本文選題：阿維A　切入點：樹突狀細胞　出處：《河北醫(yī)科大學(xué)》2012年碩士論文

【摘要】：目的：樹突狀細胞(dendritic cells, DCs)是體內(nèi)功能最強的、專職的抗原呈遞細胞（antigen presenting cell, APC），是唯一能夠激活“初始型”免疫反應(yīng)的細胞，可顯著地刺激初始T細胞的增殖和活化，在免疫應(yīng)答的啟動和免疫調(diào)控方面發(fā)揮著重要作用，是最強大的次級免疫反應(yīng)的誘導(dǎo)物。 維甲酸類（retinoc acid,RA）是維生素A的天然及人工合成的衍生物。包含多種同分異構(gòu)體：13-順式維甲酸（13-cis-retinoic acid,13-cRA），全反式維甲酸(all-trans retinoic,ATRA)，9-順式維甲酸(9-cis-retinoicacid,9-cRA)等。它能影響細胞的增殖和分化，調(diào)控多種細胞的形態(tài)變化并參與細胞凋亡代謝過程，在臨床實踐中多用來預(yù)防及治療多種皮膚病。近年來科學(xué)研究發(fā)現(xiàn)它對人體免疫系統(tǒng)具有很強的調(diào)節(jié)作用。阿維A為第二代維甲酸類藥物，化學(xué)名稱是全反式-9-（4-甲氧基-2，3，6-三甲基苯基）-3，7-二甲基-2，4，6，8-壬四烯酸，具有調(diào)節(jié)表皮細胞分化和增殖的作用，臨床上用于治療多種皮膚病，如銀屑病、角化性皮膚病等。 本實驗研究阿維A作用于正常人外周血DCs通過觀察DCs的形態(tài)，流式細胞儀技術(shù)檢測DCs表面標(biāo)記CD83、CD86的表達，應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附實驗檢測細胞因子IL-12的量及用同種異體混合淋巴細胞反應(yīng)來評價DCs刺激T淋巴細胞增殖的能力，來探討阿維A調(diào)節(jié)人免疫系統(tǒng)的機制，進而為臨床治療自身免疫性疾病提供實驗基礎(chǔ)。 方法： 1細胞培養(yǎng) 采集并分離10例健康人外周血單個核細胞在含15%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基（含青霉素100U/ml，含鏈霉素100U/ml，PH7.2）和rhIL-4和rhGM-CSF的作用下，置于5%CO2和37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 2運用流式細胞儀技術(shù)（Flow cytometry，F(xiàn)CM）檢測與細胞免疫成熟和激活相關(guān)的表面標(biāo)記CD83的表達情況 將實驗分為3組，分別為陰性對照組和兩個加藥組，加藥組分別為阿維A濃度為1nmol/L一組和阿維A濃度為10nmol/L一組。陰性對照組不加阿維A培養(yǎng)8天，加藥組在培養(yǎng)第7天按藥物的不同濃度加入藥物干預(yù)12h，收集細胞，應(yīng)用FCM檢測各組細胞表面標(biāo)記CD83的表達情況。 3運用FCM檢測與細胞免疫成熟和激活相關(guān)的表面標(biāo)記CD86的表達情況 將實驗分為3組，分別為陰性對照組和兩個加藥組，加藥組分別為阿維A濃度為1nmol/L一組和阿維A濃度為10nmol/L一組。陰性對照組不加阿維A培養(yǎng)8天，加藥組在培養(yǎng)第7天按藥物的不同濃度加入藥物干預(yù)12h，收集細胞，應(yīng)用FCM檢測各組細胞表面標(biāo)記CD86的表達情況。 4倒置相差顯微鏡觀察經(jīng)過不同濃度藥物處理前后DCs的形態(tài)變化。 5用酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)檢測不同濃度的阿維A對DCs干預(yù)12h后細胞因子的分泌的影響。 將實驗分為3組，分別為陰性對照組和兩個加藥組，加藥組分別為阿維A濃度為1nmol/L一組和阿維A濃度為10nmol/L一組。陰性對照組不加阿維A培養(yǎng)8天，加藥組在培養(yǎng)第7天按藥物的不同濃度加入藥物干預(yù)12h，收集細胞的培養(yǎng)上清液，應(yīng)用ELISA法檢測各組細胞培養(yǎng)上清液中IL-12的水平。 6用同種異體混合淋巴細胞反應(yīng)來評價DCs刺激T淋巴細胞增殖的能力 用四甲基偶氮唑藍（MTT）比色法檢測各組DCs對同種異體混合淋巴細胞增殖的程度。 7運用統(tǒng)計軟件SPSS13.0對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。 結(jié)果： 1運用FCM檢測與細胞免疫成熟和激活相關(guān)的表面標(biāo)記CD83的表達情況。 經(jīng)不同濃度藥物作用后，與陰性對照組相比，表面標(biāo)記CD83的表達明顯增高，陰性對照組、不同濃度阿維A干預(yù)12h后，CD83的表達量分別為42.55±10.58、52.93±12.87、59.80±12.47，分別進一步進行兩兩比較也都有顯著性差異（p＜0.05）。 2運用FCM檢測與細胞免疫成熟和激活相關(guān)的表面標(biāo)記CD86的表達情況。 經(jīng)不同濃度藥物作用后，與陰性對照組相比，表面標(biāo)記CD86的表達明顯增高，陰性對照組、不同濃度阿維A干預(yù)12h后，CD86的表達量分別為57.49±10.63、67.24±10.55、72.89±10.18，分別進一步進行兩兩比較也都有顯著性差異（p＜0.05）。 