本文選題：N-甲基-D-天冬氨酸　切入點(diǎn)：N-甲基-D-天冬氨酸受體　出處：《中南大學(xué)》2011年碩士論文

【摘要】：目的：觀察正常大鼠孕15天至孕21天胎肺中是否有NMDA受體的表達(dá),并通過(guò)孕15天胎肺器官培養(yǎng)模型,觀察NMDA受體激活對(duì)大鼠胎肺發(fā)育的影響及對(duì)調(diào)節(jié)胎肺發(fā)育有重要作用的TTF-1表達(dá)的影響。 方法 1.孕鼠制備：200-250gSD雌性大鼠與300-350g雄鼠1:1合籠,次日晨見(jiàn)陰栓確定為孕0天(E0) 2.胎肺組織NMDAR mRNA測(cè)定：熒光定量PCR測(cè)定孕15天至21天胎肺NMDA1, NMDA2A,NMDA2B, NMDA2C, NMDA2D, NMDA3A,NMDA3B受體mRNA的表達(dá)。 3.胎肺器官培養(yǎng)及分組：將胎肺置于transwell板的微孔膜上(直徑：0.8um),使其處于氣液交界處,采用含有青霉素(100U/mL),氯霉素(100ug/mL)的無(wú)血清BGJb培養(yǎng)基,37℃,5%CO2條件下培養(yǎng)。試驗(yàn)分組：對(duì)照組：培養(yǎng)基中不加任何處理。處理組：在培養(yǎng)基中添加NMDA (sigma公司),終濃度為1mmol/L 4.培養(yǎng)胎肺一般情況：每24hr胎肺大體面積變化,每48hr胎肺濕重,胎肺分支情況。 5.胎肺病理學(xué)檢查：上皮細(xì)胞分化情況,單位囊泡周徑,單位囊泡面積,單位肺實(shí)質(zhì)面積,單位囊泡面積與肺實(shí)質(zhì)面積比。 6. TTF-1 mRNA測(cè)定：熒光定量PCR測(cè)定對(duì)照組與處理組培養(yǎng)不同時(shí)間TTF-1 mRNA的表達(dá)量的變化。 7.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,多組間比較用單因素方差分析(one-way ANOVA)及SNK-q檢驗(yàn),兩組間比較用T檢驗(yàn)。p0.05認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果 1.胎肺組織NMDAR表達(dá)：正常大鼠孕15天至孕21天胎肺組織存在NMDAR1, NMDAR2A, NMDAR2B, NMDAR2C, NMDAR2D, NMDAR3A, NMDAR3B表達(dá)。孕15天至孕17天胎肺以NMDAR3C表達(dá)為主,孕18天至孕20天以NMDAR2A表達(dá)為主,21天胎肺以NMDAR2D表達(dá)為主。 2.胎肺培養(yǎng)情況：隨著培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng),胎肺濕重增加(p0.05),面積增大(p0.05),支氣管分支越來(lái)越多,越分越細(xì)。 3.培養(yǎng)胎肺HE染色：培養(yǎng)96hr內(nèi),隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng),肺上皮細(xì)胞由高柱狀上皮細(xì)胞向立方上皮細(xì)胞分化,單位囊泡周徑增大(p0.01),單位囊泡面積增大(p0.05),單位肺實(shí)質(zhì)面積減小(p0.05),囊泡面積/肺實(shí)質(zhì)面積比值增大(p0.05) 4.培養(yǎng)胎肺TTF-1 mRNA表達(dá)變化：隨著培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng),TTF-1mRNA表達(dá)量增加(p0.05) 5.NMDA對(duì)培養(yǎng)胎肺的影響：NMDA(1mmol/L)處理組培養(yǎng)胎肺肺單位囊泡周徑減小(p0.05),單位囊泡面積減小(p0.01)單位肺實(shí)質(zhì)面積增多(p0.01),囊泡面積與肺實(shí)質(zhì)面積比降低(p0.01),但胎肺面積、胎肺濕重、TTF-1 mRNA的表達(dá)量與處理組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05)結(jié)論 1.成功建立了大鼠胎肺器官培養(yǎng)模型。 2.首次觀察了正常大鼠孕15天至孕21天胎肺組織存在NMDAR1, NMDAR2A, NMDAR2B, NMDAR2C, NMDAR2D, NMDAR3A, NMDAR3B mRNA的表達(dá)及其動(dòng)態(tài)變化。 3.首次發(fā)現(xiàn)NMDA受體的激活可抑制大鼠胎肺的發(fā)育,其抑制胎肺發(fā)育的分子機(jī)制與TTF-1mRNA表達(dá)無(wú)關(guān)。
[Abstract]:Objective : To observe the expression of NMDA receptor in fetal lung from 15 to 21 days of pregnancy in normal rats , and observe the effect of NMDA receptor activation on fetal lung development in rats and the effect of NMDA receptor activation on the development of fetal lung .

method

1 . Preparation of pregnant rats : 200 - 250 g SD female rats and 300 - 350 g of male rats 1 : 1 , and the morning of the following day was determined as 0 days of gestation ( E0 )

2 . NMDAR mRNA determination of fetal lung tissue : expression of NMDA1 , NMDA2A , NMDA2B , NMDA2C , NMDA2D , NMDA3A , NMDA3B receptor mRNA was determined by fluorescence quantitative PCR .

3 . Fetal lung organ culture and grouping : The fetal lung was placed on the microporous membrane of transwell plate ( diameter : 0.8um ) , it was cultured under the conditions of serum - free BGJb medium containing penicillin ( 100 U / mL ) and chloramphenicol ( 100 ug / mL ) , and cultured at 37 鈩，

本文編號(hào)：1692623