本文關(guān)鍵詞： 牙根吸收 牙根修復(fù) 損傷修復(fù) 動(dòng)物模型 熒光標(biāo)記 組織學(xué)　出處：《南方醫(yī)科大學(xué)》2011年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：研究背景： 牙根外吸收是在臨床上比較常見的現(xiàn)象,導(dǎo)致外吸收最常見的原因是創(chuàng)傷,其次為感染、再植牙、腫瘤或阻生牙壓迫等。進(jìn)行性的牙根外吸收可導(dǎo)致牙髓壞死、牙齒松動(dòng)甚至脫落。但迄今人們尚不清楚其真正的發(fā)生機(jī)制,從而難以對牙根吸收的發(fā)生發(fā)展做出準(zhǔn)確的預(yù)測,加之尚無有效的預(yù)防及治療方法,這就使口腔臨床醫(yī)生面對牙根吸收感到束手無策。因此,牙根吸收成為口腔臨床一大難題之一,越來越為國內(nèi)外口腔醫(yī)學(xué)界的學(xué)者們所關(guān)注,相關(guān)研究報(bào)道也日益增多。 筆者查閱近幾年的相關(guān)文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn),無論是基礎(chǔ)研究還是臨床研究,均未取得突破性的進(jìn)展。牙根吸收的機(jī)制仍未闡明,臨床上牙根吸收的治療仍無明顯成效。然而,令我們感興趣的是,有研究報(bào)道,當(dāng)去除導(dǎo)致牙根吸收或缺損的創(chuàng)傷因素后,牙根吸收可很快停止,缺損部位修復(fù)被激活,一段時(shí)間后,在牙根表面有新的牙骨質(zhì)沉積和新的牙周膜附著的形成,這些表明牙根具有高度的自我修復(fù)潛能。 因此,我們設(shè)想,能否以牙根自然修復(fù)為切入點(diǎn)進(jìn)行一系列研究,從而為牙根吸收的治療提供線索或有意義的啟示呢? 帶著這一問題,我們查閱了相關(guān)文獻(xiàn),發(fā)現(xiàn)有關(guān)牙根自然修復(fù)的研究尚停留于組織學(xué)層面,有關(guān)新生牙骨質(zhì)的來源及類型、牙骨質(zhì)最初沉積的部位及有無新的牙周膜附著形成,均報(bào)道不一,尚需嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膶?shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)去論證。通過分析發(fā)現(xiàn),以往研究所建立的動(dòng)物模型多采用正畸加力方式導(dǎo)致牙根吸收,然后停止加力觀察牙根有無修復(fù),但因加力方式易受外界因素的干擾、力值衰減以及牙根吸收具有部位及程度的不可控性等因素的影響,所建立的動(dòng)物模型具有不穩(wěn)定性及難以重復(fù)性。因此,能否建立穩(wěn)定、可靠的牙根修復(fù)動(dòng)物模型將對探討牙根自然修復(fù)發(fā)生的生物學(xué)機(jī)制具有重要意義。 近年來,微螺釘種植體(mini-screw implant, MSI)作為絕對支抗的重要手段之一,因其簡便、創(chuàng)傷小、效果確切等特點(diǎn),逐漸受到廣大口腔正畸醫(yī)生的重視和青睞,臨床醫(yī)生在使用時(shí)都極力避免觸及或損傷鄰近牙根,以降低牙根吸收這一主要并發(fā)癥的發(fā)生率。然而,基于本研究的目的,本課題則是借助MSI有目的地?fù)p傷Beagle犬后牙牙根,并觀察其自然修復(fù)的情況,以此建立穩(wěn)定、可靠的牙根損傷修復(fù)動(dòng)物模型,并在此基礎(chǔ)上對牙根修復(fù)機(jī)制作初步探討。 目的： 1.對Beagle犬后牙行影像學(xué)測量研究,為MSI在Beagle犬后牙根分叉區(qū)的植入定位提供參考數(shù)據(jù)； 2.建立穩(wěn)定、可靠的牙根損傷修復(fù)動(dòng)物模型,為牙根修復(fù)機(jī)制的研究提供動(dòng)物模型條件； 3.對Beagle犬牙根損傷后自然修復(fù)早期進(jìn)行組織學(xué)觀察,初步探討牙根的自然修復(fù)機(jī)制； 4.利用熒光雙標(biāo)記Beagle犬牙根損傷后自然修復(fù)的過程,探討牙根的自然修復(fù)機(jī)制； 方法： 1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 選擇健康成年Beagle犬5只,2雄3雌,犬齡20-22個(gè)月,體重12-16 kg。Beagle犬的齒式為2(I3/3,C1/1,Pm4/4,M2/3),全口共42顆牙。 2.影像學(xué)測量 選取每只犬的上下頜第二、第三、第四前磨牙(Pm2、Pm3、Pm4)及下頜第一磨牙(M1),共70顆牙作為研究對象。各實(shí)驗(yàn)犬全麻后行CBCT掃描,利用NNTViewer軟件對上述牙位行相關(guān)的影像學(xué)測量。測量方法：首先描記出各牙齒牙體長軸,取與牙體長軸垂直的牙冠最大近遠(yuǎn)中徑AB并測量,過最大牙尖的頂點(diǎn)C作與AB垂直且等長的線段CD(D點(diǎn)擬作為MSI植入定位的參照點(diǎn)),分別測量D點(diǎn)至近中根、遠(yuǎn)中根、根分叉的的距離Dm、Dd、Df。 3.MSI植入部位 選取上頜第二、第三前磨牙和下頜第二、第三、第四前磨牙及下頜第一磨牙的近中根,上頜第一前磨牙的遠(yuǎn)中根面(該牙為單根牙)和上頜第四前磨牙的遠(yuǎn)中根作為MSI損傷的對象。