本文選題：骨形成蛋白BMP2-15　切入點(diǎn)：重組腺病毒　出處：《重慶醫(yī)科大學(xué)》2011年碩士論文

【摘要】：目的:以HEK293細(xì)胞作為腺病毒包裝細(xì)胞,采用乒乓感染的病毒復(fù)制法,制備表達(dá)骨形成蛋白BMP2-15的重組腺病毒,并進(jìn)一步進(jìn)行病毒滴度測定與功能鑒定,為第二部分重組腺病毒載體介導(dǎo)人骨形成蛋白BMP2-15誘導(dǎo)干細(xì)胞C2C12成骨作用的研究奠定基礎(chǔ)。 方法:通過乒乓感染、細(xì)胞凍融的腺病毒復(fù)制法,制備表達(dá)骨形成蛋白BMP2-15的重組腺病毒;以熒光表達(dá)強(qiáng)度比較法測定病毒滴度;以RT-PCR的方法鑒定制備的表達(dá)骨形成蛋白BMP2-15的重組腺病毒的表達(dá)功能。 結(jié)果:(1)獲得高滴度的表達(dá)骨形成蛋白BMP2-15的重組腺病毒。(2)以高滴度的表達(dá)骨形成蛋白BMP2-15的重組腺病毒感染實(shí)驗(yàn)細(xì)胞株C2C12后,RT-PCR檢測結(jié)果證明能有效表達(dá)目的基因骨形成蛋白BMP2-15。 結(jié)論:成功制備高滴度的表達(dá)骨形成蛋白BMP2-15的重組腺病毒,用該病毒感染實(shí)驗(yàn)細(xì)胞株,能有效表達(dá)目的基因,為進(jìn)一步的功能實(shí)驗(yàn)奠定了基礎(chǔ)。 第二部分重組腺病毒載體介導(dǎo)人骨形成蛋BMP2-15誘導(dǎo)干細(xì)胞C2C12成骨作用的研究 目的:以表達(dá)骨形成蛋白BMP2-15的重組腺病毒感染C2C12細(xì)胞,誘導(dǎo)其向成骨方向分化,通過體外體內(nèi)實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)分析所有BMP成骨作用的差異。 方法:(1)以表達(dá)骨形成蛋白BMP2-15的重組腺病毒感染具有多向分化潛能的干細(xì)胞C2C12,堿性磷酸酶活性測定檢測BMP2-15誘導(dǎo)C2C12細(xì)胞向骨細(xì)胞分化的功能強(qiáng)弱。(2)目的BMP基因誘導(dǎo)C2C12細(xì)胞后,注射入免疫缺陷鼠體內(nèi),通過體內(nèi)成骨的實(shí)驗(yàn)研究比較不同BMP成骨作用的差異。 結(jié)果:(1)篩選出進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)的目的基因BMP2、4、6、7、9。(2)目的BMP基因誘導(dǎo)C2C12細(xì)胞成骨后,體外體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證明除傳統(tǒng)BMP2及BMP7外,BMP9具有更強(qiáng)的成骨作用。 結(jié)論:以表達(dá)骨形成蛋白BMP2-15的重組腺病毒感染具有多向分化潛能的干細(xì)胞C2C12,堿性磷酸酶活性測定檢測BMP2-15誘導(dǎo)C2C12細(xì)胞向骨細(xì)胞分化的功能強(qiáng)弱,篩選出具有誘導(dǎo)成骨分化功能的目的基因BMP2、4、6、7、9,進(jìn)一步通過體外體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證明除傳統(tǒng)BMP2及BMP7外, BMP9具有更強(qiáng)的成骨作用。
[Abstract]:Objective: to prepare recombinant adenovirus expressing bone morphogenetic protein (BMP2-15) by ping-pong virus replication using HEK293 cells as adenovirus packaging cells, and to determine the titer and function of the recombinant adenovirus. The second part of the recombinant adenovirus vector mediated osteogenesis of human bone morphogenetic protein BMP2-15 induced stem cell C2C12 osteogenesis. Methods: recombinant adenovirus expressing bone morphogenetic protein (BMP2-15) was prepared by ping-pong infection and freeze-thaw adenovirus replication. The expression function of recombinant adenovirus expressing bone morphogenetic protein BMP2-15 was identified by RT-PCR. Results the recombinant adenovirus with high titer of bone morphogenetic protein BMP2-15 was obtained. The recombinant adenovirus expressing bone morphogenetic protein BMP2-15 with high titer was infected with C2C12. The results of RT-PCR showed that the recombinant adenovirus expressing bone morphogenetic protein BMP2-15 could express the target gene BMP2-15 effectively. Conclusion: the recombinant adenovirus expressing bone morphogenetic protein BMP2-15 with high titer was successfully prepared. The recombinant adenovirus infected with the recombinant adenovirus could effectively express the target gene and lay a foundation for further functional experiments. The second part of the study on the osteogenesis of stem cell C2C12 induced by recombinant adenovirus vector mediated human bone formation egg BMP2-15. Aim: to infect C2C12 cells with recombinant adenovirus expressing bone morphogenetic protein (BMP2-15) and induce them to differentiate into osteoblasts, and to analyze the difference of osteogenesis of all BMP cells in vitro and in vivo. Methods the recombinant adenovirus expressing bone morphogenetic protein (BMP2-15) was used to infect C2C12 stem cells with multidirectional differentiation potential. Alkaline phosphatase activity assay was used to detect the function of BMP2-15 in inducing C2C12 cells to differentiate into bone cells. The osteogenic effects of different BMP were compared by in vivo osteogenesis in immunodeficient mice. Results (1) the target gene BMP2, BMP2, was selected to induce the osteogenesis of C2C12 cells. The in vitro experiments showed that BMP9 had a stronger osteogenic effect in addition to traditional BMP2 and BMP7. Conclusion: C2C12 stem cells with multiple differentiation potential were infected with recombinant adenovirus expressing bone morphogenetic protein (BMP2-15). Alkaline phosphatase activity was used to detect the function of BMP2-15 in inducing C2C12 cells to differentiate into bone cells. The target gene BMP2O4, BMP2, was screened out, and the in vitro experiments proved that BMP9 had stronger osteogenic effect than the traditional BMP2 and BMP7.
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R346

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：1698212