本文選題：Bruton酪氨酸激酶　切入點：泛素化　出處：《中國實驗血液學(xué)雜志》2017年05期

【摘要】：目的:探討B(tài)ruton酪氨酸激酶(Bruton's Tyrosine Kinase,Btk)的代謝調(diào)節(jié)途徑和可能的分子機制。方法:用蛋白酶體抑制劑和/或佛波酯(PMA)處理內(nèi)源性表達Btk的B細(xì)胞系A(chǔ)20、Ramos細(xì)胞及轉(zhuǎn)染了外源性Btk的293T、COS-7細(xì)胞,應(yīng)用RT-PCR法檢測上述細(xì)胞Btk mRNA表達水平,Western blot法檢測Btk蛋白表達水平;通過抗Ig M抗體交聯(lián)BCR刺激A20細(xì)胞,檢測細(xì)胞Btk泛素化水平;用Btk、泛素和Cbl共轉(zhuǎn)染COS-7細(xì)胞,檢測其泛素化Btk水平;用Btk和編碼野生型或突變型泛素(K29R、K48R、K63R)即單泛素的質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞,經(jīng)蛋白酶體抑制劑處理后用抗泛素抗體和抗Btk抗體檢測泛素化Btk水平;穩(wěn)定轉(zhuǎn)染并表達Btk-GFP的293T細(xì)胞經(jīng)氯喹處理后,應(yīng)用Western blot檢測其Btk蛋白表達水平。結(jié)果:蛋白酶體特異性抑制劑和/或佛波酯可減少Btk轉(zhuǎn)錄,從而引起B(yǎng)tk蛋白表達下降。Btk通過泛素化進行翻譯后修飾,泛素化修飾程度與Btk的表達及活化水平有關(guān)。Cbl為Btk的E3泛素連接酶,它可導(dǎo)致Btk泛素化。Btk受多聚和/或單泛素化調(diào)節(jié),Btk可在溶酶體內(nèi)發(fā)生泛素化和降解,溶酶體抑制劑氯喹可上調(diào)Btk的表達。結(jié)論:Btk蛋白的表達水平受泛素化途徑調(diào)節(jié),該調(diào)節(jié)與Btk的表達水平有關(guān)。
[Abstract]:鐩殑:鎺㈣Bruton閰皚閰告縺閰，

本文編號：1719147