本文選題：巨細(xì)胞病毒　切入點：核酸疫苗　出處：《湖南師范大學(xué)》2012年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：本論文主要由三個部分組成：(一)巨細(xì)胞病毒及其疫苗和佐劑的概述；(二)巨細(xì)胞病毒M84核酸疫苗輔以分子佐劑HMGB1與IL-18免疫效力的研究；(三)巨細(xì)胞病毒IE1核酸疫苗輔以分子佐劑IL-12在正常小鼠以及糖尿病小鼠中的免疫效力的研究。巨細(xì)胞病毒(cytomegalovirus; CMV)普遍存在于自然界,屬于p皰疹病毒亞科,并具有嚴(yán)格的種屬特異性。人類巨細(xì)胞病毒(HCMV)在人群中普遍感染,可在新生兒及免疫缺陷個體中引起嚴(yán)重疾病。到目前為止還沒有特效藥能夠很好的治療人巨細(xì)胞病毒感染,因此接種巨細(xì)胞病毒疫苗來防治該病毒感染與傳播變得尤為重要。雖然人巨細(xì)胞病毒疫苗的臨床研究已經(jīng)進(jìn)行了近30年,但是至今還沒有一種巨細(xì)胞病毒疫苗獲準(zhǔn)上市。美國已在2001年將研發(fā)CMV疫苗列為優(yōu)先發(fā)展項目。由于巨細(xì)胞病毒具有嚴(yán)格的種屬特異性,因此臨床前實驗階段的CMV疫苗都是在動物模型上面進(jìn)行,本實驗室選用MCMV小鼠模型來研究巨細(xì)胞病毒疫苗及其佐劑的免疫效價。高遷移率族蛋白1(high mobility group box-1 protein, HMGB1)是近幾年來發(fā)現(xiàn)的一種新型細(xì)胞因子,它主要由巨噬細(xì)胞,單核細(xì)胞,垂體細(xì)胞分泌,HMGB1能夠介導(dǎo)細(xì)胞的遷移和分化,促進(jìn)樹突狀細(xì)胞表達(dá)CD40、CD54、CD58等,這表明HMGB1可以促進(jìn)免疫反應(yīng)。HMGB1還能提高IL-2的轉(zhuǎn)錄水平；白介素18(interleukin 18)是發(fā)現(xiàn)較早的一種細(xì)胞因子,它能夠誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生IFN-γ、GM-CSF, IL-2及TNF-α等其他TH1型細(xì)胞因子,從而促進(jìn)免疫反應(yīng)；白介素12(interleukin 12)主要和細(xì)胞免疫應(yīng)答有關(guān),是免疫過程中重要的調(diào)節(jié)因子,重組IL-12已被證明是一種很好的免疫佐劑。本論文首先選取鼠巨細(xì)胞病毒M84核酸疫苗作為抗原,以HMGB1和IL-18作為分子佐劑共同免疫小鼠。免疫之后四周用致死劑量的病毒攻擊小鼠,通過存活率,體重丟失率以及攻毒5天后小鼠脾臟中的病毒滴度去衡量疫苗和佐劑的免疫效價。實驗結(jié)果表明,M84輔以分子佐劑IL-18與HMGB1共同免疫小鼠后能夠顯著的提高疫苗的保護(hù)率,而且IL-18的效果好于HMGB1。糖尿病是由各種因素作用于機(jī)體導(dǎo)致胰島功能減退而引發(fā)的代謝紊亂綜合征。糖尿病人的自身免疫系統(tǒng)會出現(xiàn)不同程度降低因此對各種病毒易感。我們選取鼠巨細(xì)胞病毒IEl核酸疫苗作為抗原,以IL-12的真核表達(dá)質(zhì)粒作為分子佐劑,分別免疫健康小鼠與糖尿病小鼠。結(jié)果顯示,加了佐劑可以增強(qiáng)疫苗的細(xì)胞應(yīng)答水平,而且同劑量的疫苗在健康小鼠中引起的細(xì)胞免疫應(yīng)答水平較糖尿病小鼠要高,說明與健康小鼠相比,糖尿病小鼠的免疫應(yīng)答能力較弱。用致死劑量病毒攻擊小鼠后,結(jié)果顯示,加了佐劑的免疫組比IE1單獨免疫組的保護(hù)效果要好,在正常小鼠中加入10μg IL-12就能夠起到很好的保護(hù)效果,而在糖尿病小鼠中需要100μgIL-12配合疫苗共同免疫才能顯著提高保護(hù)率,這說明糖尿病小鼠需要較多的佐劑劑量才能達(dá)到較好的保護(hù)效果。
[Abstract]:This paper consists of three parts: (a) an overview of cytomegalovirus and vaccine and adjuvant; (two) study of cytomegalovirus M84 molecules with DNA vaccine adjuvant HMGB1 and IL-18 immune effect; (three) immune efficacy of cytomegalovirus IE1 molecules with DNA vaccine adjuvant of IL-12 in normal mice and diabetic mice.. cytomegalovirus (cytomegalovirus; CMV) exists widely in nature, belongs to the P subfamily of herpes simplex virus, and has a strict species specificity. Human cytomegalovirus (HCMV) infection in the general population, can cause severe disease in neonates and immunocompromised individuals. So far there is no drug can be a good treatment of people cytomegalovirus infection, so vaccination cytomegalovirus vaccine to prevent the virus infection and spread has become particularly important. Although clinical study on human cytomegalovirus vaccine After nearly 30 years, but still does not have a cytomegalovirus vaccine approved. The United States in 2001 will be CMV vaccine as a priority development