本文選題：干擾素　切入點(diǎn)：分子伴侶　出處：《免疫學(xué)雜志》2017年03期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的構(gòu)建小鼠干擾素epsilon蛋白的原核表達(dá)質(zhì)粒,誘導(dǎo)表達(dá)和純化后獲得穩(wěn)定的可溶性重組蛋白。方法將目的基因克隆到表達(dá)載體p ET28a-SUMO,與能同時(shí)表達(dá)3個(gè)分子伴侶gro ES、gro EL和tig的質(zhì)粒p G-tf2一起轉(zhuǎn)化至大腸桿菌表達(dá)菌株BL21(DE3),用異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)誘導(dǎo)表達(dá)。通過(guò)Ni-NTA親和層析柱、Desalting柱、Q-HP柱及Superdex75分子篩層析經(jīng)行純化后,用Ulp1酶切,并對(duì)目標(biāo)蛋白進(jìn)行質(zhì)譜分析。對(duì)目標(biāo)蛋白抑制腫瘤細(xì)胞增長(zhǎng)活性、刺激細(xì)胞產(chǎn)生抗病毒蛋白的活性進(jìn)行鑒定。結(jié)果成功構(gòu)建了重組質(zhì)粒p ET28a-SUMO-IFN-ε和分子伴侶共表達(dá),獲得較多可溶性蛋白。目標(biāo)蛋白酶切后仍可溶,SDS-PAGE分析顯示重組IFN-ε蛋白表觀相對(duì)分子質(zhì)量為22 000。質(zhì)譜分析證實(shí)目標(biāo)蛋白的序列和小鼠IFN-ε的序列吻合。小鼠IFN-ε能夠抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)并能誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生抗病毒蛋白Mx A。結(jié)論小鼠IFN-ε蛋白可以和分子伴侶一起在原核系統(tǒng)中以可溶形式表達(dá),并證明此蛋白具有生物學(xué)活性。
[Abstract]:Objective to construct the prokaryotic expression plasmid of mouse interferon epsilon protein. After induction, expression and purification, a stable soluble recombinant protein was obtained. Methods the target gene was cloned into the expression vector pET28a-SUMO.The recombinant plasmid pG-tf2, which could simultaneously express three molecular chaperones, gro Espgro El and tig, was transformed into Escherichia coli. Strain BL21DDE3 was induced by isopropyl- 尾 -D- thiogalactoside (IPTG) and purified by Ni-NTA affinity chromatography with desalting column Q-HP column and Superdex75 molecular sieve chromatography. The target protein was digested by Ulp1 and analyzed by mass spectrometry. The inhibition activity of target protein on tumor cell growth and the activity of stimulating cell to produce antiviral protein were identified. Results the recombinant plasmid pET28a-SUMO-IFN- 蔚 was successfully constructed and co-expressed with molecular chaperone. More soluble proteins were obtained. SDS-PAGE analysis showed that the apparent molecular weight of recombinant IFN- 蔚 protein was 22 000. Mass spectrometry confirmed that the sequence of target protein was consistent with that of mouse IFN- 蔚. Mouse IFN- 蔚 could be inhibited. Conclusion the mouse IFN- 蔚 protein can be expressed in a soluble form in the prokaryotic system together with the molecular chaperone, and can induce the cell to produce the antiviral protein MxA.Conclusion the mouse IFN- 蔚 protein can be expressed in the prokaryotic system together with the molecular chaperone. It is proved that the protein has biological activity.
【作者單位】： 第三軍醫(yī)大學(xué)西南醫(yī)院全軍泌尿外科研究所;大坪醫(yī)院婦產(chǎn)科;第三軍醫(yī)大學(xué)西南醫(yī)院全軍免疫學(xué)研究所;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(81270845)
【分類號(hào)】：R3411

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本文編號(hào)：1637073