本文選題：銅綠假單胞菌　切入點(diǎn)：lasR基因　出處：《第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)》2017年06期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的篩選靶向銅綠假單胞菌lasR基因的反義肽核酸序列,探討其對(duì)銅綠假單胞菌的生物被膜形成能力的影響。方法針對(duì)銅綠假單胞菌lasR基因設(shè)計(jì)4條反義寡核苷酸序列,利用斑點(diǎn)雜交篩選出與lasR基因結(jié)合最佳的反義寡核苷酸序列,以此合成與穿膜肽連接的肽-肽核酸序列。分別用不同濃度的肽-肽核酸導(dǎo)入銅綠假單胞菌生物被膜模式菌PAO1中,測(cè)定不同時(shí)相點(diǎn)細(xì)菌生長(zhǎng)光密度[D(600)]值并進(jìn)行菌落計(jì)數(shù),觀察肽-肽核酸對(duì)其生長(zhǎng)的抑制作用。利用光學(xué)顯微鏡和掃描電鏡觀察生物被膜形成情況。q PCR方法檢測(cè)lasR mRNA表達(dá)。結(jié)果斑點(diǎn)雜交實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:4條反義寡核苷酸序列中3條有雜交信號(hào)產(chǎn)生,其中第1條序列信號(hào)最強(qiáng),以此為基礎(chǔ)合成反義肽核酸。不同濃度的肽-肽核酸對(duì)銅綠假單胞菌表現(xiàn)出不同程度的體外抗菌活性,且隨著濃度增加,抗菌活性增強(qiáng)。結(jié)論有效篩選出高效反義核苷酸序列,經(jīng)篩選出的靶向銅綠假單胞菌lasR基因的反義肽核酸對(duì)銅綠假單胞菌的生長(zhǎng)及生物被膜形成能力有明顯抑制作用,同時(shí)抑制lasR mRNA的表達(dá)。
[Abstract]:Objective to screen the antisense peptide nucleotide sequences of lasR gene targeting Pseudomonas aeruginosa and to explore its effect on the biofilm formation ability of Pseudomonas aeruginosa. Methods four antisense oligonucleotide sequences were designed for lasR gene of Pseudomonas aeruginosa. The best antisense oligonucleotide sequence combined with lasR gene was selected by dot blot hybridization to synthesize the peptide peptide nucleotide sequence which was linked to the transmembrane peptide. Different concentrations of peptide peptide nucleic acid were introduced into PAO1 of Pseudomonas aeruginosa biofilm. The optical density of bacterial growth at different phase points [DX600] was measured and the colony count was carried out. The inhibitory effect of peptide-peptide nucleic acid on its growth was observed. The expression of lasR mRNA was detected by optical microscope and scanning electron microscope. The expression of lasR mRNA was detected by using the method of .q PCR. Results the results of dot blot hybridization showed that there were 4 antisense oligonucleotides. Three of the sequences produced hybrid signals. The antisense peptide nucleic acid was synthesized on the basis of the strongest signal of the first sequence. Different concentrations of peptide-peptide nucleic acid showed different degrees of antibacterial activity against Pseudomonas aeruginosa in vitro, and with the increase of concentration, Conclusion the antisense peptide nucleotides targeting lasR gene of Pseudomonas aeruginosa can inhibit the growth of Pseudomonas aeruginosa and the ability of biofilm formation. The expression of lasR mRNA was also inhibited.
【作者單位】： 第三軍醫(yī)大學(xué)大坪醫(yī)院野戰(zhàn)外科研究所檢驗(yàn)科;陸軍重慶軍事代表局門診部;
【基金】：全軍醫(yī)學(xué)科研“十二五”計(jì)劃面上項(xiàng)目(CWS13J039)~~
【分類號(hào)】：R378.991

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本文編號(hào)：1601456