本文選題：IL-13　切入點(diǎn)：IL-13Rα2　出處：《南昌大學(xué)》2011年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的： 據(jù)世界衛(wèi)生組織的最新報(bào)道,纖維化疾病已經(jīng)成為分布全球的重大公共衛(wèi)生問題。近十年來,纖維化疾病的發(fā)病率和致死率呈現(xiàn)出顯著上升的趨勢(shì),相關(guān)臨床病例持續(xù)增長(zhǎng)。圍繞纖維化疾病的發(fā)病原因與機(jī)制的研究正日益成為科研人員關(guān)注的焦點(diǎn),基于特異性表達(dá)受體或分子表面標(biāo)記的抗纖維化藥物研發(fā)受到科學(xué)界和醫(yī)藥企業(yè)的高度重視。 研究表明,損傷修復(fù)、非可控性炎癥、腫瘤和動(dòng)脈粥樣硬化等多種疾病都可出現(xiàn)纖維化的表現(xiàn)。而IL-13是纖維化過程中促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)的主要來源——膠原蛋白生成的主要細(xì)胞因子之一。IL-13有兩種不同的受體：IL-13Rα1和IL-13Rα2。IL-13Rα1單獨(dú)存在時(shí)與IL-13的結(jié)合力很低,只在與協(xié)同性因子IL-4Rα結(jié)合形成受體復(fù)合物時(shí)才能有效傳遞IL-13的信號(hào)并發(fā)揮其生物學(xué)功能。IL-13Rα2與IL-13的親和力是IL-13Rα1的約5,000倍,由于其胞內(nèi)區(qū)很短目前認(rèn)為它可能不具有信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的功能。IL-13Ra2有三種表型：包括胞內(nèi)型、膜表面型和可溶型,三者的轉(zhuǎn)換機(jī)制目前仍不清楚,其對(duì)IL-13依賴的膠原蛋白生成以及纖維化疾病的作用還存有爭(zhēng)議。 本文旨在通過對(duì)IL-13刺激人肺成纖維細(xì)胞和肝星狀細(xì)胞后增殖、遷移和膠原蛋白生成情況的檢測(cè)與分析,探討IL-13對(duì)IL-13Rα2表達(dá)的調(diào)控及其與膠原蛋白生成的相關(guān)性,為臨床纖維化疾病的診治提供新的實(shí)驗(yàn)依據(jù)和理論參考。 方法： 1.以IL-13不同濃度刺激人肝星狀細(xì)胞LX-2和人肺成纖維細(xì)胞HFL1,構(gòu)建纖維化體外實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ停?2.MTT法和Transwell技術(shù)觀察IL-13對(duì)細(xì)胞增殖和遷移能力的影響； 3. RT-PCR和ELISA檢測(cè)IL-4Rα、IL-13Rαl和胞內(nèi)型、可溶型IL-13Rα2表達(dá)； 4.免疫細(xì)胞化學(xué)(熒光法)胞內(nèi)型、膜表面型IL-13Rα2表達(dá)與定位； 5. RT-PCR檢測(cè)Ⅰ型膠原蛋白mRNA表達(dá)； 6.羥脯氨酸法(消化法)細(xì)胞培養(yǎng)上清液總膠原含量分析。 結(jié)果： 肝星狀細(xì)胞 1. IL-13能促進(jìn)肝星狀細(xì)胞LX-2的增殖、遷移、Ⅰ型膠原蛋白mRNA的表達(dá)以及總膠原蛋白含量增加,且表現(xiàn)出較為明顯的劑量依賴方式； 2.正常情況下肝星狀細(xì)胞即能表達(dá)IL-4Rα和IL-13Rα1,而IL-13對(duì)兩者的表達(dá)水平?jīng)]有影響； 3.正常肝星狀細(xì)胞LX-2不表達(dá)IL-13Rα2,IL-13刺激后不能介導(dǎo)或上調(diào)其表達(dá)。 肺成纖維細(xì)胞 1.與對(duì)照組相比,低濃度范圍內(nèi)(5～20 ng/m1)的IL-13對(duì)肺成纖維細(xì)胞HFL1增殖、遷移、Ⅰ型膠原蛋白mRNA表達(dá)和總膠原蛋白含量沒有顯著影響； 2.高濃度IL-13(50,100 ng/ml)能以劑量依賴的方式顯著促進(jìn)肺成纖維細(xì)胞HFL1的增殖、遷移、Ⅰ型膠原蛋白mRNA表達(dá)和總膠原蛋白含量的增加； 3. IL-13不改變肺成纖維細(xì)胞LX-2的IL-13Rα1和IL-4Rα表達(dá)水平； 4.未加IL-13刺激的正常肺成纖維細(xì)胞不表達(dá)IL-13Rα2；IL-13在低濃度范圍(5～20 ng/ml)內(nèi)能上調(diào)IL-13Rα2的表達(dá)；高劑量的IL-13對(duì)IL-13Rα2表達(dá)的上調(diào)作用減弱(IL-13：50 ng/ml)甚至消失(IL-13：100 ng/ml)；細(xì)胞內(nèi)的IL-13Rα2主要分布于近細(xì)胞核的中央?yún)^(qū),膜表面IL-13Rα2的表達(dá)很少,可溶型IL-13Rα2的含量約為胞內(nèi)型IL-13Rα2的1/2～2/3。 結(jié)論： IL-13能促進(jìn)人肝星狀細(xì)胞和肺成纖維細(xì)胞的增殖、遷移和膠原蛋白生成(不改變IL-13Rα1和IL-4Rα的表達(dá)水平),但其作用受IL-13Rα2表達(dá)的影響。當(dāng)IL-13Rα2表達(dá)缺失時(shí),IL-13促纖維化的效應(yīng)顯著且呈劑量依賴性；而當(dāng)IL-13Rα2表達(dá)上調(diào)時(shí),IL-13的作用被抑制和減弱。
[Abstract]:Objective:
According to the latest report of the WHO, fibrosis has become a major public health problem in the world. In the past ten years, fibrosis disease incidence and mortality rate showed a significant upward trend, the relevant clinical cases of sustained growth. Research on Causes and mechanism of fibrosis disease is increasingly becoming the focus of attention of researchers. Specific expression of receptors or molecular marker of anti fibrosis drug development by the scientific community and the medical enterprise attaches great importance on.
Research shows that the damage repair, nonresolving inflammation, cancer and atherosclerosis and other diseases may cause fibrosis. In the process of promoting fibrosis and IL-13 is the main source of extracellular matrix -- one of the main cytokines collagen production.IL-13 has two different receptors: IL-13R and IL-13R alpha 2.IL-13R alpha 1 alpha 1 alone binding with IL-13 is very low, only receptor complexes formed in combination with synergy factor IL-4R alpha signal can effectively transfer IL-13 and exert its biological function of.IL-13R and IL-13 2 alpha IL-13R alpha 1 affinity is about 5000 times, due to its short cytoplasmic region at present that it may not function in.IL-13Ra2 with signal transduction has three phenotypes: including intracellular, membrane and soluble, the conversion mechanism of the three are still unclear, the IL-13 dependent generation of collagen and fiber The role of the disease is still controversial.
This paper aims to stimulate the IL-13 human lung fibroblast cells and hepatic stellate cell proliferation, detection and analysis of migration and collagen formation, to investigate the correlation between IL-13 IL-13R expression and regulation of alpha 2 collagen production, to provide new experimental and theoretical basis for clinical diagnosis and treatment of fibrotic diseases.
Method錛，

本文編號(hào)：1589812