本文選題：間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)　切入點(diǎn)：成神經(jīng)分化　出處：《蘇州大學(xué)》2011年碩士論文

【摘要】：中樞神經(jīng)系統(tǒng)(central nervous system, CNS)損傷后的功能恢復(fù)非常困難,主要原因是腦內(nèi)神經(jīng)元的再生能力差。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow-derived mesenchymal stem cells, BM-MSCs/MSCs)可在自體獲得且能在體外穩(wěn)定擴(kuò)增,并可誘導(dǎo)分化成神經(jīng)細(xì)胞,有望用于神經(jīng)系統(tǒng)疾病的治療,故骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)細(xì)胞分化相關(guān)的基礎(chǔ)研究是十分重要的。移植MSCs治療CNS損傷包括兩個(gè)重要的因素:MSCs定向遷移至損傷部位;MSCs的成神經(jīng)分化。 體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)可以誘導(dǎo)MSCs的遷移;在病理狀態(tài)下,損傷區(qū)域會(huì)釋放大量VEGF,誘導(dǎo)MSCs向損傷區(qū)域的遷移。VEGF和細(xì)胞膜上的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體(vascular endothelial growth factor receptor, VEGFR)結(jié)合,激活細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(extracelluar signal regulated kinases-1/2, ERK1/2)、應(yīng)激活化蛋白激酶/c-Jun氨基末端激酶(stress-activated protein kinase/c-Jun NH2-terminal kinase, SAPK/JNK)、p38MAPK和磷脂酰肌醇3激酶/Akt(phosphatidylinositol 3-kinase/Akt, PI3K/Akt)信號(hào)通路,進(jìn)而介導(dǎo)細(xì)胞的增殖、分化和遷移。 本實(shí)驗(yàn)室的前期研究結(jié)果顯示,不同分化狀態(tài)的MSCs向C6膠質(zhì)瘤條件培養(yǎng)基和SDF-1alpha遷移的細(xì)胞數(shù)不同,因此我們猜測(cè)MSCs的分化狀態(tài)影響它們的趨化性遷移,為了進(jìn)一步驗(yàn)證MSCs的成神經(jīng)分化狀態(tài)和其遷移行為之間的關(guān)系,我們利用Dunn chamber和Boyden chamber檢測(cè)了成神經(jīng)分化不同階段的MSCs向VEGF的定向遷移行為,同時(shí)Western blot檢測(cè)了和MSCs遷移密切相關(guān)的PI3K/Akt和MAPKs通路對(duì)VEGF的應(yīng)答。 我們采用Percoll分離法在體外培養(yǎng)并擴(kuò)增大鼠骨髓來(lái)源MSCs,應(yīng)用抗氧化劑誘導(dǎo)方案誘導(dǎo)MSCs向神經(jīng)樣細(xì)胞分化,運(yùn)用Dunn chamber從個(gè)體水平研究分化細(xì)胞在VEGF濃度梯度下的遷移速率、遷移效率和遷移軌跡。接著,我們運(yùn)用Boyden chamber從群體水平研究MSCs在成神經(jīng)分化過(guò)程中的趨化性遷移(Chemotaxis)和隨機(jī)運(yùn)動(dòng)(Chemokinesis)。Boyden chamber結(jié)果顯示,下室加入不同濃度VEGF后,不同狀態(tài)細(xì)胞向同一濃度VEGF遷移的數(shù)量不同,不同濃度VEGF誘導(dǎo)同一狀態(tài)細(xì)胞的遷移數(shù)量也不同,同時(shí),利用活細(xì)胞工作站結(jié)合Dunn chamber對(duì)細(xì)胞進(jìn)行微速攝影視頻分析(time-lapse video analysis)顯示在某一分化階段(預(yù)誘導(dǎo)24小時(shí))的MSCs具有更高的遷移效率。接著,我們通過(guò)Western blot檢測(cè)了在VEGF刺激下這些通路關(guān)鍵分子的磷酸化水平的改變,結(jié)果顯示各條通路達(dá)到磷酸化最大值的時(shí)間不同,同一時(shí)間各條通路磷酸化的程度不同,而且這些現(xiàn)象隨著細(xì)胞狀態(tài)的改變而改變。最后,采用PI3K/Akt和MAPKs抑制劑阻斷信號(hào)通路后,利用Dunn chamber和Boyden chamber觀察抑制劑對(duì)細(xì)胞定向遷移的影響,結(jié)果顯示抑制劑對(duì)遷移的影響和分化的狀態(tài)密切相關(guān),推測(cè)這些通路在成神經(jīng)分化的MSCs定向遷移中是選擇性起作用的。 以上結(jié)果證明,MSCs的分化影響了其向VEGF的定向遷移,也就是說(shuō),不同分化狀態(tài)的MSCs顯示出不同的遷移行為。MSCs分化狀態(tài)影響其對(duì)誘導(dǎo)因子的趨化性遷移是一個(gè)普遍的現(xiàn)象,實(shí)驗(yàn)室關(guān)于干細(xì)胞生長(zhǎng)生長(zhǎng)因子(hepatocyte growth factor, HGF),干細(xì)胞因子(stem cell factor, SCF),血小板衍生因子(platelet derived growth factor, PDGF)的研究同樣證明了這種現(xiàn)象的存在,雖然進(jìn)一步的分子機(jī)制仍待于探索,但是我們的研究結(jié)果為臨床移植MSCs來(lái)治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病提供了更加豐富的理論基礎(chǔ)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R329

