本文選題：bFGF　切入點：結(jié)合肽　出處：《暨南大學》2011年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：目的：探討前期從噬菌體展示隨機七肽庫中獲得的新型bFGF特異性結(jié)合肽(P7)對bFGF誘導的K562細胞增殖的影響及其機制。 方法：倒置顯微鏡下觀察結(jié)合MTT法檢測P7對細胞的毒性作用,MTT法檢測不同濃度的P7單獨作用對K562細胞增殖的影響,并進一步檢測P7對bFGF刺激的K562細胞增殖的作用；流式細胞術(shù)分析P7對bFGF作用的K562細胞周期的影響;western blot檢測P7對bFGF刺激的K562細胞中細胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶ERK1/2和其上游蛋白促增殖信號分子MEK活化水平的影響；原子力顯微鏡檢測P7對bFGF刺激的K562細胞表面超微結(jié)構(gòu)的影響;應用蛋白質(zhì)組學的雙向電泳和質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù),獲得P7處理前后bFGF誘導的K562細胞中差異表達蛋白情況,并通過western blot加以驗證。 結(jié)果：檢測的濃度范圍內(nèi)P7對K562細胞形態(tài)和增殖無顯著影響,但可呈劑量依賴性抑制bFGF誘導的K562細胞增殖；P7可減少bFGF刺激下處于S期的細胞比率,使細胞阻滯在G0/G1期；P7可降低bFGF激活的K562細胞中信號分子ERK1/2和MEK的磷酸化水平；bFGF刺激K562細胞增殖時,細胞表面粗糙度增加,P7抑制bFGF誘導的K562細胞增殖時,細胞表面粗糙度降低；實驗得到了14個差異表達蛋白(如PA2G4, EIF3I, PSME2等),其中9種上調(diào),5種下調(diào),并獲得了相應的肽質(zhì)量指紋圖譜,western blot也進一步驗證了差異蛋白PA2G4的表達情況。 結(jié)論：P7可抑制bFGF誘導的K562細胞增殖,其抑制作用可能通過阻滯細胞在G0/G1期、下調(diào)bFGF誘導的K562細胞中信號分子ERK1/2和MEK活化水平、降低細胞膜表面超微結(jié)構(gòu),以及通過影響—些與細胞增殖相關蛋白的表達而實現(xiàn)的。
[Abstract]:Aim: to investigate the effect of a novel bFGF binding peptide P7 from phage display random heptapeptide library on the proliferation of K562 cells induced by bFGF and its mechanism. Methods: the cytotoxic effects of P7 on K562 cells were observed under inverted microscope. The effects of P7 alone on the proliferation of K562 cells were detected by MTT assay, and the effects of P7 on the proliferation of K562 cells stimulated by bFGF were further examined. The effect of P7 on the cell cycle of K562 cells induced by bFGF was analyzed by flow cytometry. The effects of P7 on the activation of extracellular regulated protein kinase (ERK1/2) and its upstream protein-stimulated proliferative signal molecule (MEK) in K562 cells stimulated by bFGF were detected by western blot. The effect of P7 on the surface ultrastructure of K562 cells stimulated by bFGF was examined by atomic force microscope, and the differential expression protein of K562 cells induced by bFGF before and after P7 treatment was obtained by using proteomics two-dimensional electrophoresis and mass spectrometry. It is verified by western blot. Results: P7 had no significant effect on the morphology and proliferation of K562 cells, but it could inhibit the proliferation of K562 cells induced by bFGF in a dose-dependent manner. P7 could reduce the ratio of K562 cells in S phase stimulated by bFGF. P7 blocked in G _ 0 / G _ 1 phase could decrease the phosphorylation level of signal molecules ERK1/2 and MEK in K562 cells activated by bFGF. The surface roughness of K562 cells increased when P7 inhibited the proliferation of K562 cells induced by bFGF, and the surface roughness of K562 cells decreased when P7 inhibited the proliferation of K562 cells induced by bFGF. Fourteen differentially expressed proteins (such as PA2G4, EIF3I, PSME2, etc.) were obtained, of which 9 were up-regulated and 5 down-regulated, and the corresponding peptide mass fingerprint Western blot was obtained to further verify the expression of differential protein PA2G4. Conclusion the proliferation of K562 cells induced by bFGF can be inhibited by WP7. The inhibition may decrease the level of ERK1/2 and MEK activation in K562 cells induced by bFGF at G _ 0 / G _ 1 phase and decrease the ultrastructure of cell membrane surface. And by influencing the expression of proteins associated with cell proliferation.
【學位授予單位】：暨南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2011
【分類號】：R329

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