本文選題：丁型肝炎病毒　切入點：載體構(gòu)建　出處：《中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志》2017年11期

【摘要】：目的構(gòu)建一種可以實現(xiàn)丁型肝炎病毒(HDV)復(fù)制包裝的HDV轉(zhuǎn)座子載體。方法采用分子克隆方法構(gòu)建含HDV復(fù)制子和乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)表達框的轉(zhuǎn)座子(PB)載體PB126I3,將構(gòu)建好的載體轉(zhuǎn)染HuH-7細胞,轉(zhuǎn)染48 h后用熒光顯微鏡觀察綠色熒光蛋白(GFP)的表達,轉(zhuǎn)染48 h后收集細胞上清用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測HBsAg的表達,質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細胞8.5 d后提取病毒用逆轉(zhuǎn)錄熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(RT-qPCR)檢測HDV核糖核酸(RNA)的含量;同時細胞上清病毒濃縮后感染HBV受體鈉離子/牛磺膽酸共轉(zhuǎn)運蛋白(Na~+/NTCP)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的HepG2.N9細胞系并于感染后第7天用免疫熒光檢測細胞內(nèi)HDVδ抗原的表達。結(jié)果 HDV復(fù)制包裝載體PB126I3瞬時轉(zhuǎn)染HuH-7后細胞上清可檢測到HBsAg的表達和較高滴度的HDV顆粒,并且該病毒顆粒感染HepG2.N9細胞7 d后細胞內(nèi)可檢測到HDVδ抗原。結(jié)論 HDV復(fù)制包裝轉(zhuǎn)座子載體構(gòu)建成功,為未來HDV的大規(guī)模復(fù)制包裝以及嘗試建立HDV穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞系提供前期基礎(chǔ)。
[Abstract]:Objective to construct a HDV transposon vector for hepatitis D virus (HDV) replication packaging.Methods the HDV replicon and hepatitis B virus surface antigen (HBs) expression frame PB126I3 were constructed by molecular cloning method. The constructed vectors were transfected into HuH-7 cells and the expression of GFP was observed by fluorescence microscope after 48 h transfection.After 48 hours of transfection, the supernatant was collected to detect the expression of HBsAg by Elisa, and the RNA content of HDV RNA was detected by reverse transcription-fluorescence quantitative polymerase chain reaction (RT-qPCR) on 8.5 days after transfection.At the same time, the supernatant virus was condense and infected with HBV receptor sodium ion / taurocholic acid cotransporter Na ~ + / NTCP. the expression of HDV 未 antigen was detected by immunofluorescence on the 7th day after infection.Results the expression of HBsAg and the higher titer of HDV particles could be detected in the supernatant of HDV replication-packaging vector PB126I3 after transient transfection of HuH-7, and the HDV 未 antigen could be detected in HepG2.N9 cells 7 days after the infection.Conclusion HDV replication packaging transposon vector is successfully constructed, which provides a preliminary basis for large-scale replication and packaging of HDV and attempts to establish stable transfection cell lines of HDV.
【作者單位】： 河北北方學(xué)院研究生部;中國人民解放軍第309醫(yī)院腎臟內(nèi)科;軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射與輻射醫(yī)學(xué)研究所;
【基金】：國家863青年科學(xué)家項目(No:2015AA020946) 北京市科技新星項目(No:Z171100001117119)
【分類號】：R373.21

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本文編號：1727008