本文關(guān)鍵詞： 兔 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 誘導(dǎo)分化 移植 骨折　出處：《昆明醫(yī)科大學(xué)》2012年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：[目的]：了解兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Bone mesenchymal stem cells,BMSCs)在成骨誘導(dǎo)劑的作用下定向分化為不同分化狀態(tài)的細(xì)胞(包括多能干細(xì)胞、專能干細(xì)胞或前體骨細(xì)胞、成體骨細(xì)胞多個階段),然后將各個階段細(xì)胞移植到兔骨折模型后,觀察不同分化階段細(xì)胞對組織修復(fù)能力的差異及是否已歸巢,以尋找出最適宜移植的細(xì)胞時間和狀態(tài)。 [方法]：體外獲得BMSCs,用GFP轉(zhuǎn)基因標(biāo)記后,向前體骨細(xì)胞定向誘導(dǎo),分別在誘導(dǎo)第0、3、7、14、21、28d檢測ALP活性。將實驗兔隨機分為5組：BMSCs移植組5只；成骨誘導(dǎo)3天移植組10只；成骨誘導(dǎo)7天移植組10只；成骨誘導(dǎo)21天移植組10只；模型對照組5只。建立兔尺骨骨折動物模型。造模成功24h后,將帶GFP的各組細(xì)胞按照3×106cells/kg經(jīng)尺骨骨折處局部注射,分別于第2、4和6周進(jìn)行X射線檢查,第6周全部處死后,取兔尺骨組織制作切片,觀察不同誘導(dǎo)階段的BMSCs移植后對骨折組織治療的效果差異。 [結(jié)果]：①BMSCs能夠正常貼壁成長并具有相應(yīng)的分化能力,通過慢病毒轉(zhuǎn)染GFP基因后不影響細(xì)胞正常生長及分化能力,抗原表達(dá)為CD34-/CD45-/CD73+/CD105+。②成骨誘導(dǎo)過程中進(jìn)行堿性磷酸酶染色,成骨誘導(dǎo)0d組細(xì)胞染色為陰性；誘導(dǎo)3天組部分細(xì)胞染色,出現(xiàn)少量棕紅色；誘導(dǎo)第7大組,大部分染色為強陽性,14、21、28天組和7天組對比陽性細(xì)胞數(shù)無明顯變化。③移植后在動物的組織切片中發(fā)現(xiàn)骨組織中有綠色熒光存在,說明前體骨細(xì)胞已經(jīng)發(fā)生歸巢,并參與了機體重建。④分別于2、4、6周行X射線檢查：5組參數(shù)總評分,BMSCs組和誘導(dǎo)7、21天組比較差異無顯著性意義(P0.05),3天組和模型對照組比較差異有非常顯著性意義(P0.01),3天組和BMSCs組.7、21天組比較差異有顯著性意義(P0.05)。組織形態(tài)學(xué)分析：3天組缺損區(qū)骨端連接緊密,連接區(qū)有大量小梁狀新骨形成,排列較規(guī)則,骨髓腔再通：BMSCs組和7、21天組斷端內(nèi)、外骨痂已相連,骨髓腔未再通：模型對照組骨缺損區(qū)未建立連接,骨斷端之間骨小梁較細(xì)且排列紊亂,骨髓腔未再通。BMSCs和誘導(dǎo)分化的前體骨細(xì)胞在骨損傷的治療上都發(fā)揮了作用,但是BMSCs(?)骨誘導(dǎo)3天組療效更具有顯著差異。 [結(jié)論]：①建立了BMSCs的體外分離、培養(yǎng)、鑒定及GFP標(biāo)記的技術(shù)平臺。②成功建立了兔尺骨骨折模型。③開展了BMSCs誘導(dǎo)分化的不同階段細(xì)胞移植.對組織損傷修復(fù)的療效差異的研究。BMSCs成骨誘導(dǎo)3天移植組的各項檢查指標(biāo)：X射線.病理染色、掃描電鏡較其它組有明顯改善,結(jié)果提示誘導(dǎo)3天組是比較適宜移植的細(xì)胞狀態(tài)。
[Abstract]:Objective: to investigate the differentiation of bone mesenchymal stem cells from rabbit bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) into differentiated cells (including pluripotent stem cells, specialized stem cells or precursor bone cells) under the action of osteogenic inducer. Adult bone cells were transplanted into the rabbit fracture model at different stages. The difference of the ability of tissue repair and the homing of the cells in different differentiation stages were observed in order to find out the most suitable time and state of transplantation. [methods]: BMSCs were obtained in vitro and labeled with GFP gene. The ALP activity was detected on the 0th day after induction by GFP transgenic cells. The experimental rabbits were randomly divided into 5 groups (n = 5): BMSCs transplantation group (n = 5), osteogenic induction group (n = 10) and osteogenic induction group (n = 10). After 7 days of osteogenic induction, 10 rats in the transplantation group, 10 rats in the 21 day group and 5 rats in the model control group, the animal model of ulna fracture was established. After 24 hours of success, the cells with GFP were injected locally at the ulna fracture according to 3 脳 106 cells / kg. X-ray examination was performed at the 4th and 6th weeks, and the ulnar tissues were taken to make sections after 6 weeks of death. The effect of BMSCs transplantation in different induction stages on the treatment of fracture tissue was observed. [results] BMSCs could grow normally and have the corresponding differentiation ability. The normal growth and differentiation of GFP cells were not affected by lentivirus transfection, and the antigen was expressed as alkaline phosphatase staining during osteogenesis induction of CD34-/CD45-/CD73 / CD105. 2. The staining of cells was negative in the group of 0 d after osteogenesis induction, a small amount of brown red was observed in some cells in the group of 3 days of induction, and the seventh largest group was induced in group 7. There was no significant change in the number of positive cells in most of the groups. 3. After transplantation, green fluorescence was found in the bone tissue, indicating that the precursor bone cells had homing. There was no significant difference between the BMSCs group and the 71-day induction group. There was no significant difference between the P0.05D group and the model control group. There was a significant difference between the 3 day group and the model control group (P 0.01) and the model control group (P 0.01) and the model control group (P < 0.05) and the model control group (P < 0.05). The difference was not significant between the BMSCs group and the 721 day group. There was a significant difference between the three groups and the model control group. There was a significant difference between the BMSCs group and the 21 day group (P 0.05). Histomorphology analysis showed that the osseous ends of the defect area in the 3 days group were closely connected. A large number of trabecular-shaped new bone formed in the junction area, arranged regularly. In the broken end of BMSCs group and 721 day group, the external callus was connected, and the medullary cavity was not re-opened. No connection was established in the bone defect area of the model control group. The trabecular meshwork between the broken ends of bone is fine and disordered. Both BMSCs and osteoblasts that induce differentiation play a role in the treatment of bone injury, but BMSCs have no effect on the treatment of bone injury, but BMSCs and BMSCs play an important role in the treatment of bone injury. There was significant difference in the effect of bone induction for 3 days. [conclusion] BMSCs was isolated and cultured in vitro. A rabbit model of ulnar fracture was established successfully by identifying and labeling the technique platform of GFP. 3. Cell transplantation was carried out in different stages of differentiation induced by BMSCs. Study on the difference of curative effect of tissue injury and repair. The three days of osteogenic induction of rabbit ulnar fracture. Item examination measure: X ray. Pathological staining. The results showed that the 3 day induction group was more suitable for transplantation than other groups.
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R329

