發(fā)布時間：2018-04-05 11:58

  本文選題：羊膜　切入點：細胞黏附　出處：《天津醫(yī)科大學》2011年碩士論文

【摘要】：目的：樁蛋白和α5整合素在含有纖維結(jié)合蛋白的細胞外纖維中形成共聚現(xiàn)象,這種獨特的分子結(jié)構(gòu)我們稱之為3D黏附(3D-matrix adhesion)。細胞在3D黏附下其細胞形態(tài)、移動方式、信號通路和生存時間都表現(xiàn)出和傳統(tǒng)二維培養(yǎng)下完全不同的情況。TAHAM作為一種全新方法獲得的自然衍生基質(zhì),本實驗觀察其與成纖維細胞在體外的黏附方式。 方法：通過組織貼片法獲得原代人包皮成纖維細胞(human foreskin fibroblast, HFF),將HFF分別種植于平片、基質(zhì)膠及用胰酶懸吊法制作的TAHAM;用光學顯微鏡、掃描電子顯微鏡、免疫組織化學和免疫熒光染色觀察TAHAM的光學結(jié)構(gòu)、纖維結(jié)構(gòu)及Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅵ型膠原、纖維結(jié)合蛋白、層黏連蛋白、轉(zhuǎn)化生長因子-β1、轉(zhuǎn)化生長因子-β2、成纖維細胞生長因子的分布情況；采用雙苯甲亞胺進行新鮮羊膜和TAHAM的DNA定量分析；生物力學試驗機上檢測TAHAM的應(yīng)力、應(yīng)變;用倒置相差顯微鏡觀察HFF在平片、基質(zhì)膠及TAHAM上的細胞形態(tài)并觀察細胞在上述三種基質(zhì)上的移動方式和速度；激光共聚焦顯微鏡觀察α5整合素、樁蛋白和纖維結(jié)合蛋白三種分子的空間關(guān)系。 結(jié)果：光學顯微鏡下新鮮羊膜包含五層結(jié)構(gòu)：上皮層細胞層、基底膜、致密層、纖維母細胞層和海綿層。TAHAM僅保留基底膜和致密層及部分纖維母細胞層,其內(nèi)未見細胞。掃描電鏡下TAHAM基質(zhì)層表面為方向不一的膠原纖維,纖維粗細不均,纖維走形深淺穿梭,形成立體網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),未見細胞及碎屑。免疫組織化學和免疫熒光觀察顯示Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅵ型膠原、層黏連蛋白、纖維結(jié)合蛋白染色陽性。轉(zhuǎn)化生長因子-β1、轉(zhuǎn)化生長因子-β2、成纖維細胞生長因子染色陰性。雙苯甲亞胺證實TAHAM表面無細胞及碎屑殘留。新鮮羊膜和TAHAM的過渡應(yīng)力、過渡應(yīng)變、破壞應(yīng)力、破壞應(yīng)變比較P值0.05,差異無統(tǒng)計學意義(過渡應(yīng)力：t=-1.83,P＝0.08；過渡應(yīng)變：t=-1.07,P=0.30；破壞應(yīng)力：t=1.57,P=0.13；破壞應(yīng)變：t=-1.81,P=0.08)。HFF在TAHAM上24h貼壁后,細胞向兩極伸展為紡錘形并形成偽足,α5整合素沿細胞長軸分布,此時細胞也分泌出大量的纖維結(jié)合蛋白。此后細胞繼續(xù)增殖為復層細胞團,細胞團之間由細胞組成的條索相互連接,形成海星狀結(jié)構(gòu),在細胞團塊底部一些細胞長入TAHAM,不經(jīng)傳代存活21d。HFF中的α5整合素(綠色)、樁蛋白(紅色)和HFF分泌的纖維結(jié)合蛋白(藍色),三色共聚焦形成白色條帶。在平片和基質(zhì)膠上未觀察到共聚焦現(xiàn)象。HFF種植在TAHAM上8-14 h后細胞移動速度可達12μm/h,當細胞在原位形成細胞團塊時移動速度接近0μm/h。在TAHAM上細胞的移動軌跡接近直線,而在普通培養(yǎng)皿上的細胞移動為無序隨意運動,移動速度為16～48μm/h。 結(jié)論：TAHAM保留了羊膜的原有主要成分和力學特征,HFF可在TAHAM上形成3D黏附,其細胞形態(tài)及細胞移動方式符合3D黏附特征。
[Abstract]:Objective: pile protein and 偽 5 integrin form copolymerization in extracellular fibers containing fibronectin. This unique molecular structure is called 3D adhesion 3D-matrix adhesion.The morphology, motility, signal pathway and survival time of cells in 3D adhesion are completely different from those in traditional two-dimensional culture. TAHAM is a natural derivative matrix obtained by a new method.In this study, the adhesion between fibroblasts and fibroblasts in vitro was observed.The optical structure, fiber structure, type 鈪，

本文編號：1714666