本文選題：軟骨細(xì)胞　切入點(diǎn)：周期性伸形變　出處：《南方醫(yī)科大學(xué)》2011年碩士論文

【摘要】：[目的] 由于無血液供應(yīng)軟骨及軟骨細(xì)胞外基質(zhì)的增殖能力較其他組織明顯低下,軟骨組織通常在受損的情況下其自身低下的恢復(fù)能力,是各類型關(guān)節(jié)炎的主要原因。不同的模型研究中,應(yīng)力強(qiáng)度頻率及作用的方式是變化的標(biāo)尺,所以很難比較之前發(fā)表的文章中的多種結(jié)果。 已有文獻(xiàn)證明20%拉伸幅度的周期性拉伸應(yīng)力應(yīng)用于單層培養(yǎng)的軟骨細(xì)胞致軟骨基質(zhì)中蛋白成分降低,使MMP-1、MMP-3、MMP-9表達(dá)水平調(diào)高。持續(xù)性周期性拉伸應(yīng)力導(dǎo)致基質(zhì)向重新塑造的轉(zhuǎn)變以及潛在的基質(zhì)成分的改變。并且也發(fā)現(xiàn)只有在炎癥因子(IL-1p和TNF-α)存在的前提下周期性拉伸(5%)應(yīng)力能顯示其對炎癥因子的拮抗作用。 本實(shí)驗(yàn)的目的是研究軟骨細(xì)胞在單層細(xì)胞培養(yǎng)中受到拉伸機(jī)械應(yīng)變時幾種分解代謝酶(金屬蛋白酶3、5及帶血小板凝集素敏感蛋白樣模體的解整聯(lián)蛋白金屬蛋白酶5)及與合成代謝有緊密關(guān)系的轉(zhuǎn)化生長因子p等各種細(xì)胞因子的基因水平變化,以了解在不同拉伸幅度下長時間拉伸后軟骨細(xì)胞內(nèi)外生化環(huán)境的變化情況。 [方法] 本研究采用獲取經(jīng)典新西蘭兔髖、膝關(guān)節(jié)透明軟骨制成原代軟骨細(xì)胞,按5×105/孔的密度將細(xì)胞混懸液接種于flexercellⅠ型培養(yǎng)板中,顯微鏡下顯示大部分細(xì)胞貼壁牢靠并生長成亞融合狀態(tài)后,利用FLEXERCELL-5000T細(xì)胞拉伸系統(tǒng)對單層培養(yǎng)細(xì)胞施加拉伸應(yīng)變。實(shí)驗(yàn)采用組別與時間兩因素析因分析設(shè)計(jì),組別分為空白組和低幅度(5%)和高幅度(15%)拉伸組,拉伸5天,每天作用8個小時,分別取第3天和第5天兩個時間點(diǎn)的細(xì)胞行(1)甲苯胺藍(lán)染色,倒置顯微鏡下觀察、拍照,及(2)熒光實(shí)時定量PCR觀察MMP3、MMP13、ADAMTS-5、TGF-β1的基因表達(dá)水平。 [結(jié)果] MMP3、ADAMTS-5第3天時各拉伸組均顯著升高,第5天時較第3天不同程度下降。MMP13第3天時各刺激組均高于空白組,第5天時高幅度組較前繼續(xù)升高,低幅度組較前無明顯改變。組間比較高幅度組高于低幅度組。TGF-β1在第5天時刺激組均高于空白組,低幅度組高于高幅度組。 [結(jié)論] 小幅度(5%)拉伸可提高細(xì)胞的合成、分解代謝,及對軟骨細(xì)胞的保護(hù)作用。大幅度拉伸對軟骨細(xì)胞具有促分解作用,并且使軟骨細(xì)胞產(chǎn)生的不同類型分解代謝酶中在不同時間點(diǎn)提高基因表達(dá)水平,其中MMP-13在分解代謝中起到關(guān)鍵作用。長時間大幅度拉伸刺激下TGF-β1在軟骨細(xì)胞的病理性修復(fù)中可能起到的重要作用。
[Abstract]:[Objective]
The blood supply of cartilage and cartilage extracellular matrix proliferation was significantly lower than the other tissues, cartilage tissue is usually in the damaged condition of its own low recovery capability, is the main reason for the various types of arthritis. The research of different models, the stress intensity and the frequency of the mode of action is the change of scale, a variety of results so it is hard to compare the.
It is proven that the cartilage cell cycle of tensile stress amplitude of 20% tension applied to monolayer induced proteins in cartilage matrix decreased, MMP-1, MMP-3, MMP-9 expression level increased. Persistent tensile stress leads to the re shaping of the transformation matrix and the change of matrix potential and also found only. In the inflammatory factors (IL-1p and TNF-) are under the premise of cyclical tensile stress (5%) can show its antagonistic effects on inflammatory cytokines.
The purpose of this experiment is to study the tensile mechanical strain by cartilage cells of several catabolic enzymes in monolayer cell culture (metalloproteinase 3,5 and platelet agglutinin sensitive protein like motif disintegrin metalloproteinase 5) changes in gene level and synthesis and metabolism are closely related to the transforming growth factor P and other cytokines and in order to understand the different amplitude under long time after tensile tensile chondrocytes inside and outside the biochemical environment changes.
[method]
This study was used to obtain the classic New Zealand rabbit hip, knee joint cartilage into the primary chondrocytes by 5 * 105/ hole in the density of the cell suspension were inoculated in flexercell type culture plate, under the microscope showed that most cells adhered firmly and grow into sub fusion state, the use of FLEXERCELL-5000T drawing system of single cell cell culture applied tensile strain. Experimental group and time using two factor factorial design analysis, groups were divided into blank group (5%) and low amplitude and high amplitude (15%) tensile tensile group, 5 days, 8 hours a day, third days and fifth days were taken at two time points (1 cell line) camera observation, toluidine blue staining, inverted microscope, and (2) fluorescence quantitative real-time PCR observation of MMP3, MMP13, ADAMTS-5, gene expression level of TGF- beta 1.
[results]
MMP3 ADAMTS-5, the third day of each stretch group were significantly increased at fifth days compared to third days decreased.MMP13 third days when the stimulation group were higher than that in control group, fifth days of high magnitude group than before to continue to rise, the low amplitude group compared with no alteration. Comparison between groups of high amplitude is higher than low amplitude group.TGF- beta 1 on the fifth day stimulation group were higher than that in control group, low amplitude group was higher than that of high magnitude group.
[Conclusion]
Small amplitude (5%) can improve the metabolism of cell stretch, synthesis, and protective effect on cartilage cells. Substantial tensile promoting effect on the decomposition of cartilage cells, and the cartilage cells produce different types of catabolic enzymes in different time points to improve the level of gene expression, in which MMP-13 catabolism plays a key effect of long time greatly. Under mechanical stretch TGF- beta 1 in chondrocytes in important pathological repair may play a role.

【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R329

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本文編號：1695861