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 何偉,方斌,龐智輝,李雄,徐傳毅,袁浩;激素性股骨頭壞死的早中期超微結(jié)構(gòu)觀察[J];中醫(yī)正骨;2000年07期

2 柴本甫，湯雪明，李慧;股骨頸骨折患者股骨頭缺血壞死標(biāo)本的透射電鏡觀察[J];中華外科雜志;1995年01期

3 王昊,張西正,張永亮,郭勇;骨組織力學(xué)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的研究[J];國外醫(yī)學(xué).生物醫(yī)學(xué)工程分冊;2003年04期

4 張兵兵,潘君,王遠(yuǎn)亮,唐麗靈,覃素華;流體剪切力在骨生長、重建中的重要作用[J];醫(yī)用生物力學(xué);2005年02期

5 王蕾;裘世靜;;骨顯微損傷的形成和修復(fù)[J];國際骨科學(xué)雜志;2011年03期

6 董曉明;;脫鈣骨的骨細(xì)胞與骨單位同時顯示法[J];濱州醫(yī)學(xué)院學(xué)報;1988年01期

7 李靖,陳一冰,張穎;運動對去勢雌性大鼠骨質(zhì)疏松的保護(hù)作用[J];中華物理醫(yī)學(xué)與康復(fù)雜志;2003年12期

8 周國英,胡軍祥;骨髓間質(zhì)干細(xì)胞及分化成骨的分子機制[J];中國骨傷;2004年12期

9 龐煒;王治倫;周揚;;鎵鹽對骨質(zhì)疏松骨細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的影響[J];西安交通大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2006年01期

