發(fā)布時間：2018-03-07 06:39

  本文選題：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞　切入點：營養(yǎng)效應(yīng)　出處：《大連醫(yī)科大學(xué)》2011年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)具有自我更新和多向分化的潛能,在不同的誘導(dǎo)條件下可以分化為成骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、心肌細(xì)胞和神經(jīng)細(xì)胞等多種類型的細(xì)胞。在治療神經(jīng)組織損傷中具有很大的潛力。目前有很多研究顯示BMSCs移植有助于神經(jīng)組織損傷的恢復(fù),但是其恢復(fù)功能的確切機(jī)制仍然不完全清楚。雖然BMSCs的分化和細(xì)胞融合都可能促進(jìn)神經(jīng)功能的恢復(fù),但其較低的存活率不可能完全解釋神經(jīng)損害的恢復(fù)水平。當(dāng)前不斷有證據(jù)顯示BMSCs能夠通過釋放營養(yǎng)因子和細(xì)胞因子促進(jìn)神經(jīng)組織功能的恢復(fù),而BMSCs本身不發(fā)生分化,此種功能稱為MSCs的營養(yǎng)效應(yīng)(trophic effects)。 本實驗排除BMSCs本身對星形膠質(zhì)細(xì)胞(astrocyte,AS)的作用,使用BMSCs的條件培養(yǎng)液來研究BMSCs的營養(yǎng)效應(yīng)對CO致AS損傷的影響,探討B(tài)MSCs的營養(yǎng)效應(yīng)及其臨床開發(fā)應(yīng)用。 方法：采用密度梯度離心法結(jié)合貼壁特性培養(yǎng)大鼠BMSCs。流式細(xì)胞儀檢測BMSCs表面抗原的表達(dá)情況。當(dāng)?shù)?代的BMSCs鋪滿培養(yǎng)瓶底面積的80%左右時,更換含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液,培養(yǎng)24小時后收集上清,保存?zhèn)溆谩o菌條件下進(jìn)行大鼠腦皮質(zhì)AS的培養(yǎng),純化,免疫細(xì)胞化學(xué)染色進(jìn)鑒定。實驗分組：①正常對照組：正常培養(yǎng)液,5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)的AS;②CO組：正常培養(yǎng)液,1%CO+5%CO2培養(yǎng)24h的AS；③條件培養(yǎng)液保護(hù)組：分別加入30%、80%2個濃度的條件培養(yǎng)液置于1%CO+5%CO2培養(yǎng)24h,后置于5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h和48h的AS；④條件培養(yǎng)液治療組：正常培養(yǎng)液,1%CO+5%CO2培養(yǎng)24h后分別加入30%、80%2個濃度的條件培養(yǎng)液后置于5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h和48h的AS。于倒置相差顯微鏡下觀察一般形態(tài)學(xué)變化。采用計數(shù)板計數(shù)法檢測各實驗組細(xì)胞生長增殖情況。以四甲基偶氮唑鹽(MTT)法檢測AS存活率。以比色法測定各實驗組細(xì)胞培養(yǎng)液中乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase, LDH)活性；流式細(xì)胞儀測定各實驗組細(xì)胞凋亡率。 結(jié)果：1、AS的生長增殖隋況：AS在有CO存在的條件下培養(yǎng)24h后數(shù)量明顯少于保護(hù)組和正常對照組(p0.05),低濃度保護(hù)組高濃度保護(hù)組；AS在停用CO的條件下培養(yǎng)24、48h后數(shù)量仍明顯少于保護(hù)組和正常對照組(p0.05),低濃度保護(hù)組高濃度保護(hù)組；AS在停用CO的條件下培養(yǎng)24、48h后治療組數(shù)量多于CO組(p0.05),少于保護(hù)組,其中低濃度治療組高濃度治療組。2、AS存活率的檢測顯示：AS在有CO存在的條件下培養(yǎng)24h后存活率明顯小于保護(hù)組和正常對照組(p0.05),低濃度保護(hù)組高濃度保護(hù)組；AS在停用CO的條件下培養(yǎng)24、48h后存活率仍明顯小于保護(hù)組和正常對照組(p0.05),低濃度保護(hù)組高濃度保護(hù)組；AS在停用CO的條件下培養(yǎng)24h后低濃度治療組存活率略大于CO組(p0.05),高濃度治療組AS存活率明顯大于CO組(p0.05),小于保護(hù)組,其中低濃度治療組高濃度治療組；AS在停用CO的條件下培養(yǎng)48h后治療組存活率仍小于保護(hù)組和正常對照組(p0.05),其中低濃度治療組高濃度治療組。3、AS活性的檢測顯示：AS在有CO存在的條件下培養(yǎng)24h后LDH釋放量明顯多于保護(hù)組和正常對照組(p0.05),低濃度保護(hù)組高濃度保護(hù)組；AS在停用CO的條件下培養(yǎng)24、48h后LDH釋放量仍明顯多于保護(hù)組和正常對照組(p0.05),其中低濃度保護(hù)組高濃度保護(hù)組；AS在停用CO的條件下培養(yǎng)24、48h后治療組的LDH釋放量少于CO組,多于保護(hù)組,其中培養(yǎng)24h后低濃度治療組略大于高濃度治療組(p0.05)；培養(yǎng)48h后低濃度治療組明顯大于高濃度治療組(p0.05)。4、AS凋亡的檢測顯示：AS在有CO存在的條件下培養(yǎng)24h后細(xì)胞凋亡率明顯大于保護(hù)組和正常對照組(p0.05),低濃度保護(hù)組高濃度保護(hù)組；AS在停用CO的條件下培養(yǎng)24、48h后細(xì)胞凋亡率仍明顯大于保護(hù)組和正常對照組(p0.05),其中低濃度保護(hù)組高濃度保護(hù)組；AS在停用CO的條件下培養(yǎng)24、48h后治療組凋亡率小于CO組(p0.05),大于保護(hù)組,其中低濃度治療組高濃度治療組。 結(jié)論：CO可降低體外培養(yǎng)AS的生長速度；在CO致AS損傷前后加入BMSCs條件培養(yǎng)液,通過BMSCs的營養(yǎng)效應(yīng)能夠增加AS的生長速度。CO可降低體外培養(yǎng)AS的存活率；在CO致AS損傷前后加入BMSCs條件培養(yǎng)液,通過BMSCs的營養(yǎng)效應(yīng)能夠增加AS的存活率。CO可使體外培養(yǎng)AS的LDH釋放量增加,破壞細(xì)胞膜的完整性；在CO致AS損傷前后加入BMSCs條件培養(yǎng)液,通過BMSCs的營養(yǎng)效應(yīng)可降低LDH釋放量,保護(hù)細(xì)胞膜的完整性。CO可促進(jìn)體外培養(yǎng)AS的凋亡;在CO致AS損傷前后加入BMSCs條件培養(yǎng)液,通過BMSCs的營養(yǎng)效應(yīng)對損傷所致的細(xì)胞凋亡具有保護(hù)作用。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R329

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本文編號：1578361