本文關(guān)鍵詞： GATA4 STAT3 EGF 轉(zhuǎn)錄活性　出處：《大連理工大學(xué)》2011年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：心臟是胚胎發(fā)育過程中第一個(gè)形成的功能性器官,如果某一環(huán)節(jié)異常,則會引發(fā)先天性心臟病。GATA4是一個(gè)重要的調(diào)控心臟發(fā)育和分化的轉(zhuǎn)錄因子,GATA4基因的突變導(dǎo)致先天性心臟病的發(fā)生。表皮生長EGF促進(jìn)胎兒心肌細(xì)胞增殖,抑制心肌細(xì)胞的分化,對心臟的正常發(fā)育和心功能的維持都起很重要的作用。但是目前心臟中EGF表達(dá)調(diào)節(jié)機(jī)制并不清楚。為了便于研究轉(zhuǎn)錄因子對EGF的轉(zhuǎn)錄調(diào)控,我們構(gòu)建了含EGF啟動子的報(bào)告基因。本研究旨在研究與GATA4相互作用的蛋白,并檢測其對GATA4轉(zhuǎn)錄活性的影響。 在本研究中,通過免疫共沉淀-免疫印跡實(shí)驗(yàn),我們證實(shí)了在細(xì)胞內(nèi)STAT3能與GATA4在細(xì)胞核中形成復(fù)合物。為了判斷它們間的相互作用是直接還是間接,我們采用GST pull-down和免疫印跡實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了STAT3能直接與GATA4相互作用,并且通過缺失體實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)GATA4與STAT3間的相互作用并不依賴GATA4的C-末端的鋅指結(jié)構(gòu)；STAT3的SH2結(jié)構(gòu)域?qū)ζ渑cGATA4間的相互作用是必需的。隨后,我們從大鼠基因組中克隆了EGF啟動子序列,并將其插入到無啟動子的熒光素酶表達(dá)載體pGL3-basic上,構(gòu)建含EGF啟動子的熒光素酶報(bào)告基因。我們利用熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn),驗(yàn)證了GATA4和STAT3都能激活EGF啟動子活性,并且在細(xì)胞內(nèi)具有協(xié)同性。 綜上所述,本研究中證實(shí)了在體內(nèi)和體外,STAT3能和GATA4相互作用,并且STAT3與GATA4的相互作用是通過STAT3的SH2區(qū)域介導(dǎo)的,但是不依賴GATA4的C-末端鋅指結(jié)構(gòu)。我們構(gòu)建了含有EGF啟動子的報(bào)告基因,并且發(fā)現(xiàn)GATA4和STAT3能協(xié)同激活EGF啟動子的轉(zhuǎn)錄活性。
[Abstract]:The heart is the first functional organ formed during embryonic development, and if a link is abnormal, GATA4 is an important transcription factor to regulate cardiac development and differentiation, which leads to the occurrence of congenital heart disease. Epidermal growth of EGF promotes the proliferation of fetal cardiomyocytes and inhibits the differentiation of cardiomyocytes. It plays an important role in the normal development of the heart and the maintenance of cardiac function. However, the regulation mechanism of EGF expression in the heart is not clear. In order to study the transcription regulation of EGF by transcription factors, We constructed a reporter gene containing EGF promoter. The aim of this study was to study the protein interacting with GATA4 and to detect its effect on the transcriptional activity of GATA4. In this study, we confirmed that STAT3 can form complex with GATA4 in the nucleus by immunoprecipitation-immunoblotting assay in order to determine whether the interaction between them is direct or indirect. We used GST pull-down and Western blot experiments to verify that STAT3 can interact with GATA4 directly. Furthermore, we found that the interaction between GATA4 and STAT3 was not dependent on the SH2 domain of GATA4's C-terminal zinc finger structure, STAT3. Subsequently, we cloned the EGF promoter sequence from the rat genome. The luciferase reporter gene containing EGF promoter was constructed by inserting it into the luciferase expression vector pGL3-basic without promoter. We have verified that both GATA4 and STAT3 can activate the activity of EGF promoter by luciferase reporter gene experiment. And there is synergy in the cells. In conclusion, it is confirmed that STAT3 can interact with GATA4 in vivo and in vitro, and that the interaction between STAT3 and GATA4 is mediated by the SH2 region of STAT3. We constructed a reporter gene containing EGF promoter and found that GATA4 and STAT3 can co-activate the transcriptional activity of EGF promoter.
【學(xué)位授予單位】：大連理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R346

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本文編號：1536681