本文選題：角質(zhì)細(xì)胞　切入點(diǎn)：急性刺激　出處：《暨南大學(xué)》2011年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的：通過(guò)蛋白組學(xué)技術(shù)篩選出用于評(píng)價(jià)皮膚刺激性的候選生物學(xué)標(biāo)記,并初步探討相關(guān)蛋白的相互作用機(jī)制。 方法：原代角質(zhì)細(xì)胞暴露于酸堿化合物4h,更換正常培養(yǎng)基,繼續(xù)培養(yǎng)0、2、4、8和16 h,收集各時(shí)間點(diǎn)樣品進(jìn)行檢測(cè)。應(yīng)用2-DE/MALDI-TOF/TOF MS的技術(shù)篩選出差異表達(dá)蛋白,通過(guò)Western Blot、Immunofluorescence Staining和real time RT-PCR驗(yàn)證差異表達(dá)蛋白在基因和蛋白水平上的表達(dá),以及蛋白在細(xì)胞內(nèi)的定位；檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL-1α的分泌,驗(yàn)證細(xì)胞在不同時(shí)間點(diǎn)對(duì)刺激物的應(yīng)答強(qiáng)度；最后應(yīng)用RNAi技術(shù)研究HSP27和CFL-1蛋白之間的相關(guān)性。 結(jié)果：(1)化合物刺激后,共有20個(gè)蛋白出現(xiàn)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的差異表達(dá)；(2)酸堿刺激物使角質(zhì)細(xì)胞熱休克蛋白27(Heat shock protein 27, HSP27)和銅-鋅超氧化物歧化酶1 (Superoxide dismutase[Cu-Zn], SOD1)表達(dá)下調(diào),人肌動(dòng)蛋白素1 (CFL-1, Cofilin-1)表達(dá)上調(diào)；(3) HSP27、SOD1和CFL1有可能作為評(píng)價(jià)皮膚刺激性的生物學(xué)標(biāo)記物,其中HSP27的變化最為明顯；(4)酸堿刺激物使HSP27出現(xiàn)明顯核轉(zhuǎn)位,有助于進(jìn)一步探討上述差異蛋白的相關(guān)作用機(jī)制；(5)酸堿刺激物誘導(dǎo)后,角質(zhì)細(xì)胞IL-1α的分泌峰值出現(xiàn)在撤去刺激物后的0h和8h；(6)干擾HSP27后,CFL-1的表達(dá)也隨著下調(diào),SDS刺激后,則表達(dá)上調(diào)。 結(jié)論：HSP27、SOD1和CFL1可作為評(píng)價(jià)皮膚刺激性的候選生物學(xué)標(biāo)記；急性刺激能影響角質(zhì)細(xì)胞骨架的改變,HSP27和CFL-1的相互作用參與調(diào)節(jié)急性刺激反應(yīng)。
[Abstract]:Aim: to screen candidate biomarkers for evaluating skin irritation by proteomics and to explore the interaction mechanism of related proteins. Methods: the primary keratinocytes were exposed to acid-base compounds for 4 h, then the normal culture medium was changed, and then cultured for 8 and 16 hours. The samples were collected at different time points for detection. The differentially expressed proteins were screened by 2-DE-MALDI-TOF-TOF MS. The expression of differentially expressed proteins at gene and protein levels and the localization of proteins in cells were verified by Western blottison immunofluorescence Staining and real time RT-PCR, and the secretion of IL-1 偽 in the supernatant of cell culture was detected to verify the response intensity of cells to stimuli at different time points. Finally, RNAi technique was used to study the correlation between HSP27 and CFL-1 protein. Results A total of 20 proteins were significantly differentially expressed after stimulation by 1: 1) the heat shock protein 27 shock protein 27 (HSP27) and the copper zinc superoxide dismutase 1 superoxide dismutase [Cu-Zn] (SOD1) were down-regulated by acid-base stimulators in keratinocytes, and the expression of heat shock protein 27 (HSP27) and copper zinc superoxide dismutase 1 (Cu-Zn) were down-regulated in keratinocytes. The expression of human actin 1 / CFL-1 (Cofilin-1) upregulated the expression of HSP27SOD1 and CFL1 may be used as biological markers for evaluating skin irritation, among which the change of HSP27 is the most obvious) the acid-base stimulator can cause obvious nuclear translocation of HSP27. It is helpful to further explore the related mechanism of the above differentially expressed proteins: after the acid-base stimulation, the peak of IL-1 偽 secretion in keratinocytes appears at 0h and 8h after the withdrawal of the stimulator) and interferes with the expression of IL-1 L-1 after HSP27. The expression was up-regulated. Conclusion 1: HSP27SSOD1 and CFL1 can be used as candidate biomarkers for evaluating skin irritation, and acute stimulation can affect the changes of keratinocyte cytoskeleton. The interaction between HSP27 and CFL-1 may play an important role in regulating the acute stimuli response.
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R346

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本文編號(hào)：1593214