本文選題：bFGF　切入點(diǎn)：結(jié)合肽　出處：《暨南大學(xué)》2011年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的：探討前期從噬菌體展示隨機(jī)七肽庫中獲得的新型bFGF特異性結(jié)合肽(P7)對(duì)bFGF誘導(dǎo)的K562細(xì)胞增殖的影響及其機(jī)制。 方法：倒置顯微鏡下觀察結(jié)合MTT法檢測P7對(duì)細(xì)胞的毒性作用,MTT法檢測不同濃度的P7單獨(dú)作用對(duì)K562細(xì)胞增殖的影響,并進(jìn)一步檢測P7對(duì)bFGF刺激的K562細(xì)胞增殖的作用；流式細(xì)胞術(shù)分析P7對(duì)bFGF作用的K562細(xì)胞周期的影響;western blot檢測P7對(duì)bFGF刺激的K562細(xì)胞中細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶ERK1/2和其上游蛋白促增殖信號(hào)分子MEK活化水平的影響；原子力顯微鏡檢測P7對(duì)bFGF刺激的K562細(xì)胞表面超微結(jié)構(gòu)的影響;應(yīng)用蛋白質(zhì)組學(xué)的雙向電泳和質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù),獲得P7處理前后bFGF誘導(dǎo)的K562細(xì)胞中差異表達(dá)蛋白情況,并通過western blot加以驗(yàn)證。 結(jié)果：檢測的濃度范圍內(nèi)P7對(duì)K562細(xì)胞形態(tài)和增殖無顯著影響,但可呈劑量依賴性抑制bFGF誘導(dǎo)的K562細(xì)胞增殖；P7可減少bFGF刺激下處于S期的細(xì)胞比率,使細(xì)胞阻滯在G0/G1期；P7可降低bFGF激活的K562細(xì)胞中信號(hào)分子ERK1/2和MEK的磷酸化水平；bFGF刺激K562細(xì)胞增殖時(shí),細(xì)胞表面粗糙度增加,P7抑制bFGF誘導(dǎo)的K562細(xì)胞增殖時(shí),細(xì)胞表面粗糙度降低；實(shí)驗(yàn)得到了14個(gè)差異表達(dá)蛋白(如PA2G4, EIF3I, PSME2等),其中9種上調(diào),5種下調(diào),并獲得了相應(yīng)的肽質(zhì)量指紋圖譜,western blot也進(jìn)一步驗(yàn)證了差異蛋白PA2G4的表達(dá)情況。 結(jié)論：P7可抑制bFGF誘導(dǎo)的K562細(xì)胞增殖,其抑制作用可能通過阻滯細(xì)胞在G0/G1期、下調(diào)bFGF誘導(dǎo)的K562細(xì)胞中信號(hào)分子ERK1/2和MEK活化水平、降低細(xì)胞膜表面超微結(jié)構(gòu),以及通過影響—些與細(xì)胞增殖相關(guān)蛋白的表達(dá)而實(shí)現(xiàn)的。
[Abstract]:Aim: to investigate the effect of a novel bFGF binding peptide P7 from phage display random heptapeptide library on the proliferation of K562 cells induced by bFGF and its mechanism. Methods: the cytotoxic effects of P7 on K562 cells were observed under inverted microscope. The effects of P7 alone on the proliferation of K562 cells were detected by MTT assay, and the effects of P7 on the proliferation of K562 cells stimulated by bFGF were further examined. The effect of P7 on the cell cycle of K562 cells induced by bFGF was analyzed by flow cytometry. The effects of P7 on the activation of extracellular regulated protein kinase (ERK1/2) and its upstream protein-stimulated proliferative signal molecule (MEK) in K562 cells stimulated by bFGF were detected by western blot. The effect of P7 on the surface ultrastructure of K562 cells stimulated by bFGF was examined by atomic force microscope, and the differential expression protein of K562 cells induced by bFGF before and after P7 treatment was obtained by using proteomics two-dimensional electrophoresis and mass spectrometry. It is verified by western blot. Results: P7 had no significant effect on the morphology and proliferation of K562 cells, but it could inhibit the proliferation of K562 cells induced by bFGF in a dose-dependent manner. P7 could reduce the ratio of K562 cells in S phase stimulated by bFGF. P7 blocked in G _ 0 / G _ 1 phase could decrease the phosphorylation level of signal molecules ERK1/2 and MEK in K562 cells activated by bFGF. The surface roughness of K562 cells increased when P7 inhibited the proliferation of K562 cells induced by bFGF, and the surface roughness of K562 cells decreased when P7 inhibited the proliferation of K562 cells induced by bFGF. Fourteen differentially expressed proteins (such as PA2G4, EIF3I, PSME2, etc.) were obtained, of which 9 were up-regulated and 5 down-regulated, and the corresponding peptide mass fingerprint Western blot was obtained to further verify the expression of differential protein PA2G4. Conclusion the proliferation of K562 cells induced by bFGF can be inhibited by WP7. The inhibition may decrease the level of ERK1/2 and MEK activation in K562 cells induced by bFGF at G _ 0 / G _ 1 phase and decrease the ultrastructure of cell membrane surface. And by influencing the expression of proteins associated with cell proliferation.
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R329

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本文編號(hào)：1585317