本文選題：miR-143　切入點(diǎn)：miR-320　出處：《北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院》2012年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

【摘要】：近年來(lái),miRNA的研究已成為生命科學(xué)理論和應(yīng)用研究的熱點(diǎn)。在理論方面,著重研究miRNA如何通過(guò)調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄后基因表達(dá)模式參與細(xì)胞分化、增殖和凋亡等過(guò)程,進(jìn)而在胚胎植入和植入后發(fā)育等方面發(fā)揮作用;在應(yīng)用方面,miRNA組織特異性表達(dá)模式及SNP改變有可能成為疾病預(yù)警和診斷的新標(biāo)志。本研究從miRNA角度研究胚胎植入和愛(ài)爾茨海默疾病中miRNA所起的作用。一、MiR-143和miR-320在胚胎植入過(guò)程中的作用目的:分析2個(gè)大鼠子宮胚胎植入前期和植入期差異表達(dá)miRNAs,即miR-143和miR-320在大鼠胚胎植入過(guò)程中的作用及其在人子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞中的作用,為研究miRNAs在胚胎植入過(guò)程中的作用機(jī)制提供理論基礎(chǔ)。方法:1.利用Northern印跡和原位雜交,分析miR-143和miR-320在大鼠胚胎植入過(guò)程中的表達(dá)變化及時(shí)間和空間分布2.利用Northern印跡和原位雜交,檢測(cè)miR-143和miR-320假孕、人工誘導(dǎo)蛻膜化和延遲著床激活大鼠子宮中的表達(dá)模式,分析了 17β-雌二醇和孕酮對(duì)于大鼠子宮中miR-143和miR-320表達(dá)的影響。3.利用Edu、MTT、Tunel、Transwell小室等方法檢測(cè)miRNAs對(duì)人子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞的增殖、凋亡、遷移、浸潤(rùn)功能的影響。4.利用Western blot、雙熒光素酶活性分析等分子生物學(xué)方法驗(yàn)證miRNAs與LIFR的相互作用。結(jié)果:1.MiR-143在大鼠胚胎植入期和植入后期表達(dá)水平顯著高于植入前期,其定位于子宮內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞、內(nèi)腔上皮細(xì)胞、子宮內(nèi)膜基質(zhì)和蛻膜。MiR-320在大鼠胚胎植入期表達(dá)水平明顯低于植入前期和植入后期,并定位于子宮內(nèi)膜植入位點(diǎn)子宮內(nèi)膜腺上皮;2.大鼠假孕對(duì)miR-143和miR-320的表達(dá)水平?jīng)]有明顯影響。延遲著床激活能促進(jìn)miR-143的表達(dá),但抑制miR-320的水平。人工誘導(dǎo)蛻膜化能促進(jìn)miR-143的表達(dá),對(duì)miR-320的表達(dá)沒(méi)有顯著影響。17β-雌二醇和孕酮對(duì)大鼠子宮miR-143的表達(dá)水平?jīng)]有明顯的影響,但孕酮可誘導(dǎo)大鼠子宮miR-320的表達(dá)。3.過(guò)表達(dá)miR-143,使人子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞的浸潤(rùn)能力增強(qiáng)(P0.05),遷移能力沒(méi)有顯著性差別,增殖能力降低(P0.05),凋亡能力沒(méi)有顯著性差別。過(guò)表達(dá)miR-320,使人子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞的浸潤(rùn)能力增強(qiáng)(P0.05),遷移能力沒(méi)有顯著性差別,增殖能力變強(qiáng)(P0.05),凋亡能力沒(méi)有顯著性差別。4.雙熒光素酶活性分析顯示,miR-143和miR-320與包含"seed"片段PGL3-LIFR 3'-UTR的質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染細(xì)胞后降低酶活性,提示miR-143和miR-320的"seed"片段與LIFR的3'-UTR區(qū)有一定的結(jié)合能力。但僅miR-143過(guò)表達(dá)或敲低后能影響雙熒光素酶的活性,且僅過(guò)表達(dá)miR-143能抑制LIFR蛋白水平,miR-320對(duì)LIFR蛋白的表達(dá)沒(méi)有顯著影響。這些結(jié)果提示LIFR為miR-143的靶基因,不是miR-320的靶基因。結(jié)論:1.在大鼠妊娠早期,miR-143的表達(dá)增加有利于胚胎植入的發(fā)生,其表達(dá)增加主要是由活化的胚泡和蛻膜化引起的。在人子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞中,miR-143調(diào)節(jié)細(xì)胞的浸潤(rùn)和增殖的能力,這一作用可能部分是通過(guò)調(diào)節(jié)其靶基因LIFR實(shí)現(xiàn)的。2.在大鼠妊娠早期,miR-320的表達(dá)降低可能有利于胚胎植入的發(fā)生,其表達(dá)降低主要是由活化的胚泡引起的,孕酮促進(jìn)大鼠子宮miR-320的表達(dá)。。在人子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞中,miR-320參與細(xì)胞的浸潤(rùn)和增殖,這一作用可能是通過(guò)LIFR以外的通路實(shí)現(xiàn)的。二、蒙古人群中miR-124SNP與阿爾茨海默的相關(guān)性研究目的:從miR-124方面研究與阿爾茨海默病的關(guān)系,為理解AD的發(fā)病機(jī)制提供新的視角,為研究miRNAs在神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病中(?)作用機(jī)制提供理論基礎(chǔ)。方法:1.應(yīng)用PCR,測(cè)序技術(shù)和基因型分析,檢測(cè)病例和對(duì)照中的突變和SNP位點(diǎn)。2.應(yīng)用生物信息學(xué)預(yù)測(cè)SNP位點(diǎn)出現(xiàn)對(duì)pri-miR-124二級(jí)結(jié)構(gòu)的影響3.應(yīng)用Northern blot and Real-time PCR檢測(cè)SNP位點(diǎn)出現(xiàn)對(duì)成熟態(tài)miR-124的影響。結(jié)果:1.在pri-miR-124中發(fā)現(xiàn)了 rs531564的G/C的SNP位點(diǎn),但是這個(gè)SNP的出現(xiàn)并沒(méi)有對(duì)阿爾茨海默做出有意義的貢獻(xiàn)。2.生物信息學(xué)預(yù)測(cè),SNP位點(diǎn)G/C導(dǎo)致其二級(jí)結(jié)構(gòu)中出現(xiàn)了一個(gè)頸環(huán)結(jié)構(gòu)的變化。3.Northern blot and Real-time PCR結(jié)果顯示,成熟態(tài)miRNA表達(dá)量的上升(P0.05)。結(jié)論:盡管miR-124 SNP能夠影響成熟態(tài)miR-124的產(chǎn)生,但miR-124對(duì)蒙古人群阿爾茨海默的影響力不是很大。即使如此,也不能認(rèn)定miR-124阿爾茨海默無(wú)關(guān),仍需要在其他人種中進(jìn)行深入研究。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類(lèi)號(hào)】：R3416

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本文編號(hào)：1606372