本文選題：創(chuàng)傷性腦損傷　切入點：調(diào)節(jié)性T細胞　出處：《天津醫(yī)科大學(xué)》2012年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：研究目的:通過觀察分析調(diào)節(jié)性T細胞在顱腦創(chuàng)傷后的變化情況及其對顱腦創(chuàng)傷(Traumatic Brain Injury,TBI)后神經(jīng)功能恢復(fù)情況的影響,明確其在腦創(chuàng)傷中的功能作用,并初步探討其潛在的作用機制。研究方法:本實驗選用清潔級健康成年雄性C57B1/6小鼠共計184只,按照隨機數(shù)字表法將其隨機分為實驗組1(空白對照組,n=46只)、實驗組2(假手術(shù)組,n=46只)、實驗組3(單純TBI組,n=46只)和實驗組4(TBI+CD25抗體組,n=46只)。分組后,我們建立小鼠液壓打擊顱腦創(chuàng)傷模型,并應(yīng)用改良神經(jīng)功能評分法和HE染色,評價其行為學(xué)功能和腦組織病理變化。我們應(yīng)用流式細胞術(shù)和免疫組織化學(xué)染色技術(shù)首先分別觀察了各組小鼠(n=30只)的調(diào)節(jié)性T細胞于傷后1天、3天、5天、7天和14天在外周脾臟和腦組織中的變化情況;其次,通過應(yīng)用Morris水迷宮技術(shù),在造模后7天時,觀察了各組小鼠(n=10只)認(rèn)知功能的差異;再次,應(yīng)用伊文思藍測定了各組小鼠(n=6只)傷后3天的血腦屏障滲透率;最后,我們應(yīng)用免疫組織化學(xué)和TUNEL染色技術(shù)檢測了各組小鼠腦組織中MPO+中性粒細胞和凋亡細胞的變化情況。研究結(jié)果:液壓打擊后,各創(chuàng)傷組小鼠腦組織HE染色均有典型TBI后病理變化,傷后12小時,各創(chuàng)傷組小鼠間神經(jīng)功能評分無差異,但隨著傷情的漸漸恢復(fù),差異逐漸顯現(xiàn)。與實驗組2比較,實驗組3小鼠脾臟中調(diào)節(jié)性T細胞的數(shù)量于3天時降低(P0.5),5天時達谷底(P0.05),之后有所回升,但仍不能恢復(fù)正常;同時巧合的是實驗組3小鼠腦組織中的調(diào)節(jié)性T細胞于3天時出現(xiàn)(P0.05),并于5天時達高峰(P0.05),之后表達減少,但仍有表達;而在實驗組4小鼠中,調(diào)節(jié)性T細胞則無論在脾臟中還是在腦組織中均表達很少。腦創(chuàng)傷后,實驗組3和4小鼠的逃避潛伏期明顯長于實驗組2(P0.05),實驗組4小鼠的逃避潛伏期長于實驗組3(P0.05),而各組小鼠之間游泳速度無差異(P0.05)。較之于實驗組3小鼠,實驗組4小鼠血腦屏障損傷更為嚴(yán)重,伊文思藍滲透率更高(P0.05)。在腦創(chuàng)傷后3天時,MPO+中性粒細胞在腦組織損傷灶周圍及壞死組織中大量聚集,凋亡細胞則主要分布在半影區(qū)。與實驗組3小鼠相比,實驗組4小鼠腦組織中MPO+中性粒細胞和凋亡細胞數(shù)量均顯著增加(P0.05)。實驗組1和2小鼠在各項指標(biāo)檢測中均無差異,未見明顯依文思藍滲漏,MPO+中性粒細胞和凋亡細胞數(shù)也都表達在正常水平。研究結(jié)論:小鼠腦創(chuàng)傷后,調(diào)節(jié)性T細胞可能會透過損傷的血腦屏障由外周組織進入腦實質(zhì),并參與繼發(fā)性腦損傷的發(fā)生發(fā)展。它可能通過抑制中性粒細胞的浸潤,來緩解血腦屏障的損傷和減少神經(jīng)細胞的凋亡,從而改善小鼠腦創(chuàng)傷后神經(jīng)功能的預(yù)后。
[Abstract]:Objective: to observe and analyze the changes of regulatory T cells after traumatic brain injury (TBI) and its effect on the recovery of nerve function after traumatic Brain injury (TBI). Methods: 184 healthy male C57B1 / 6 mice of clean grade were selected in this experiment. They were randomly divided into experimental group (n = 46), control group (n = 46), sham operation group (n = 46), experimental group (n = 46) and test group (n = 46), and group 4 (n = 46) were divided into two groups: the control group (n = 46), the control group (n = 46), the control group (n = 46), the control group (n = 46) and the control group (n = 46). We established a mouse model of traumatic brain injury by hydraulic beating, and applied modified neurological function scoring method and HE staining. To evaluate the behavioral function and pathological changes of brain tissue, we first observed the regulatory T cells of 30 mice in each group by flow cytometry and immunohistochemical staining. The changes of peripheral spleen and brain tissue on the 14th day; Secondly, by using Morris water maze technique, we observed the difference of cognitive function of 10 mice in each group on the 7th day after model making; third, we used Evans blue to measure the blood-brain barrier permeability 3 days after injury in 6 mice of each group; finally, we measured the permeability of blood-brain barrier 3 days after injury. The changes of MPO neutrophils and apoptotic cells in brain tissues of mice in each group were detected by immunohistochemistry and TUNEL staining. There were typical pathological changes in brain tissue of each trauma group after TBI, but there was no difference in neurological function score between each trauma group 12 hours after injury, but the difference gradually appeared with the recovery of injury, and the difference was compared with experimental group 2. The number of regulatory T cells in the spleen of experimental group 3 mice decreased at the 3rd day, and reached the bottom of the valley at 5 days, and then increased, but still could not return to normal. Coincidentally, the regulatory T cells in the brain of the experimental group 3 mice appeared P0.05A on the 3rd day, reached the peak at the 5th day, then decreased, but still expressed, while in the experimental group 4 mice, Regulatory T cells were rarely expressed in the spleen or in the brain. The escape latency of experimental group 3 and 4 mice was longer than that of experimental group 2 (P0.05), and that of experimental group 4 mice was longer than that of experimental group 3 (P0.05), but there was no difference in swimming speed between each group of mice. In experimental group 4, the damage of blood-brain barrier was more serious, and Evans blue permeability was higher than P0.050.The MPO neutrophils accumulated in the brain tissue around the injured area and in the necrotic tissue 3 days after brain trauma. Compared with experimental group 3, the number of MPO neutrophils and apoptotic cells in brain tissue of experimental group 4 mice increased significantly (P 0.05). The number of MPO neutrophils and apoptotic cells were also expressed at normal level. Conclusion: after brain trauma, regulatory T cells may pass through the injured blood-brain barrier into the brain parenchyma. It may alleviate the damage of blood-brain barrier and decrease the apoptosis of nerve cells by inhibiting the infiltration of neutrophils, and thus improve the prognosis of neural function after brain trauma in mice.
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R651.15;R-332

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本文編號：1593954