10 宋琳亮;;膳食多不飽和脂肪酸對骨細(xì)胞功能的調(diào)節(jié)[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2006年04期

相關(guān)會議論文 前10條

1 李玉美;余資江;康朝勝;何宇紅;余彥;戈果;朱俊德;肖朝倫;;依達(dá)拉奉體外定向誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)細(xì)胞分化[A];中國解剖學(xué)會2011年年會論文文摘匯編[C];2011年

2 閆玉仙;張西正;宋梅;郭春;侍才洪;郭勇;李瑞欣;;拉伸應(yīng)變對3種骨細(xì)胞BMP-2基因表達(dá)的影響[A];天津市生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)會第29屆學(xué)術(shù)年會暨首屆生物醫(yī)學(xué)工程前沿科學(xué)研討會論文集[C];2009年

3 陳鐸;王學(xué)禮;孫紅;焦玉剛;;NaOH消蝕法制備骨細(xì)胞外基質(zhì)材料的實驗研究[A];解剖學(xué)雜志——中國解剖學(xué)會2002年年會文摘匯編[C];2002年

4 續(xù)惠云;甕媛媛;安龍;商澎;;二維回轉(zhuǎn)培養(yǎng)條件對骨細(xì)胞中PKD2蛋白定位表達(dá)和內(nèi)鈣含量的影響[A];中國空間科學(xué)學(xué)會第七次學(xué)術(shù)年會會議手冊及文集[C];2009年

5 李曉亮;劉德伍;梁艷;夏成德;;定向誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞參與創(chuàng)面修復(fù)的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會燒傷外科學(xué)分會2009年學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2009年

6 陳文列;林如輝;劉獻(xiàn)祥;黃云梅;肖承瀅;鄭良樸;吳廣文;黃美雅;李民;李西海;;透骨消痛顆粒干預(yù)骨性關(guān)節(jié)炎模型的超微結(jié)構(gòu)觀察[A];第六屆全國中西醫(yī)結(jié)合基礎(chǔ)理論研究學(xué)術(shù)研討會暨第二屆湖南省中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會肝病專業(yè)學(xué)術(shù)年會論文集[C];2010年

7 高建軍;高林峰;金慰芳;王洪復(fù);朱文菁;魏道林;李凌波;高艷虹;周軼;;γ射線對體外培養(yǎng)骨細(xì)胞的作用觀察[A];中華醫(yī)學(xué)會放射醫(yī)學(xué)與防護(hù)學(xué)分會第三次全中國青年學(xué)術(shù)交流會論文摘要匯編[C];2001年

8 商澎;騫愛榮;田宗成;孟芮;;骨組織中多種細(xì)胞在空間失重性骨丟失中的作用[A];中國空間科學(xué)學(xué)會第七次學(xué)術(shù)年會會議手冊及文集[C];2009年

9 程朝輝;鄭啟新;郭曉東;吳永超;;移植定向誘導(dǎo)的人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞治療脊髓損傷的實驗研究[A];泛長江流域骨科新進(jìn)展暨第九屆全國骨科護(hù)理研討會論文匯編[C];2007年

10 騫愛榮;張維;胡麗芳;高翔;商澎;;抗磁懸浮模擬失重對骨細(xì)胞結(jié)構(gòu)功能的影響[A];中國空間科學(xué)學(xué)會第七次學(xué)術(shù)年會會議手冊及文集[C];2009年

相關(guān)重要報紙文章 前10條

1 天然 編譯;在蠶絲上“播種”骨細(xì)胞[N];大眾科技報;2001年

2 指導(dǎo)專家 第三軍醫(yī)大學(xué)新橋醫(yī)院兒科主任 趙聰敏 教授 記者 江麓;四項運動不適合兒童[N];醫(yī)藥導(dǎo)報;2010年