除上頜第一前磨牙外,其他牙位均在根分叉區(qū)偏根方靠近欲損傷牙根根面植入。在各牙位根分叉區(qū)選取參照點(diǎn)D,據(jù)Dm、Dd值估測牙根的位置。在手術(shù)植入MSI時(shí),還應(yīng)結(jié)合阻力大小進(jìn)行植入。 4.實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì) 選取其中4只Beagle犬,2雄2雌,每只實(shí)驗(yàn)犬均選取上頜第一、第二、第三、第四前磨牙和下頜第二、第三、第四前磨牙及下頜第一磨牙作為實(shí)驗(yàn)觀察對象,共64個(gè)位點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)分8周、6周、4周、3周、2周、1周、3天、0天共8個(gè)時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行觀察,分別在處死前8周、6周、4周、3周、2周、1周、3天、0天選取8個(gè)位點(diǎn)進(jìn)行手術(shù)建模,即第一次手術(shù)(適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后)的8個(gè)位點(diǎn)納入8周時(shí)間點(diǎn),第二次手術(shù)納入6周時(shí)間點(diǎn),后以此類推。4只實(shí)驗(yàn)犬均于第一次手術(shù)后的8周處死,按牙位切取標(biāo)本,EDTA脫鈣8-10周,常規(guī)制備石蠟切片,HE染色,行組織形態(tài)學(xué)觀察。 另一只Beagle犬,選取上頜第二、第三、第四前磨牙和下頜第二、第三、第四前磨牙及下頜第一磨牙作為實(shí)驗(yàn)觀察對象,共14個(gè)位點(diǎn)。行手術(shù)建模,于術(shù)后4周頸部皮下注射四環(huán)素,術(shù)后8周頸部皮下注射鈣黃綠素,術(shù)后12周處死。按牙位切取標(biāo)本,制備骨磨片,熒光顯微鏡下觀察。制作硬組織切片,亞甲基藍(lán)-酸性品紅染色,行組織形態(tài)學(xué)觀察。 5.手術(shù)過程及動(dòng)物模型建立 實(shí)驗(yàn)犬以30 g/L(3%)戊巴比妥鈉按1 mL/kg肌肉注射行全身麻醉后,術(shù)區(qū)以2%普魯卡因/腎上腺素(1：100000)浸潤麻醉。每只實(shí)驗(yàn)犬在預(yù)先設(shè)計(jì)的植入部位垂直于牙長軸植入微螺釘種植體約10mm,并立即旋出。術(shù)后1-3 d給予肌肉注射青霉素(80萬u/d)預(yù)防感染。術(shù)后拍攝CT,并定期觀察傷口愈合情況。按預(yù)定時(shí)間處死實(shí)驗(yàn)動(dòng)物后,分別制作石蠟切片及硬組織切片,行組織形態(tài)學(xué)觀察。 結(jié)果： 1.實(shí)驗(yàn)所用Beagle犬左右側(cè)同名牙Dm、Dd、Df值差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；Dd值與Dm值基本相等；Df值均大于3.9 mm。MSI以D點(diǎn)為參照點(diǎn)向近遠(yuǎn)中移動(dòng)一定的距離(Dm或Dd減去MSI直徑的一半)即可觸及牙根。 2.所有位點(diǎn)術(shù)后傷口均愈合良好,牙根有效損傷率達(dá)73.4%,組織學(xué)觀察可見損傷的牙根面有新生牙骨質(zhì)的形成及牙周膜附著,牙根損傷修復(fù)動(dòng)物模型成功建立。 3.石蠟組織切片觀察發(fā)現(xiàn)：術(shù)后當(dāng)天,缺損區(qū)見大量的血凝塊以及牙根或骨組織碎片。術(shù)后3天,缺損區(qū)見大量的血細(xì)胞浸潤和較多的血漿滲出物,亦可見較多的炎癥細(xì)胞聚集。術(shù)后1周,缺損區(qū)見大量的成纖維細(xì)胞及血管內(nèi)皮細(xì)胞,可見稀疏的交織成網(wǎng)狀的新生膠原纖維。術(shù)后2周,缺損區(qū)見大量的結(jié)締組織及新生骨樣組織,缺損牙根面見類成牙骨質(zhì)細(xì)胞及新生牙周膜纖維的附著,已有牙骨質(zhì)修復(fù)的跡象。術(shù)后3周,缺損區(qū)充滿新生的牙骨質(zhì)、牙周膜及骨組織,三種新生組織分界明顯；缺損牙根面見明顯的新生牙骨質(zhì),為細(xì)胞牙骨質(zhì),新生的牙周膜纖維附著其中,新生骨組織區(qū)生長、改建活躍。術(shù)后4周,缺損區(qū)新生結(jié)締組織膠原化明顯,新生牙骨質(zhì)和骨組織進(jìn)一步礦化。術(shù)后6周,缺損區(qū)充滿新生的牙骨質(zhì)、牙周膜及骨組織,三種新生組織分界明顯,可見新生骨組織凸向并占據(jù)部分根缺損區(qū),牙周膜寬度變窄,缺損牙根面新生牙骨質(zhì)的量有增多趨勢且逐漸礦化,牙骨質(zhì)細(xì)胞明顯減少；新生的牙周膜纖維斜向附著于新生的牙骨質(zhì)和新生骨內(nèi),呈功能性排列。術(shù)后8周,缺損區(qū)新生的牙骨質(zhì)、牙周膜及骨組織分界明顯；缺損牙根面新生牙骨質(zhì)的量有增多趨勢且逐漸礦化,牙骨質(zhì)細(xì)胞明顯減少；新生牙周膜膠原化明顯,附著于新生牙骨質(zhì)和新生骨內(nèi),呈功能性排列,其寬度進(jìn)一步變窄；新生骨組織進(jìn)一步礦化,并可見新生骨組織凸向并占據(jù)部分根缺損區(qū)。 4.