本文關(guān)鍵詞： 樹突狀細(xì)胞 Toll樣受體 輔助性T細(xì)胞 玉屏風(fēng)散　出處：《濟(jì)南大學(xué)》2011年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的 樹突狀細(xì)胞(dendritic cell, DC)作為體內(nèi)功能最強(qiáng)大的專職抗原遞呈細(xì)胞,是識(shí)別病原體入侵的第一道防線。DC可通過多種模式識(shí)別受體廣泛識(shí)別病原模式分子,從而實(shí)現(xiàn)對(duì)某一類病原的廣泛監(jiān)視效應(yīng)。DC的模式識(shí)別能力不但決定機(jī)體防范病原入侵的監(jiān)視能力,同時(shí)也直接影響獲得性免疫反應(yīng)強(qiáng)度和模式。因此,DC表型變化及其與T細(xì)胞間交互作用規(guī)律是目前感染免疫研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)。中醫(yī)藥依據(jù)經(jīng)典的營衛(wèi)學(xué)說在抗感染、抗病毒等臨床治療中突現(xiàn)其優(yōu)勢(shì),其中,中藥復(fù)方玉屏風(fēng)散(Yu-Ping-Feng, YPF)是中醫(yī)固表抗邪的經(jīng)典方藥,并在抗病毒、抗感染的醫(yī)療實(shí)踐中反復(fù)驗(yàn)證了有效性。因此,本研究擬重點(diǎn)探討YPF調(diào)節(jié)DC模式識(shí)別及DC-T細(xì)胞間信息交流的作用機(jī)制。 方法 1.中藥YPF制劑的制備:根據(jù)YPF配方采用傳統(tǒng)水提醇沉方法制備該復(fù)方制劑。 2. DC的體外培養(yǎng):Balb/C小鼠的骨髓單個(gè)核細(xì)胞,體外GM-CSF聯(lián)合IL-4誘導(dǎo)培養(yǎng)DC,在TLRs配基或聯(lián)合中藥YPF處理前后,觀察DC模式識(shí)別受體(TLR3, TLR4, TLR5, TLR7, TLR9)以及表型特征和功能因子的表達(dá)情況。 3.采用流式細(xì)胞熒光抗體標(biāo)記技術(shù)檢測(cè)DC表面特征性分子(CD11C)、抗原遞呈分子(MHC-II)、共刺激信號(hào)(CD80, CD86)等分子的表達(dá)狀態(tài)。 4.采用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)DC模式識(shí)別受體TLR3, TLR4, TLR5, TLR7, TLR9及CD86,CD80,CD40,CCR7、IL-12p40等功能因子的轉(zhuǎn)錄狀態(tài)。 5.采用DC-T細(xì)胞共培養(yǎng)方法,體外觀察DC在TLRs配基刺激或藥物處理前后,對(duì)T細(xì)胞亞群(Th1/Th2/Th17)分化的通訊能力。 結(jié)果 1.TLRs配基促進(jìn)小鼠骨髓來源DC的成熟并上調(diào)共刺激分子的表達(dá) 在GM-CSF和IL-4聯(lián)合誘導(dǎo)小鼠骨髓來源DC增殖與分化過程中,加入TLR3、TLR4、TLR5、TLR7、TLR9配基,可促進(jìn)DC的成熟,DC表面MHC-Ⅱ分子、CD80和CD86表達(dá)水平顯著升高(P0.05),其中,以TLR4配基LPS刺激組最為顯著(P0.05)。另外,TLRs配基與小劑量LPS聯(lián)合作用可進(jìn)一步增加成熟DC的比例,上調(diào)DC細(xì)胞表面MHC-Ⅱ分子、CD80和CD86的表達(dá)水平,其中LPS和PolyI:C聯(lián)合誘導(dǎo)組升高顯著(P0.05)。 2. LPS與PolyI:C協(xié)同促進(jìn)DC功能因子的表達(dá) RT-PCR結(jié)果顯示:TLRs配基誘導(dǎo)DC成熟的同時(shí),可上調(diào)DC功能因子CCR7、IL-12P40的轉(zhuǎn)錄水平。