輪的iPS細(xì)胞鑒定實(shí)驗(yàn)。 2.2外源性基因插入鑒定1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性,表明外源性基因Sox2、Klf4、Oct4、c-Myc被插入到iPS細(xì)胞核內(nèi)。 2.3iPS細(xì)胞核型分析G帶核型分析結(jié)果顯示,4株iPS細(xì)胞系均為46條染色體、XY型,細(xì)胞核型均正常。 2.4AP染色①挑取iPS細(xì)胞克隆后,對(duì)剩余細(xì)胞進(jìn)行AP染色,初步判斷本次實(shí)驗(yàn)UMC和HSF細(xì)胞編程效率分別為1.84%和0.89%。②對(duì)在MEF飼養(yǎng)層細(xì)胞培養(yǎng)的iPS細(xì)胞進(jìn)行AP染色,iPS細(xì)胞被染成深紫色為陽(yáng)性；飼養(yǎng)層細(xì)胞和其它細(xì)胞被染色粉紅色或沒(méi)被染色為陰性。 2.5ES細(xì)胞特異性蛋白質(zhì)表達(dá)檢測(cè)iPS細(xì)胞抗原抗體免疫熒光反應(yīng),膜蛋白(SSEA3、SSEA4)被染成紫藍(lán)色,質(zhì)蛋白(TRA-1-60、TRA-1-81),核蛋白(Nanog)被染成藍(lán)綠色,細(xì)胞染色均為陽(yáng)性,說(shuō)明iPS細(xì)胞表達(dá)ES細(xì)胞特異性蛋白質(zhì)。 2.6Nanog、Oct4基因甲基化測(cè)序細(xì)胞編程前UMC和HSF細(xì)胞內(nèi)源性基因Nanog、Oct-4處于甲基化狀態(tài),而細(xì)胞被編程為iPS細(xì)胞后,Nanog、Oct-4基因發(fā)生了去甲基化反應(yīng)。 2.7畸胎瘤實(shí)驗(yàn)及組織切片檢查四株iPS細(xì)胞被注射到SCID小鼠體內(nèi)均形成畸胎瘤實(shí)體,組織切片HE染色顯示包含內(nèi)胚層、中胚層、外胚層組織細(xì)胞。 2.8擬胚體實(shí)驗(yàn)及基因相對(duì)表達(dá)量iPS細(xì)胞在體外懸浮培養(yǎng),細(xì)胞聚集成團(tuán)塊狀,形成擬胚體,再貼壁培養(yǎng)細(xì)胞團(tuán)塊。裂解細(xì)胞提取RNA, RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示,內(nèi)源性基因Nanog、Oct4表達(dá)量降低,內(nèi)胚層基因(AFP、GATA4、 SOX17)、中胚層基因(TBX1)、外胚層基因(PAX6、SOXl)表達(dá)量發(fā)生明顯差異。 研究結(jié)論 1以O(shè)ct-4、Sox-2、c-Myc、Klf-4作為編程基因,通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)基因技術(shù),成功的將原代培養(yǎng)UMC和HSF細(xì)胞在體外誘導(dǎo)為iPS細(xì)胞。 2對(duì)iPS細(xì)胞的生物學(xué)鑒定顯示,細(xì)胞在形態(tài)學(xué)、基因相對(duì)表達(dá)量、堿性磷酸酶活性、ES細(xì)胞特異性蛋白質(zhì)表達(dá)及細(xì)胞分化潛能等方面類(lèi)似于ES細(xì)胞。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類(lèi)號(hào)】：R329

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2 王紅潔;;K562、U937細(xì)胞中過(guò)表達(dá)PTPalpha引起的細(xì)胞表型變化和基因、蛋白表達(dá)的差異[A];華東六省一市生物化學(xué)與分子生物學(xué)學(xué)會(huì)2006年學(xué)術(shù)交流會(huì)論文集[C];2006年

3 ;傳染免疫[A];第七屆全國(guó)免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)論文集[C];2010年

4 楊曉紅;李華;柳惠圖;;蛋白激酶C βⅠ亞類(lèi)的過(guò)表達(dá)對(duì)NRK細(xì)胞表型及生長(zhǎng)的影響[A];中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會(huì)第五次會(huì)議論文摘要匯編[C];1992年

5 江宏兵;田衛(wèi)東;陳希哲;湯煒;劉磊;李曉東;;誘導(dǎo)顱神經(jīng)嵴向第一鰓弓外胚間充質(zhì)細(xì)胞分化的實(shí)驗(yàn)研究[A];2004年中國(guó)口腔頜面修復(fù)重建外科學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2004年

6 蔣敬庭;吳昌平;鄧海峰;陸明洋;李敏;徐斌;王赫;吳駿;季枚;趙偉慶;Ning Xu;Peter Nilsson-Ehle;;CIK細(xì)胞技術(shù)平臺(tái)的建立及臨床應(yīng)用[A];第九屆全國(guó)腫瘤生物治療學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2006年

7 林旭明;趙靖;史偉云;;兔角膜基質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)在羊膜上保持細(xì)胞表型的實(shí)驗(yàn)研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十二屆全國(guó)眼科學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編[C];2007年

