本文選題：角質(zhì)細胞　切入點：急性刺激　出處：《暨南大學》2011年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：目的：通過蛋白組學技術(shù)篩選出用于評價皮膚刺激性的候選生物學標記,并初步探討相關(guān)蛋白的相互作用機制。 方法：原代角質(zhì)細胞暴露于酸堿化合物4h,更換正常培養(yǎng)基,繼續(xù)培養(yǎng)0、2、4、8和16 h,收集各時間點樣品進行檢測。應(yīng)用2-DE/MALDI-TOF/TOF MS的技術(shù)篩選出差異表達蛋白,通過Western Blot、Immunofluorescence Staining和real time RT-PCR驗證差異表達蛋白在基因和蛋白水平上的表達,以及蛋白在細胞內(nèi)的定位；檢測細胞培養(yǎng)上清中IL-1α的分泌,驗證細胞在不同時間點對刺激物的應(yīng)答強度；最后應(yīng)用RNAi技術(shù)研究HSP27和CFL-1蛋白之間的相關(guān)性。 結(jié)果：(1)化合物刺激后,共有20個蛋白出現(xiàn)有統(tǒng)計學意義的差異表達；(2)酸堿刺激物使角質(zhì)細胞熱休克蛋白27(Heat shock protein 27, HSP27)和銅-鋅超氧化物歧化酶1 (Superoxide dismutase[Cu-Zn], SOD1)表達下調(diào),人肌動蛋白素1 (CFL-1, Cofilin-1)表達上調(diào)；(3) HSP27、SOD1和CFL1有可能作為評價皮膚刺激性的生物學標記物,其中HSP27的變化最為明顯；(4)酸堿刺激物使HSP27出現(xiàn)明顯核轉(zhuǎn)位,有助于進一步探討上述差異蛋白的相關(guān)作用機制；(5)酸堿刺激物誘導(dǎo)后,角質(zhì)細胞IL-1α的分泌峰值出現(xiàn)在撤去刺激物后的0h和8h；(6)干擾HSP27后,CFL-1的表達也隨著下調(diào),SDS刺激后,則表達上調(diào)。 結(jié)論：HSP27、SOD1和CFL1可作為評價皮膚刺激性的候選生物學標記；急性刺激能影響角質(zhì)細胞骨架的改變,HSP27和CFL-1的相互作用參與調(diào)節(jié)急性刺激反應(yīng)。
[Abstract]:Aim: to screen candidate biomarkers for evaluating skin irritation by proteomics and to explore the interaction mechanism of related proteins. Methods: the primary keratinocytes were exposed to acid-base compounds for 4 h, then the normal culture medium was changed, and then cultured for 8 and 16 hours. The samples were collected at different time points for detection. The differentially expressed proteins were screened by 2-DE-MALDI-TOF-TOF MS. The expression of differentially expressed proteins at gene and protein levels and the localization of proteins in cells were verified by Western blottison immunofluorescence Staining and real time RT-PCR, and the secretion of IL-1 偽 in the supernatant of cell culture was detected to verify the response intensity of cells to stimuli at different time points. Finally, RNAi technique was used to study the correlation between HSP27 and CFL-1 protein. Results A total of 20 proteins were significantly differentially expressed after stimulation by 1: 1) the heat shock protein 27 shock protein 27 (HSP27) and the copper zinc superoxide dismutase 1 superoxide dismutase [Cu-Zn] (SOD1) were down-regulated by acid-base stimulators in keratinocytes, and the expression of heat shock protein 27 (HSP27) and copper zinc superoxide dismutase 1 (Cu-Zn) were down-regulated in keratinocytes. The expression of human actin 1 / CFL-1 (Cofilin-1) upregulated the expression of HSP27SOD1 and CFL1 may be used as biological markers for evaluating skin irritation, among which the change of HSP27 is the most obvious) the acid-base stimulator can cause obvious nuclear translocation of HSP27. It is helpful to further explore the related mechanism of the above differentially expressed proteins: after the acid-base stimulation, the peak of IL-1 偽 secretion in keratinocytes appears at 0h and 8h after the withdrawal of the stimulator) and interferes with the expression of IL-1 L-1 after HSP27. The expression was up-regulated. Conclusion 1: HSP27SSOD1 and CFL1 can be used as candidate biomarkers for evaluating skin irritation, and acute stimulation can affect the changes of keratinocyte cytoskeleton. The interaction between HSP27 and CFL-1 may play an important role in regulating the acute stimuli response.
【學位授予單位】：暨南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2011
【分類號】：R346

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