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 劉蓓;馬戈甲;宋保強(qiáng);;靶向人VEGF165的SiRNA慢病毒的構(gòu)建和鑒定[J];中國(guó)美容醫(yī)學(xué);2011年07期

2 劉建民;孫鴻;黃良文;陳為;朱文瑞;;HIF-1和VEGF蛋白在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及意義[J];四川醫(yī)學(xué);2011年08期

3 黃新次;;血清VEGF和MMP-9含量動(dòng)態(tài)變化監(jiān)測(cè)在急性腦梗死患者中的臨床意義及研究[J];現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué);2011年18期

4 葉國(guó)慶;鄭敏;;VEGF在乳腺癌、癌旁組織中表達(dá)及意義[J];中國(guó)高等醫(yī)學(xué)教育;2011年06期

5 鄭琦;鄭根主;許燕紅;;VEGF和P53在翼狀胬肉中的表達(dá)[J];河北醫(yī)藥;2011年14期

6 黃志勤;李洪亮;孫立波;程齊來(lái);;齊墩果酸抗大鼠移植性肝癌作用的研究[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2011年18期

7 古金成;王少柯;;加服自擬化濁益腎方治療早期糖尿病腎病的臨床觀察[J];廣西中醫(yī)藥;2011年03期

8 王曉露;解方為;陳曦;張霞;歐陽(yáng)學(xué)農(nóng);;丹參酮IIA對(duì)大鼠移植性肝癌的抑制作用[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2011年11期

9 馬真;卓宋明;周路球;李娜;葉春幸;;血管內(nèi)皮功能異常與慢性阻塞性肺疾病[J];現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué);2011年14期

10 張勇;齊振華;李樂賽;符曉華;彭小寧;張娜;于才紅;;乳香提取物對(duì)HL-60細(xì)胞株VEGF分泌及其Flt-1受體表達(dá)的影響[J];湖南師范大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2011年02期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 趙忠芳;呂仁榮;霍然;傅洪濱;徐廣琪;;普萘洛爾治療增生期血管瘤患兒血清中VEGF、MMP-9的變化[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)整形外科學(xué)分會(huì)第十一次全國(guó)會(huì)議、中國(guó)人民解放軍整形外科學(xué)專業(yè)委員會(huì)學(xué)術(shù)交流會(huì)、中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)醫(yī)學(xué)美容專業(yè)委員會(huì)全國(guó)會(huì)議論文集[C];2011年

2 徐勇;黃仁魏;王東寧;林桂真;林東軍;何易;李旭東;林曲;;急性白血病血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)和受體的表達(dá)及其臨床意義研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第八次全國(guó)血液學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2004年

3 李飛;李樹清;;VEGF表達(dá)在局灶性腦缺血后亞低溫腦保護(hù)中的作用研究[A];中國(guó)病理生理學(xué)會(huì)第九屆全國(guó)代表大會(huì)及學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要[C];2010年

4 趙忠芳;呂仁榮;霍然;傅洪濱;徐廣琪;;普萘洛爾治療增生期血管瘤患兒血清中VEGF、MMP-9的變化[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)整形外科學(xué)分會(huì)第十一次全國(guó)會(huì)議、中國(guó)人民解放軍整形外科學(xué)專業(yè)委員會(huì)學(xué)術(shù)交流會(huì)、中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)醫(yī)學(xué)美容專業(yè)委員會(huì)全國(guó)會(huì)議論文集[C];2011年

5 杜娟;王景美;錢曉萍;劉寶瑞;;COX-2和VEGF在胃癌中的表達(dá)和意義[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)腫瘤學(xué)分會(huì)第七屆全國(guó)中青年腫瘤學(xué)術(shù)會(huì)議——中華醫(yī)學(xué)會(huì)腫瘤學(xué)分會(huì)“中華腫瘤 明日之星”大型評(píng)選活動(dòng)暨中青年委員全國(guó)遴選論文匯編[C];2011年

6 田，

本文編號(hào)：1730458