3阿維A對DCs形態(tài)的影響 陰性對照組：DCs形態(tài)不規(guī)則，少部分細胞貼壁生長，大部分細胞呈懸浮狀態(tài)生長；經(jīng)阿維A處理細胞12h后，通過倒置顯微鏡觀察，貼壁生長的細胞減少，懸浮生長的細胞增多，并隨濃度增加懸浮生長的細胞增多的現(xiàn)象更加明顯。 4用ELISA法檢測阿維A對DCs分泌的IL-12水平的影響。 經(jīng)不同濃度藥物作用后，與陰性對照組相比，分泌的IL-12的量逐漸增多。陰性對照組、不同濃度阿維A干預(yù)12h后IL-12的分泌量分別為50.047±22.660、59.762±23.299、74.657±26.252，分別進一步進行兩兩比較差異也都有顯著性差異（p＜0.05）。 5用MTT比色法檢測阿維A處理前后各組細胞對同種異體淋巴細胞的增殖的變化。 經(jīng)不同濃度藥物作用后的DCs刺激的混合淋巴細胞的增殖率(10.96±1.41，11.88±1.38)與陰性對照組(5.29±0.69)相比明顯上調(diào)（p＜0.05），但兩加藥組之間比較無統(tǒng)計學(xué)差異。 結(jié)論： 1.阿維A對DCs細胞表面標(biāo)志CD83、CD86的表達有增強作用。 2阿維A可以增強DCs對同種異體混合淋巴細胞增殖的刺激作用。 3.阿維A可以促進DCs細胞因子IL-12的分泌。 4阿維A可增強DCs的抗原提呈能力并可促進DCs向成熟方向分化。
[Abstract]:Objective: dendritic cells (dendritic, cells, DCs) are the most potent antigen-presenting cell, (antigen presenting, cell, APC) is the only way to activate the "initial" immune cells, can significantly stimulate initial T cell proliferation and activation plays an important role in the initiation and regulation of immune immunity in response, inducer of secondary immune response of the most powerful.
Retinoic acid (retinoc acid RA) is vitamin A, natural and synthetic derivatives. Contains a variety of isomers: 13- CIS retinoic acid (13-cis-retinoic, acid, 13-cRA) and all trans retinoic acid (all-trans, retinoic, ATRA, 9-) CIS retinoic acid (9-cis-retinoicacid, 9-cRA) it. Can influence cell proliferation and differentiation, morphological changes of cells and regulate various metabolic processes involved in cell apoptosis, in clinical practice for the prevention and treatment of various skin diseases. In recent years, scientific research found that it has a strong effect on regulating the immune system. Avi A is the second generation of retinoids, chemical name all trans -9- (4- methoxy methyl phenyl -2,3,6- three -3,7- two -2,4,6,8- four) methyl nonyl acid, can regulate the differentiation and proliferation of epidermal cells, clinically for the treatment of various skin diseases, such as psoriasis, keratotic skin disease.
The experimental study on the effect of A on acitretin in normal human peripheral blood DCs by observing the morphology of DCs, flow cytometry, DCs surface markers CD83, CD86 expression, ability of application of ELISA detection of IL-12 cytokines and quantity of experiment with allogeneic mixed lymphocyte reaction to evaluate DCs stimulated T lymphocyte proliferation, mechanism to investigate the regulation of avermectin A the immune system, so as to provide experimental basis for clinical treatment of autoimmune diseases.
Method錛，

本文編號：1671704