3 66400部隊骨病專科醫(yī)院院長 宮恩年;注意酒精性股骨頭缺血性壞死[N];科技日報;2007年

4 力軍;不適宜7～12歲少兒的鍛煉項目[N];衛(wèi)生與生活報;2007年

5 生物通;Invitrogen公司推出間充質(zhì)干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基[N];中國醫(yī)藥報;2008年

6 湖南省婦幼保健院;有些運動兒童不宜[N];保健時報;2008年

7 新疆兵團(tuán)農(nóng)九師168團(tuán)南區(qū)中學(xué) 王雷鳴;不適合小學(xué)生的運動[N];中國體育報;2007年

8 均容;非缺鈣性骨質(zhì)疏松[N];中國商報;2001年

9 田寶珍邋本報記者 但細(xì)水;新概念治療股骨頭缺血壞死[N];九江日報;2007年

10 林一;骨質(zhì)疏松患者靜養(yǎng)能防骨折嗎[N];中國醫(yī)藥報;2004年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 王光輝;大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞三維定向誘導(dǎo)和體內(nèi)構(gòu)建組織工程軟骨的初步實驗研究[D];四川大學(xué);2005年

2 朱鋒;小鼠牙本質(zhì)涎磷蛋白基因轉(zhuǎn)染誘導(dǎo)成體間充質(zhì)干細(xì)胞牙向分化的實驗研究[D];四川大學(xué);2006年

3 楊林;胞膜窖/窖蛋白在小鼠牙發(fā)育過程中作用的初步研究[D];四川大學(xué);2007年

4 劉雅娟;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外定向誘導(dǎo)成胰島樣細(xì)胞及其對大鼠胰腺損傷的修復(fù)作用[D];吉林大學(xué);2006年

5 李衛(wèi)哲;降脂、抗凝藥物預(yù)防激素所致股骨頭骨細(xì)胞壞死、凋亡及對Bcl-2表達(dá)的影響[D];吉林大學(xué);2004年

6 孟繁浩;中藥精選小復(fù)方骨疏丹促成骨細(xì)胞骨形成作用的研究[D];沈陽藥科大學(xué);2004年

7 吳瓊;人胚胎干細(xì)胞定向誘導(dǎo)生成內(nèi)皮祖細(xì)胞及內(nèi)皮細(xì)胞促進(jìn)腫瘤生長的作用研究及機制初探[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2010年

8 謝肇;仿生脈沖電磁場治療絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥的實驗研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2004年

9 劉永剛;人EG細(xì)胞分離、培養(yǎng)及其定向誘導(dǎo)為造血細(xì)胞的實驗研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2005年

10 馮衛(wèi);豬異種骨移植靶抗原分布及除抗原處理的研究[D];四川大學(xué);2007年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 朱莎;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞定向誘導(dǎo)前體骨細(xì)胞治療兔骨損傷的研究[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2012年

2 周雯雯;對牙槽骨固有牙槽骨與松質(zhì)骨骨微結(jié)構(gòu)和骨細(xì)胞密度研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2010年

3 張起順;定向誘導(dǎo)的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對脊髓損傷大鼠神經(jīng)功能恢復(fù)的實驗研究[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2011年

4 龍盼盼;定點整合hFⅧ的人胚胎干細(xì)胞定向誘導(dǎo)成間充質(zhì)干細(xì)胞的研究[D];中南大學(xué);2012年

5 王默;對定向誘導(dǎo)MSC各分化時期的研究[D];昆明醫(yī)學(xué)院;2011年

6 張冬燕;細(xì)菌性脂多糖誘導(dǎo)骨細(xì)胞凋亡及釋放HMGB1[D];山東大學(xué);2012年

7 焦聞文;保伽利亞乳桿菌對尿素、肌酐降解能力的定向誘導(dǎo)與誘變[D];中南大學(xué);2007年

8 呂奇峰;隧道內(nèi)定向誘導(dǎo)劈裂注漿機理及其配套檢測方法研究[D];北京交通大學(xué);2010年

9 張偉龍;美國扁莖大豆與不同株型大豆結(jié)構(gòu)比較研究[D];東北師范大學(xué);2006年

10 曲守權(quán);骨細(xì)胞的方向性生長及骨質(zhì)對骨內(nèi)細(xì)胞的抑制作用的研究[D];中國醫(yī)科大學(xué);2003年

，

本文編號：1553039