本文選題：神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞　切入點：netrin-1　出處：《蘇州大學(xué)》2012年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：星形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞是中樞神經(jīng)系統(tǒng)的重要組分，它們通過遷移等參與構(gòu)建和修復(fù)神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)復(fù)雜的結(jié)構(gòu)。細(xì)胞遷移受細(xì)胞內(nèi)外多種因素的調(diào)節(jié)，包括信號傳導(dǎo)、細(xì)胞骨架及參與粘著斑形成的各種分子等。在神經(jīng)發(fā)生、神經(jīng)再生、損傷修復(fù)、免疫、感染和癌癥轉(zhuǎn)移等多種生理病理過程中發(fā)揮重要作用。Netrins是神經(jīng)導(dǎo)向因子家族成員，哺乳動物中已經(jīng)鑒定出來的netrins分子包括三種分泌型（netrin-1、3、4）和兩種跨模型（netrin-G1、G2）。其中，netrin-1是高度保守的成員，與不同的受體結(jié)合對細(xì)胞遷移起著吸引或排斥的作用，引導(dǎo)軸突靶向生長。在神經(jīng)損傷和炎癥的病理過程中，NO在炎癥反應(yīng)的發(fā)生和信號傳導(dǎo)方面起到關(guān)鍵的調(diào)節(jié)作用；NO在中樞神經(jīng)系統(tǒng)可作為神經(jīng)遞質(zhì)，調(diào)節(jié)突觸可塑性，參與長時程增強(qiáng)效應(yīng)。那么，netrin-1對細(xì)胞遷移的影響是否是通過NO調(diào)節(jié)而實現(xiàn)的？本文探討NO對星形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞的遷移和netrin-1及其受體DCC、UNC5B表達(dá)的影響，為進(jìn)一步探尋神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的遷移機(jī)制以及神經(jīng)損傷與炎癥治療提供新思路。 目的：觀察NO對星形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞遷移的影響，檢測NO對神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞netrin-1及其受體DCC、UNC5B表達(dá)的影響，探討神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的遷移機(jī)制以及NO和netrin-1在早期的神經(jīng)損傷修復(fù)中的作用。 方法：(1)取新生1天的SD大鼠大腦皮質(zhì)，進(jìn)行混合膠質(zhì)細(xì)胞原代培養(yǎng)，根據(jù)各種細(xì)胞黏附能力和生長時間的差異，通過機(jī)械振蕩法和差速貼壁法分離純化星形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞。(2)通過MTT法確定NO供體硝普鈉（SNP)最佳給藥濃度。建立星形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠細(xì)胞的劃痕模型，設(shè)置對照組和實驗組，，對照組不作處理，實驗組2%的培養(yǎng)基中加入終濃度為50μmol/L的SNP，分別于不同時間點觀察細(xì)胞遷移情況。(3)SNP處理后，分別于不同時間點（0h、6h、12h、24h、48h、72h）收集細(xì)胞及其培養(yǎng)上清，用NO測定試劑盒檢測培養(yǎng)上清中亞硝酸鹽類的濃度，判斷NO是否主要由外源供體SNP供給。采用western blotting和免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測netrin-1蛋白的表達(dá)變化。(4)設(shè)置對照組、SNP+Hb組和SNP組，相應(yīng)處理24h，采用real timePCR檢測各組細(xì)胞中netrin-1及其受體DCC和UNC5B的mRNA表達(dá)變化。 結(jié)果：(1)采用振蕩培養(yǎng)法和差速貼壁法培養(yǎng)出星形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞，純度在95%以上。(2)通過MTT結(jié)果確定實驗中NO供體硝普鈉合適濃度為50μmol/L。劃痕模型結(jié)果發(fā)現(xiàn)，加入SNP的實驗組中星形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞遷移速度明顯快于對照組，且小膠質(zhì)細(xì)胞的遷移速度相對快于星形膠質(zhì)細(xì)胞。NO檢測試劑盒測定不同時間點的細(xì)胞培養(yǎng)上清，與對照組相比，實驗組中NO2濃度隨著時間的推移明顯增加，說明實驗組中NO主要是由外源供體硝普鈉供給。(3)免疫細(xì)胞化學(xué)和westernblotting結(jié)果都顯示對照組netrin-1表達(dá)較少，而實驗組隨著時間的推移表達(dá)顯著增加（P0.01），星形膠質(zhì)細(xì)胞netrin-1表達(dá)在48h達(dá)到最高，小膠質(zhì)細(xì)胞netrin-1則在24h達(dá)到最高。表明NO濃度較高時能上調(diào)netrin-1表達(dá)。（4）SNP+Hb組與對照組相比，netrin-1、DCC、UNC5B的mRNA表達(dá)無明顯變化，而SNP組與對照組相比，各基因的表達(dá)都明顯上調(diào)，且受體DCC比UNC5B上調(diào)更為明顯（P0.01）。 結(jié)論：NO能促進(jìn)星形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞的遷移，netrin-1及其受體DCC、UNC5B表達(dá)水平升高，表明netrin-1促進(jìn)星形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞的遷移可能是由NO調(diào)控的。推測NO及netrin-1在神經(jīng)損傷修復(fù)中發(fā)揮了一定的作用。
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【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R329

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 孟凡偉,郭慧云,周仁平,張成崗;Hetrin基因在大鼠腦發(fā)育過程中表達(dá)的初步研究[J];神經(jīng)解剖學(xué)雜志;2004年01期

本文編號：1559709