與LPS或PolyI:C單獨(dú)刺激組相比,LPS聯(lián)合PolyI:C誘導(dǎo)的DC的多種功能因子如CCR7、IL-12P40、CD80、CD86轉(zhuǎn)錄水平顯著上調(diào)(P0.05)。 3. YPF對(duì)DC的促增殖效應(yīng) 在DC的誘導(dǎo)培養(yǎng)體系中,YPF對(duì)小鼠iDC(CD11c+I-Ad-)具有明顯的促增殖效應(yīng),CD11c+細(xì)胞比例和細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)均明顯升高(P0.05),MHC-Ⅱ、CD80、CD86等信號(hào)分子的比例相對(duì)下降(P0.05)。在LPS和PolyI:C聯(lián)合誘導(dǎo)體系中,YPF可進(jìn)一步促進(jìn)DC成熟,上調(diào)MHC-Ⅱ、CD80、CD86等信號(hào)分子的表達(dá)水平。 4. TLRs配基誘導(dǎo)DC對(duì)T細(xì)胞亞群分化的影響 LPS誘導(dǎo)的DC可優(yōu)勢(shì)活化Th1類T細(xì)胞,上調(diào)細(xì)胞因子IFN-γ的分泌,降低IL-10的分泌(P0.05)。LPS聯(lián)合polyI:C誘導(dǎo)的DC可增強(qiáng)Th1類細(xì)胞因子IFN-γ和IL-17的分泌,同時(shí)可抑制T細(xì)胞分泌炎性因子TNFα(P0.05)。LPS聯(lián)合Flagellin誘導(dǎo)的DC可明顯降低T細(xì)胞分泌IFN-γ和IL-17的能力,增強(qiáng)T細(xì)胞對(duì)IL-10的分泌(P0.05)。 5.中藥YPF聯(lián)合TLRs配基誘導(dǎo)DC對(duì)T細(xì)胞亞群分化的影響 中藥YPF在協(xié)同TLRs配基誘導(dǎo)DC成熟的同時(shí),可進(jìn)一步調(diào)節(jié)DC-T細(xì)胞間的信息傳遞。YPF聯(lián)合LPS誘導(dǎo)的DC可增強(qiáng)T細(xì)胞分泌IFN-γ、IL-17和IL-10等細(xì)胞因子(P0.05),而對(duì)TNFα的分泌無明顯影響;YPF聯(lián)合LPS、polyI:C誘導(dǎo)的DC可降低IFN-γ和IL-17的分泌(P0.05),上調(diào)TNFα和IL-10的分泌(P0.05);YPF聯(lián)合LPS、Flagellin誘導(dǎo)的DC可顯著上調(diào)IFN-γ的分泌,抑制TNF-α、IL-17和IL-10的分泌。 結(jié)論 1. TLRs配基可促進(jìn)小鼠骨髓來源DC的成熟,并上調(diào)共刺激因子和遷移相關(guān)功能因子的表達(dá),其中LPS是DC成熟的較好誘導(dǎo)劑。 2.與LPS相比,小劑量TLRs配基聯(lián)合作用對(duì)DC的成熟和信息傳遞功能更有優(yōu)勢(shì),其中以LPS和PolyI:C聯(lián)合作用最為顯著。 3.中藥YPF可促進(jìn)未成熟DC的增殖,同時(shí)可協(xié)同TLRs配基增強(qiáng)成熟DC高表達(dá)抗原遞呈分子和共刺激信號(hào)等功能因子,調(diào)節(jié)DC-T細(xì)胞間的信息傳遞,優(yōu)勢(shì)誘導(dǎo)抗病毒、抗炎因子的表達(dá),降低炎性因子的分泌能力。由此可見,中藥YPF在增強(qiáng)DC成熟上調(diào)共刺激信號(hào)表達(dá)的同時(shí),調(diào)節(jié)DC-T細(xì)胞間信息傳遞能力和傳遞微環(huán)境,優(yōu)勢(shì)促進(jìn)T細(xì)胞發(fā)揮抗病毒、抗炎效應(yīng),清除病原菌,控制炎癥的發(fā)展,提高機(jī)體抵抗病原侵襲的能力。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：濟(jì)南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R392.12

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1541919