本文選題：幽門螺桿菌　切入點(diǎn)：基因敲除　出處：《中國(guó)病原生物學(xué)雜志》2017年07期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的構(gòu)建幽門螺桿菌ATCC26695hp0788基因敲除突變菌株(ATCC26695△0788km),觀察hp0788基因?qū)ES-1細(xì)胞功能的影響。方法以基因敲除質(zhì)粒載體pSJHK構(gòu)建基因敲除質(zhì)粒,在hp0788基因的上下游分別擴(kuò)增800~1100bp的基因片段作為同源臂,經(jīng)限制性內(nèi)切酶酶切后與質(zhì)粒載體連接構(gòu)建基因敲除質(zhì)粒pSJHK-0788,通過(guò)電擊轉(zhuǎn)化構(gòu)建hp0788基因敲除突變菌株,以FITC標(biāo)記法檢測(cè)其對(duì)GES-1細(xì)胞黏附能力的影響;以感染復(fù)數(shù)(MOI)為200:1構(gòu)建幽門螺桿菌與GES-1細(xì)胞共培養(yǎng)體系,比較ATCC26695和ATCC26695△0788km對(duì)GES-1細(xì)胞凋亡及活性的影響。結(jié)果構(gòu)建了hp0788基因雙交換敲除質(zhì)粒,電擊轉(zhuǎn)化獲得hp0788基因敲除突變菌株。FITC標(biāo)記ATCC26695和幽門螺桿菌ATCC26695△0788km與GES-1細(xì)胞混勻后采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)FITC的熒光強(qiáng)度,ATCC26695組的黏附率記為100%,ATCC26695△0788km組黏附率為90.40%,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=2.80,P0.05);ATCC26695與ATCC26695△0788km分別與GES-1細(xì)胞共培養(yǎng)8h和16h,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率分別為(15.73±7.84)%、(25.26±5.81)%和(12.46±12.30)%、(21.13±10.09)%,細(xì)胞增殖-毒性檢測(cè)試劑盒檢測(cè)細(xì)胞活力分別為53%、40%和66%、50%,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t值分別為3.30,2.80,-2.93,-2.76,P0.05)。結(jié)論hp0788基因敲除幽門螺桿菌ATCC26695對(duì)GES-1細(xì)胞的黏附率下降,并使GES-1凋亡率下降,而細(xì)胞活力增高。表明hp0788基因是影響幽門螺桿菌ATCC26695感染GES-1細(xì)胞后引起細(xì)胞凋亡和活性變化的重要基因。
[Abstract]:Objective to construct a mutant strain of Helicobacter pylori ATCC26695hp0788 gene knockout strain ATCC26695 0788kmand to observe the effect of hp0788 gene on the function of GES-1 cells. Methods the gene knockout plasmid vector pSJHK was used to construct the gene knockout plasmid. In the upstream and downstream of the hp0788 gene, 800 ~ 1100bp gene fragment was amplified as the homologous arm. After restriction endonuclease digestion, the plasmid pSJHK-0788 was ligated with plasmid vector to construct the mutant pSJHK-0788. The mutant strain of hp0788 gene knockout was constructed by electroporation. FITC labeling method was used to detect its effect on the adhesion of GES-1 cells, and the co-culture system of Helicobacter pylori and GES-1 cells was constructed with infected plural moi as 200: 1. The effects of ATCC26695 and ATCC26695 0788km on the apoptosis and activity of GES-1 cells were compared. Results the double exchange knockout plasmid of hp0788 gene was constructed. Electroporation of hp0788 gene knockout mutant strain. FITC-labeled ATCC26695 and Helicobacter pylori ATCC26695 0788km mixed with GES-1 cells. The fluorescence intensity of FITC was detected by flow cytometry. The adhesion rate of ATCC26695 group was recorded to be 90.40 in ATCC26695 0788km group. There were significant differences between ATCC26695 and ATCC26695 0788km in cultured GES-1 cells for 8 hours and 16 hours, respectively. The apoptotic rates were 25.26 鹵5.81% and 12.46 鹵12.30% by flow cytometry, respectively. The activity of cells detected by proliferation-toxicity test kit was 5340% and 6650%, respectively. The t value of hp0788 gene knockout of Helicobacter pylori ATCC26695 is 3.30 ~ 2.80 ~ 2.93- 2.76-P0.05. Conclusion the adhesion rate of hp0788 knockout helicobacter pylori ATCC26695 to GES-1 cells is decreased. The apoptosis rate of GES-1 was decreased and the cell viability was increased, which indicated that hp0788 gene was an important gene affecting the apoptosis and activity of Helicobacter pylori ATCC26695 infected GES-1 cells.
【作者單位】： 濱州醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)教研室;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(No.81471561) 山東省高等學(xué)�？萍加�(jì)劃項(xiàng)目(No.J15LK02) 濱州醫(yī)學(xué)院科研啟動(dòng)基金項(xiàng)目(No.BY2014KYQD10,BY2015KYQD09)
【分類號(hào)】：R378

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1643025