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利用酵母雙雜交系統(tǒng)篩選并鑒定出與MCM4 C末端結(jié)構(gòu)域(MCM4-CTD)相互作用的蛋白

發(fā)布時(shí)間:2018-03-14 14:55

  本文選題:微小染色體維持蛋白復(fù)合物 切入點(diǎn):MCM4-CTD 出處:《華中科技大學(xué)》2012年碩士論文 論文類型:學(xué)位論文


【摘要】:DNA復(fù)制的嚴(yán)謹(jǐn)性和準(zhǔn)確性對(duì)于遺傳信息的傳遞有重要的作用,,微小染色體維持蛋白復(fù)合物(MCM complex)是由六個(gè)亞基組成的六聚體,在真核細(xì)胞的DNA復(fù)制過程中起解旋酶的作用。在DNA損傷(DNA damage)時(shí),復(fù)制叉會(huì)停止,過度的解旋會(huì)產(chǎn)生過多的單鏈DNA(ssDNA)從而能引起復(fù)制叉及整個(gè)基因組的不穩(wěn)定。研究發(fā)現(xiàn),MCM復(fù)合物中的一個(gè)最保守的亞基MCM4的C末端結(jié)構(gòu)域(MCM4-CTD),其編碼基因的大小為648bp,可以調(diào)控整個(gè)MCM復(fù)合物,在停止的復(fù)制叉處阻止它過度解旋,防止產(chǎn)生過多的單鏈DNA,這就預(yù)示著在DNA損傷時(shí)存在DNA損傷反應(yīng)過程中相關(guān)的MCM4-CTD的重要作用。我們利用酵母雙雜交實(shí)驗(yàn),將MCM4-CTD克隆到BD載體上,從酵母的cDNA文庫中篩選并鑒定出與之相互作用的蛋白SNF12,它是染色體重塑蛋白復(fù)合物(chromatin remodeling complex)SWI/SNF中的一個(gè)亞基。由此我們推測(cè)出在DNA損傷反應(yīng)的過程中,染色體的重塑活性也參與到DNA復(fù)制的調(diào)控中。
[Abstract]:The rigour and accuracy of DNA replication play an important role in the transmission of genetic information. The microchromosome maintenance protein complex (MCM complex) is a hexamer composed of six subunits. It acts as a helicase in the process of DNA replication in eukaryotic cells. During DNA damage, the replication fork stops. Excessive unwinding produces excessive single-stranded DNA ssDNA), which can lead to replication forks and instability of the entire genome. It has been found that the C-terminal domain of MCM4, one of the most conserved subunits of the complex, is MCM4-CTDN, which encodes a gene size of 648 bp. Can regulate the entire MCM complex, We use yeast two-hybrid experiments to prevent excessive unwinding and excessive production of single strand DNAs at the stop replication forks, which indicate the important role of MCM4-CTD in the process of DNA damage response during DNA damage. MCM4-CTD was cloned into BD vector, and the interacting protein SNF12 was screened and identified from yeast cDNA library, which is a subunit of chromosome remodeling protein complex remodeling complex)SWI/SNF. We speculate that SNF12 is involved in the process of DNA damage response. The activity of chromosome remodeling is also involved in the regulation of DNA replication.
【學(xué)位授予單位】:華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2012
【分類號(hào)】:R3416

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào):1611708

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