8 趙春華;;多潛能干細(xì)胞生物學(xué)及表觀遺傳學(xué)調(diào)控機(jī)制研究[A];第13屆全國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會(huì)議論文摘要[C];2011年

9 ;自身免疫病[A];第七屆全國(guó)免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)論文集[C];2010年

10 李珍;焦艷梅;崔蓮仙;吳昊;何維;;HIV急性感染者外周血中γδT細(xì)胞表型及功能的變化[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第五次全國(guó)艾滋病、病毒性丙型肝炎暨全國(guó)熱帶病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2011年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 張獻(xiàn)懷;我國(guó)創(chuàng)傷修復(fù)研究取得新進(jìn)展[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2009年

2 記者　應(yīng)洪舒;圍繞胚胎后亞全能干細(xì)胞理論的相關(guān)研究完成[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2006年

3 張獻(xiàn)懷;我國(guó)創(chuàng)傷修復(fù)研究和臨床治療獲新進(jìn)展[N];大眾科技報(bào);2009年

4 張獻(xiàn)懷;我國(guó)創(chuàng)傷修復(fù)研究和臨床治療取得新進(jìn)展[N];科技日?qǐng)?bào);2009年

5 周勇;北京大學(xué)T淋巴細(xì)胞發(fā)育研究獲新成果[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2007年

6 本報(bào)記者 劉霞;誘導(dǎo)多功能干細(xì)胞遭遇“成長(zhǎng)煩惱”[N];科技日?qǐng)?bào);2011年

7 王潤(rùn)華;幽門(mén)螺桿菌是胃癌“幫兇”[N];健康報(bào);2007年

8 王潤(rùn)華;幽門(mén)螺桿菌是胃癌“幫兇”[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2007年

9 崔昕;表觀遺傳機(jī)制重大研究計(jì)劃啟動(dòng)[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2008年

10 本報(bào)記者 李天舒　胡德榮;捕捉一等獎(jiǎng)“閃光點(diǎn)”[N];健康報(bào);2010年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 張寧;邊緣群細(xì)胞在肝癌發(fā)生和轉(zhuǎn)移中的作用研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2010年

2 萬(wàn)亞鋒;肝細(xì)胞癌AFPmRNA轉(zhuǎn)染CD40配體活化的B細(xì)胞誘導(dǎo)抗腫瘤免疫的實(shí)驗(yàn)研究[D];華中科技大學(xué);2010年

3 盧燕來(lái);人γδT細(xì)胞對(duì)A型流感病毒血凝素蛋白及假病毒的免疫應(yīng)答研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2011年

4 楊麗娟;Th17細(xì)胞抗腫瘤作用及其機(jī)制研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2010年

5 艾民;人誘導(dǎo)性多潛能干細(xì)胞的建立和鑒定[D];南方醫(yī)科大學(xué);2012年

6 周瑞;H-T-SCID嵌合體動(dòng)物模型中EBV誘導(dǎo)的CD8~+NKT細(xì)胞抗EBV相關(guān)腫瘤研究[D];武漢大學(xué);2010年

7 孫健;中國(guó)地區(qū)2371例淋巴組織腫瘤分布特點(diǎn)的分析及原發(fā)性腸道T細(xì)胞及NK細(xì)胞淋巴瘤的臨床病理及分子生物學(xué)特點(diǎn)的研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2011年

8 鮑嫣;新型B細(xì)胞亞群的發(fā)現(xiàn)及其免疫調(diào)控功能與機(jī)制的研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2010年

9 周靜;牙髓、牙周組織中骨髓來(lái)源細(xì)胞特性的實(shí)驗(yàn)研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2010年

10 許杰;小鼠iPS細(xì)胞的誘導(dǎo)以及白血病抑制因子在細(xì)胞重編程過(guò)程中的作用機(jī)制研究[D];華中科技大學(xué);2010年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 劉曉芳;細(xì)胞間接觸在誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向平滑肌細(xì)胞分化中作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2010年

2 季亞娟;冠心病患者外周血T細(xì)胞亞群和NK細(xì)胞的變化相關(guān)性及臨床意義研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2010年

3 張艷;CHL瘤細(xì)胞與背景CD4~+T細(xì)胞關(guān)系的研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2010年

4 劉華;胸腺基質(zhì)淋巴生成素對(duì)肺癌患者輔助性T細(xì)胞極化的影響[D];天津醫(yī)科大學(xué);2010年

5 黃方;結(jié)核菌素純蛋白衍生物刺激人γδT細(xì)胞效應(yīng)分析[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2011年

6 崔瑩瑩;凍融抗原負(fù)載的DC-CIK細(xì)胞對(duì)SKOV3的殺傷作用[D];山東大學(xué);2010年

7 陶盛能;CD4~+CD25~+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞和再生障礙性貧血之間的關(guān)系[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2010年

8 丁景弦;Huh7細(xì)胞中邊緣群細(xì)胞分選及其增殖分裂能力的研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2010年

9 譚琳;慢性NK細(xì)胞淋巴增殖性疾病一例報(bào)告及文獻(xiàn)復(fù)習(xí)[D];中國(guó)醫(yī)科大學(xué);2010年

10 任玲玲;TLR3和TLR7/8對(duì)小鼠妊娠子宮免疫功能的影響機(jī)制研究[D];暨南大學(xué);2011年

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本文編號(hào)：1742372