本文選題：褪黑素　切入點(diǎn)：結(jié)腸　出處：《武漢大學(xué)》2011年博士論文

【摘要】：背景：腸易激綜合征是發(fā)病率較高的一種功能性腸病,其病因及發(fā)病機(jī)制尚不完全明確,精神因素在其發(fā)病中發(fā)揮重要作用。目前有研究證實(shí)患者體內(nèi)多種生物活性物質(zhì)存在異常,如膽囊收縮素(CCK),5-HT等。褪黑素是一種由松果體和胃腸道雙重分泌的激素,其自身及代謝產(chǎn)物含量在腸易激綜合征患者中存在異常。由于褪黑素參與體內(nèi)多種生理過程,且與多種激素間也有相互作用,腸易激綜合征患者體內(nèi)這種褪黑素的異常是否參與疾病的發(fā)生發(fā)展是值得關(guān)注的問題。在腸易激綜合征患者,胃腸動力變化曾被認(rèn)為是其癥狀發(fā)生的重要病理生理學(xué)基礎(chǔ)。很多研究表明該病患者結(jié)腸收縮頻率、收縮幅度和峰電位,特別是在餐后或受刺激后,均比健康人明顯增強(qiáng)。褪黑素對腸道動力也存在作用,它與腸易激綜合征腸道動力異常間是否存在一定的聯(lián)系,因此本研究主要側(cè)重于褪黑素在應(yīng)激中含量的變化和對腸道動力作用并探討其具體機(jī)制。 第一部分 目的：觀察褪黑素對急慢性避水應(yīng)激模型排便異常,小腸推進(jìn)比,曠場實(shí)驗(yàn)及其體內(nèi)激素含量的影響,并探討其可能存在的機(jī)制。 方法：將60只大鼠分為對照組,急性避水應(yīng)激組,慢性避水應(yīng)激組,急性避水應(yīng)激褪黑素組(應(yīng)激前注射10mg/kg褪黑素)和慢性應(yīng)激褪黑索組(應(yīng)激前注射10mg/kg褪黑素,連續(xù)10天)。觀察褪黑素對急慢性避水應(yīng)激模型排便異常,小腸推進(jìn)比的影響,采用ELISA法測定血清內(nèi)褪黑素及5-HT含量的變化,并利用曠場實(shí)驗(yàn)評估其行為學(xué)改變。 結(jié)果：在慢性避水應(yīng)激組中大鼠總的運(yùn)動距離和速度減少,而急性避水應(yīng)激組卻增加。急慢性避水應(yīng)激能夠明顯增加大鼠排便的粒數(shù),褪黑素對這種排便異常有抑制作用。褪黑素還抑制了由于急性避水應(yīng)激引起的小腸推進(jìn)比增快,這些可能與體內(nèi)褪黑素含量及5-HT含量變化有關(guān)。在急性避水應(yīng)激組,褪黑素含量增高(從16.03±3.96pg/mL升高到28.89±1.58pg/mL)并且抑制了5-HT的分泌。在慢性避水應(yīng)激組,褪黑素能夠進(jìn)一步減少由于慢性應(yīng)激導(dǎo)致的5-HT減少(從692.72±67.03ng/mL下降到588.73±36.61ng/mL)。 結(jié)論：褪黑素在急慢性避水應(yīng)激中可能通過對腸道的直接作用和對5-HT分泌調(diào)節(jié)的間接作用來調(diào)節(jié)腸道動力,此外,有關(guān)受體表達(dá)的中樞機(jī)制也可能參與其在慢性應(yīng)激中的作用。 第二部分 目的：探討褪黑素對大鼠近端結(jié)腸平滑肌肌條自發(fā)性收縮的影響,及在其他藥物干預(yù)下對收縮的影響和相關(guān)機(jī)制。 方法：截取離回盲部約3cm的大鼠近端結(jié)腸,置于持續(xù)充入95%O2和5%CO2混合氣體的無鈣PSS中,仔細(xì)除去黏膜后剪成3mm×10 mm的平滑肌肌條。將肌條浸沒于持續(xù)充95%O2和5%CO2混合氣體的37℃臺式液中,將其與張力換能器相連。給予1.0g的前負(fù)荷,每20分鐘更換液體一次,待肌條出現(xiàn)自發(fā)節(jié)律性收縮并且穩(wěn)定后采用RM6240型多道生理信號采集系統(tǒng)記錄給藥前后收縮頻率和幅度的變化。 結(jié)果：褪黑素能夠抑制結(jié)腸的自發(fā)性收縮幅度及頻率,10-4 mol/L,10-3 mol/L的褪黑素抑制結(jié)腸收縮幅度分別為對照組的(43.58±19.53)%和(79.18士17.77)%(P=0.046及P=0.020,n均=6)。10-5mol/L,10-4 mol/L,10-3 mol/L的褪黑素抑制結(jié)腸收縮頻率分別為對照組的(52.54±22.13)%和(120.28±51.82)%,(252.49±46.50)%(P=0.043及P=0.020,P=0.000,n均=6)。預(yù)先向浴槽內(nèi)加入終濃度為104 mol/L的乙酰膽堿后,結(jié)腸收縮幅度明顯增加,與對照組相比增加了(428.48±195.25)%(P=0.001),此后再加入褪黑素10-4 mol/L后,結(jié)腸收縮幅度減少,與乙酰膽堿組相比減少了(46.88±20.53)%(P=0.007,n=6)。預(yù)先向浴槽內(nèi)加入終濃度為3×10-2mol/L的氯化鉀溶液后,結(jié)腸收縮幅度增加,與對照組相比增加了(239.87±33.98)%(P=0.018)。此后再加入褪黑素10-4 mol/L后,結(jié)腸收縮幅度減少,與氯化鉀組相比減少了(14.32±7.34)%(P=0.001,n=6)。預(yù)先向浴槽內(nèi)加入終濃度為10-6mol/L的5-HT溶液后,結(jié)腸收縮幅度增加,與對照組相比增加了(102.00±44.13)%(P=0.033)。此后再加入褪黑素10-4mol/L后,結(jié)腸收縮幅度減少,與5-HT組相比減少了(35.59±6.44)%(P=0.003,n=6)。 結(jié)論：褪黑素能夠抑制大鼠近端結(jié)腸自發(fā)性收縮幅度及頻率,并且也可以抑制由乙酰膽堿,氯化鉀及5-HT引起的結(jié)腸收縮增強(qiáng),其作用可能是通過對腸神經(jīng)系統(tǒng)和對平滑肌細(xì)胞雙重作用來發(fā)揮。 第三部分 目的：探討褪黑素對單個(gè)大鼠結(jié)腸平滑肌細(xì)胞電壓依賴鉀通道電流和鈣依賴鉀通道電流的影響及其可能的作用機(jī)制。 方法：截取離回盲部約3cm的大鼠近端結(jié)腸,置于持續(xù)充入95%O2和5%CO2混合氣體的無鈣PSS中,仔細(xì)除去黏膜后剪成2mm×2mm的平滑肌肌塊。置于新鮮配制的無鈣消化液中,37℃振蕩溫浴20-30 min,漂洗五次,吹打成細(xì)胞懸液。取細(xì)胞懸液接種于裝有倒置顯微鏡的灌流槽中,待細(xì)胞貼壁后用臺式液以3ml/min的速度灌流,選取貼壁良好,折光性好,胞膜光滑清晰的細(xì)胞進(jìn)行高阻封接。用EPC-10膜片鉗放大器記錄全細(xì)胞模式下結(jié)腸平滑肌細(xì)胞電壓依賴鉀通道及鈣依賴鉀通道電流給藥前后的變化。 結(jié)果：10-4 mol/L褪黑素可以抑制電壓依賴鉀通道電流的幅度(P=0.011,n=6),從(829.31±114.08)pA減少至(430.06±52.48)pA,電流大小為對照組的(47.47±8.20)%。而向浴槽中加入非選擇性褪黑素受體阻斷劑Luzindole后,褪黑素仍能抑制電流,但其抑制程度降低(P=0.026,n=6),抑制程度為(32.77±2.22)%,其電流幅度為(557.55±18.39)pA。鈣依賴鉀通道電流大小為(1561.61±365.69)pA,加入10-4 mol/L褪黑素可以抑制電流的幅度(P=0.011,n=6),從(1561.61±365.69)pA減少至(765.50±372.42)pA,電流大小為對照組的(49.35±14.57)%。 結(jié)論：褪黑素能夠抑制大鼠結(jié)腸平滑肌細(xì)胞膜電壓依賴鉀通道及鈣依賴鉀通道電流,這可能由胞內(nèi)鈣離子濃度降低所致,兩種通道電流降低可以使動作電位復(fù)極化緩慢,動作電位發(fā)生頻率減少。
[Abstract]:Background : irritable bowel syndrome ( irritable bowel syndrome ) is a kind of functional bowel disease with high morbidity . The etiology and pathogenesis of irritable bowel syndrome are not completely clear , and mental factors play an important role in the pathogenesis of irritable bowel syndrome .