projects. Since the virus has strict species specificity, so pre clinical experimental stage CMV vaccine were carried out in the animal model, the titer of MCMV mice the laboratory model is chosen to study the CMV vaccine and adjuvant. High mobility group protein 1 (high mobility group box-1 protein, HMGB1) is a new cytokine found in recent years, which is mainly composed of macrophages, mononuclear cells, secretion, migration and differentiation of HMGB1 can mediate cells, dendritic cells promote the expression of CD40, CD54, CD58 etc., which indicates that HMGB1 can promote the immune response of.HMGB1 can enhance the transcriptional level of IL-2; interleukin 18 (interleukin 18) are found in an earlier Cytokine, which can induce IFN- cells to produce GM-CSF, IL-2 gamma, TNF- alpha and other TH1 cytokines, thereby promoting immune response; interleukin 12 (interleukin 12) is mainly concerned with cellular immune response, is an important factor in immune regulation, recombinant IL-12 has been proved to be a good immune this paper first selected adjuvant. Murine cytomegalovirus DNA vaccine M84 as antigen, HMGB1 and IL-18 as molecular adjuvant to immune mice. Four weeks after immunization with a lethal dose of virus attack by mice survival rate, titers of virus titer and infection rate of weight loss in the spleen 5 days in mice to measure vaccine and adjuvant. The experimental results show that M84 with molecular adjuvant IL-18 and HMGB1 co immunized mice can significantly improve the vaccine protection rate, and the effect of IL-18 is better than HMGB1. by all kinds of factors for diabetes For the metabolic disorder of islet dysfunction caused by the syndrome of diabetes patients. Cause the body's own immune system will be reduced so on various virus susceptibility. We select murine cytomegalovirus DNA vaccine IEl as antigen to IL-12 eukaryotic expression plasmid as a molecular adjuvant, were immunized healthy mice with diabetic mice. The results showed, plus adjuvant can enhance cell vaccine response level, and the same dose of vaccine in healthy mice cellular immune response caused by diabetic mice was higher than that of healthy mice and diabetic mice, the immune response is weak. With a lethal dose of virus attack mice. The results showed that with better protection effect group of immune adjuvant immunized group than IE1 alone, adding 10 in normal mice g IL-12 can play a good protective effect, and in diabetes In mice, 100 micron gIL-12 vaccine combined with vaccine can significantly improve the protection rate. This indicates that diabetic mice need more adjuvant dose to achieve better protection effect.

【學(xué)位授予單位】：湖南師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R392-33

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本文編號：1642167