本文選題：miR-143　切入點：miR-320　出處：《北京協(xié)和醫(yī)學院》2012年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：近年來,miRNA的研究已成為生命科學理論和應用研究的熱點。在理論方面,著重研究miRNA如何通過調節(jié)轉錄后基因表達模式參與細胞分化、增殖和凋亡等過程,進而在胚胎植入和植入后發(fā)育等方面發(fā)揮作用;在應用方面,miRNA組織特異性表達模式及SNP改變有可能成為疾病預警和診斷的新標志。本研究從miRNA角度研究胚胎植入和愛爾茨海默疾病中miRNA所起的作用。一、MiR-143和miR-320在胚胎植入過程中的作用目的:分析2個大鼠子宮胚胎植入前期和植入期差異表達miRNAs,即miR-143和miR-320在大鼠胚胎植入過程中的作用及其在人子宮內膜基質細胞中的作用,為研究miRNAs在胚胎植入過程中的作用機制提供理論基礎。方法:1.利用Northern印跡和原位雜交,分析miR-143和miR-320在大鼠胚胎植入過程中的表達變化及時間和空間分布2.利用Northern印跡和原位雜交,檢測miR-143和miR-320假孕、人工誘導蛻膜化和延遲著床激活大鼠子宮中的表達模式,分析了 17β-雌二醇和孕酮對于大鼠子宮中miR-143和miR-320表達的影響。3.利用Edu、MTT、Tunel、Transwell小室等方法檢測miRNAs對人子宮內膜基質細胞的增殖、凋亡、遷移、浸潤功能的影響。4.利用Western blot、雙熒光素酶活性分析等分子生物學方法驗證miRNAs與LIFR的相互作用。結果:1.MiR-143在大鼠胚胎植入期和植入后期表達水平顯著高于植入前期,其定位于子宮內膜腺上皮細胞、內腔上皮細胞、子宮內膜基質和蛻膜。MiR-320在大鼠胚胎植入期表達水平明顯低于植入前期和植入后期,并定位于子宮內膜植入位點子宮內膜腺上皮;2.大鼠假孕對miR-143和miR-320的表達水平?jīng)]有明顯影響。延遲著床激活能促進miR-143的表達,但抑制miR-320的水平。人工誘導蛻膜化能促進miR-143的表達,對miR-320的表達沒有顯著影響。17β-雌二醇和孕酮對大鼠子宮miR-143的表達水平?jīng)]有明顯的影響,但孕酮可誘導大鼠子宮miR-320的表達。3.過表達miR-143,使人子宮內膜基質細胞的浸潤能力增強(P0.05),遷移能力沒有顯著性差別,增殖能力降低(P0.05),凋亡能力沒有顯著性差別。過表達miR-320,使人子宮內膜基質細胞的浸潤能力增強(P0.05),遷移能力沒有顯著性差別,增殖能力變強(P0.05),凋亡能力沒有顯著性差別。4.雙熒光素酶活性分析顯示,miR-143和miR-320與包含"seed"片段PGL3-LIFR 3'-UTR的質粒共轉染細胞后降低酶活性,提示miR-143和miR-320的"seed"片段與LIFR的3'-UTR區(qū)有一定的結合能力。但僅miR-143過表達或敲低后能影響雙熒光素酶的活性,且僅過表達miR-143能抑制LIFR蛋白水平,miR-320對LIFR蛋白的表達沒有顯著影響。這些結果提示LIFR為miR-143的靶基因,不是miR-320的靶基因。結論:1.在大鼠妊娠早期,miR-143的表達增加有利于胚胎植入的發(fā)生,其表達增加主要是由活化的胚泡和蛻膜化引起的。在人子宮內膜基質細胞中,miR-143調節(jié)細胞的浸潤和增殖的能力,這一作用可能部分是通過調節(jié)其靶基因LIFR實現(xiàn)的。2.在大鼠妊娠早期,miR-320的表達降低可能有利于胚胎植入的發(fā)生,其表達降低主要是由活化的胚泡引起的,孕酮促進大鼠子宮miR-320的表達。。在人子宮內膜基質細胞中,miR-320參與細胞的浸潤和增殖,這一作用可能是通過LIFR以外的通路實現(xiàn)的。二、蒙古人群中miR-124SNP與阿爾茨海默的相關性研究目的:從miR-124方面研究與阿爾茨海默病的關系,為理解AD的發(fā)病機制提供新的視角,為研究miRNAs在神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病中(?)作用機制提供理論基礎。方法:1.應用PCR,測序技術和基因型分析,檢測病例和對照中的突變和SNP位點。2.應用生物信息學預測SNP位點出現(xiàn)對pri-miR-124二級結構的影響3.應用Northern blot and Real-time PCR檢測SNP位點出現(xiàn)對成熟態(tài)miR-124的影響。結果:1.在pri-miR-124中發(fā)現(xiàn)了 rs531564的G/C的SNP位點,但是這個SNP的出現(xiàn)并沒有對阿爾茨海默做出有意義的貢獻。2.生物信息學預測,SNP位點G/C導致其二級結構中出現(xiàn)了一個頸環(huán)結構的變化。3.Northern blot and Real-time PCR結果顯示,成熟態(tài)miRNA表達量的上升(P0.05)。結論:盡管miR-124 SNP能夠影響成熟態(tài)miR-124的產(chǎn)生,但miR-124對蒙古人群阿爾茨海默的影響力不是很大。即使如此,也不能認定miR-124阿爾茨海默無關,仍需要在其他人種中進行深入研究。
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【學位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R3416

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本文編號：1606372