不脫鈣組織切片觀察發(fā)現(xiàn),術(shù)后12周,缺損區(qū)見新生的牙骨質(zhì)、牙周膜和牙槽骨；牙根面缺損底部牙骨質(zhì)的厚度大于周邊；新生的牙周膜與鄰近缺損部位的正常牙周膜相連續(xù),且其寬度已接近正常牙周膜寬度；新生牙槽骨與周圍正常牙槽骨組織學(xué)上未見明顯差異,提示骨改建已基本完成。 5.熒光磨片觀察發(fā)現(xiàn),靠近新生牙周膜的牙根側(cè)及牙槽骨側(cè)均見清晰的綠色熒光條帶和黃色熒光條帶,綠色熒光條帶鄰近牙周膜兩側(cè),黃色熒光條帶在綠色熒光條帶的外圍,提示在修復(fù)過程中新生牙周膜的寬度逐漸變窄。新生骨組織區(qū)靠近牙周膜的熒光條帶呈與牙根缺損外形一致的圓弧形排列,而位于牙槽骨內(nèi)的大部分可見較多類似于同心圓排列的熒光條帶,提示缺損部位的新生骨可能有兩種不同的細(xì)胞來源。研究結(jié)果均未發(fā)現(xiàn)根骨粘連的現(xiàn)象。 結(jié)論： 1.本研究借助微螺釘種植體損傷牙根并觀察其自然修復(fù),以此成功建立了牙根損傷修復(fù)動(dòng)物模型；該模型穩(wěn)定、可復(fù)制性強(qiáng),制備方法簡單、易行,可充分滿足研究牙根修復(fù)機(jī)制的需要。 2.本研究結(jié)果顯示,牙根損傷后2周,損傷根面已有類成牙骨質(zhì)細(xì)胞的附著,即有類牙骨質(zhì)修復(fù)的跡象；2-3周,缺損牙根面逐漸有新生的細(xì)胞牙骨質(zhì)沉積,且有新生的牙周膜纖維附著；牙骨質(zhì)在缺損根面最初沉積的部位并無特異性,可發(fā)生于缺損根面任意部位；其中成牙骨質(zhì)細(xì)胞可能由牙周膜細(xì)胞分化而來,尚需進(jìn)一步論證。 3.本研究牙根損傷修復(fù)過程中,通過局部環(huán)境的誘導(dǎo)和損傷區(qū)未分化間充質(zhì)細(xì)胞的定向遷移,牙周膜細(xì)胞總能率先占據(jù)牙根缺損區(qū),實(shí)現(xiàn)牙骨質(zhì)、牙周膜和牙槽骨的新生。新生牙周膜兩側(cè)不斷有新生的牙骨質(zhì)和骨組織形成,且牙周膜寬度逐漸變窄,12周時(shí)已接近正常牙周膜的寬度。 4.在牙根損傷修復(fù)過程中,缺損部位的新生骨可能有兩種不同的細(xì)胞來源：靠近牙周膜的新生骨(熒光條帶呈弧形排列)可能由牙周膜來源的成骨細(xì)胞所形成,而缺損區(qū)位于牙槽骨內(nèi)的大部分新生骨組織(熒光條帶呈同心圓排列)可能由骨髓來源的成骨細(xì)胞所形成。本研究中的成骨過程是一種較完整的膜內(nèi)成骨方式。
[Abstract]:Research background:
External root resorption is a common clinical phenomenon, resulting from the most common cause of trauma, infection, tumor or replantation of teeth, impacted teeth of oppression. The external root resorption can lead to necrosis of the pulp, and loose tooth. But so far it is not clear the real mechanism thus, it is difficult to make accurate predictions on the development of root resorption, and lack of effective prevention and treatment methods, which makes dental clinicians face root resorption was at a loss what to do. Therefore, one of the oral root resorption as a clinical problem, more and more scholars of oral science research at home and abroad related research reports are also increasingly concerned. Increased.
The author consults the related literature in recent years found that both basic research and clinical research, have not made breakthrough progress. The root resorption mechanism has not been elucidated, the clinical treatment of root resorption is still no obvious effect. However, it is interesting for us, studies have reported that when removing cause root resorption or defect the trauma factors, root resorption can be quickly stopped, the defect repair is activated after a period of time, the formation of new cementum deposition and periodontal attachment on the root surface, the root that has a high degree of self repair potential.
