本文選題：噬菌體TM　切入點(diǎn)：基因表達(dá)　出處：《中國臨床藥理學(xué)雜志》2016年03期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的通過原核表達(dá)分枝桿菌噬菌體TM4 motif3蛋白和構(gòu)建結(jié)核分枝桿菌標(biāo)準(zhǔn)株H37Rv休眠菌模型,檢測motif3蛋白對(duì)結(jié)核休眠菌的復(fù)蘇作用。方法利用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)技術(shù)擴(kuò)增噬菌體TM4 motif3基序,將PCR產(chǎn)物連接至表達(dá)載體p ET-28a(+),重組質(zhì)粒測序正確后,在大腸桿菌BL21(DE3)中誘導(dǎo)表達(dá),采用非變性方法對(duì)表達(dá)蛋白進(jìn)行純化,并將不同濃度的motif3蛋白加入結(jié)核休眠菌模型中,觀察其對(duì)結(jié)核休眠菌的復(fù)蘇效果及異煙肼對(duì)復(fù)蘇后結(jié)核菌的殺滅作用。結(jié)果得到融合組氨酸殘基的motif3重組蛋白,在12.65 ku處出現(xiàn)目的條帶,濃度為1.1×104pmol·L~(-1)的motif3蛋白對(duì)結(jié)核休眠菌具有明顯的復(fù)蘇作用且復(fù)蘇后結(jié)核菌能被異煙肼殺滅。結(jié)論噬菌體TM4motif3蛋白對(duì)結(jié)核休眠菌具有復(fù)蘇作用。
[Abstract]:Objective to construct a model of Mycobacterium tuberculosis standard strain H37Rv by prokaryotic expression of TM4 motif3 protein of Mycobacterium tuberculosis phage. Methods the TM4 motif3 motif of bacteriophage was amplified by polymerase chain reaction (PCR), and the PCR product was ligated to the expression vector pET-28a (pET-28a). After the recombinant plasmid was sequenced correctly, the recombinant plasmid was induced to express in E. coli BL21 (DE3). The expressed protein was purified by non-denaturing method, and different concentrations of motif3 protein were added to the dormancy bacteria model. The resuscitation effect of isoniazid on the resuscitation of Mycobacterium tuberculosis and the killing effect of isoniazid on the resuscitation were observed. Results the recombinant protein of motif3 fusion histidine residue was obtained and the target band appeared at 12.65 ku. The motif3 protein at the concentration of 1.1 脳 10 4 pmol 路L ~ (-1) can resuscitate the Mycobacterium tuberculosis dormancy and after resuscitation, it can be killed by isoniazid. Conclusion Phage TM4motif3 protein has a resuscitation effect on the dormancy mycobacterium tuberculosis.
【作者單位】： 重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院呼吸與危重癥醫(yī)學(xué)科;
【基金】：國家科技部“十二五”重大專項(xiàng)基金資助項(xiàng)目(2012ZX10003-009) 國家臨床重點(diǎn)�？茖ｍ�(xiàng)經(jīng)費(fèi)基金資助項(xiàng)目[衛(wèi)辦醫(yī)政函2012(949號(hào))]
【分類號(hào)】：R378

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1571011