the first portion

Objective : To observe the effects of melatonin on defecation , intestinal propulsive ratio , open field experiment and hormone content in acute and chronic water - repellent stress models , and to explore the possible mechanism .

Methods : 60 rats were divided into control group , acute water - repellent stress group , chronic water - repellent stress group , acute water - repellent stress melatonin group ( 10 mg / kg melatonin before stress ) and chronic stress - melatonin group ( 10 mg / kg melatonin before stress ) . To observe the effect of melatonin on the defecation and intestinal propulsive ratio of acute and chronic water - repellent stress models , the changes of melatonin and 5 - HT in serum were measured by ELISA , and the behavior change was assessed by open field experiment .

Results : In the chronic water - repellent stress group , the total motor distance and the speed of the rats were decreased , but the acute water - repellent stress group increased . The levels of melatonin increased ( from 16.03 鹵 3.96pg / mL to 28.89 鹵 1.58pg / mL ) and inhibited the secretion of 5 - HT .

Conclusion : melatonin may regulate intestinal motility by direct action on intestinal tract and indirect effect on 5 - HT secretion regulation in acute and chronic water - repellent stress , and the central mechanism of receptor expression may also be involved in its role in chronic stress .

the second part

Objective : To investigate the effect of melatonin on spontaneous contraction of proximal colon smooth muscle strips in rats and the effects of melatonin on contraction and related mechanisms .

Methods : The proximal colon of rats from about 3 cm from the ileocecum was cut into calcium - free PSS filled with 95 % O2 and 5 % CO2 mixed gas , and the smooth muscle strips were carefully removed and cut into 3 mm 脳 10 mm smooth muscle strips . The muscle strips were immersed in a 37 鈩，

本文編號：1678394