Therefore, we envisage a series of studies on the natural root repair of the root, so as to provide clues or meaningful implications for the treatment of root resorption.
With this problem, we refer to the related literature, found that the study on root natural repair is limited to the level of histology, source and type of the new cementum cementum, the site of the initial deposition and there is no new periodontal attachment formation was reported in a rigorous experimental design, still need to demonstrate. The analysis found that the animal model of previous studies established by orthodontic force due to root resorption, then stop the force for observing root repair. But because of the loading method influenced by external factors, force degradation and resorption effect of location and degree of uncontrollable factors, animal model is unstable and difficult to repeat. Therefore, the possibility of establishing a stable animal model has important significance to repair the root and reliable for study on biological mechanism of root natural repair occurred.
In recent years, micro screw implant (mini-screw implant MSI) is one of the important means of absolute anchorage, because of its simple, small trauma, definite effect and other characteristics, gradually by the attention and favor of orthodontic doctors, clinicians when used to avoid contact and or damage to adjacent teeth, in order to reduce the incidence of root the main complications of absorption. However, the purpose of this study is based on this topic is the use of MSI to Beagle damage in dogs and observe the posterior root, natural restoration, in order to establish a stable animal model of tooth root repair, reliable, and on the basis of preliminary discussion on root repair machine.
Objective:
1. of Beagle dogs after Yahang imaging measurement research, provide reference data for the implant location of MSI in Beagle dogs after furcation area;
2. establish stable and reliable dental root damage repair animal model, and provide animal model conditions for the study of root repair mechanism.
3. the natural repair mechanism of Beagle canine root was preliminarily studied by histological observation.
4. the natural restoration mechanism of Beagle canine root was explored by the natural repair mechanism after the fluorescence double labeling of canine root.
Method錛，

本文編號：1533086