本文關(guān)鍵詞： 反復(fù)移植失敗 著床窗期 溶血磷脂酸受體3 肝素結(jié)合表皮生長因子　出處：《鄭州大學(xué)》2012年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：研究背景 當(dāng)胚胎發(fā)育到著床狀態(tài)的時候,子宮內(nèi)膜也由非接受態(tài)發(fā)展到接受態(tài),這-極短的允許胚胎植入的時期稱為“著床窗期”。多年來,通過不斷改進控制性超促排卵方案和實驗室胚胎培養(yǎng)技術(shù),胚胎的數(shù)量和質(zhì)量得到了極大優(yōu)化,特別是1992年卵胞漿內(nèi)單精子注射(Intracytoplasmic sperm injection, ICSI)技術(shù)應(yīng)用于臨床后,解決了很多由于精卵結(jié)合障礙帶來的胚胎質(zhì)量問題。但是體外受精-胚胎移植(in vitro fertilization and embryo transfer, IVF-ET)的植入率依然徘徊在30%左右,其中一個很重要的原因就是部分不孕癥患者的著床窗期子宮內(nèi)膜容受性存在缺陷,進而影響了胚胎的成功著床。目前多數(shù)學(xué)者認(rèn)為移植次數(shù)≥3次或移植優(yōu)質(zhì)胚胎≥10個仍然未能妊娠者,可以稱為胚胎反復(fù)移植失敗(repeated implantation failure, RIF)。通常此類患者胚胎質(zhì)量良好,沒有其它明確的不孕因素可尋,子宮內(nèi)膜容受性缺陷就成為其反復(fù)著床失敗的最可能原因,如何預(yù)測并改善她們的子宮內(nèi)膜容受性以提高再次助孕時的妊娠率,成為輔助生殖技術(shù)領(lǐng)域研究的熱點與難點。近三十年,國內(nèi)外學(xué)者們在子宮內(nèi)膜容受性方面做了大量研究,發(fā)現(xiàn)了一系列影響子宮內(nèi)膜容受性的激素、細胞因子和生長因子,這些因子之間關(guān)系錯綜復(fù)雜,構(gòu)成一張龐大而井然有序的分子網(wǎng)絡(luò),雙向調(diào)控互相影響。本次實驗選取溶血磷脂酸受體3(lysophosphatidic acid receptor3,LPAR3)和肝素結(jié)合表皮生長因子(heparin-binding epidermal growthfactor,HB-EGF)為切入點進行子宮內(nèi)膜容受性的相關(guān)研究. 研究目的 探討RIF患者子宮內(nèi)膜容受性下降的可能機制,探尋適合的評價指標(biāo),為改善子宮內(nèi)膜容受性的臨床干預(yù)措施提供相應(yīng)的實驗依據(jù)。 材料與方法 實驗組(RIF組)23例為2010年10月-2011年6月在鄭州大學(xué)第三附屬醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)中心就診的胚胎反復(fù)移植失敗患者。對照組31例為同期初次接受IVF助孕即妊娠的患者。 子宮內(nèi)膜的獲�。涸诔倥怕亚耙粋�月經(jīng)周期使用經(jīng)陰道彩色多普勒超聲監(jiān)測卵泡,排卵后7天進行預(yù)移植,同時采集著床窗期子宮內(nèi)膜。內(nèi)膜采集后,分裝為兩份,第一份用10%中性福爾馬林固定,梯度乙醇脫水,二甲苯透明,石蠟包埋,制成切片,以備LPAR3與HB-EGF的免疫組織化學(xué)檢測；第二份將吸取的新鮮內(nèi)膜組織直接凍存于液氮中,等待進行LPAR3和HB-EGF mRNA的半定量RT-PCR檢測。 外周血的獲取：獲取子宮內(nèi)膜的當(dāng)日晨空腹抽取肘靜脈血,采用化學(xué)發(fā)光法檢查雌激素(estradiol,E2)和孕激素(progestogen,P)值。詳細記錄患者年齡,體重指數(shù),移植周期數(shù),不孕原因及類型,基礎(chǔ)內(nèi)分泌情況,著床窗口期E2值、P值和子宮內(nèi)膜厚度,IVF周期超促排卵情況、獲卵數(shù)和胚胎質(zhì)量。 數(shù)據(jù)分析采用SPSS17.0統(tǒng)計學(xué)軟件。兩組定量資料的比較,符合正態(tài)分布的采用兩組獨立樣本t檢驗進行分析；非正態(tài)分布采用秩和檢驗。兩組定性資料的比較采用四格表x2檢驗進行分析。相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)分析。以雙側(cè)α=0.05為檢驗水準(zhǔn)。 結(jié)果 1.體重指數(shù)、不孕原因、不孕類型、基礎(chǔ)狀態(tài)(月經(jīng)周期第2天-4天)血卵泡刺激素(follicle stimulatin ghormone, FSH)、黃體生成素(luteotropic hormone,LH)和E2水平、著床窗期血E2水平、子宮內(nèi)膜厚度、垂體降調(diào)方案、實驗室胚胎質(zhì)量方面,兩組患者的差異均無統(tǒng)計學(xué)意義。與對照組相比,RIF組患者的年齡(31.652±3.284vs.29.839±2.423,P=0.023)、促排卵藥物(gonadotropin, Gn)使用天數(shù)(11.261±1.137vs.10.484±1.262,P=0.024)和劑量(2311.967±565.290vs.1930.694±511.993,P=0.012)均明顯增高,而著床窗期血P水平(11.365±3.612vs.15.039±4.127,P=0.001)明顯降低。 2. LPAR3和HB-EGF在兩組患者的子宮內(nèi)膜中均有表達,且表達部位和特點上存在相似性,主要分布在子宮內(nèi)膜腺上皮細胞和部分基質(zhì)細胞的胞漿,呈頂漿分泌狀。兩者的平均光密度值比較,RIF組顯著低于對照組(LPAR3:0.255±0.105vs.0.359±0.102,P=0.001;HB-EGF:0.298±0.126vs.0.554±0.197,P0.001)。 3.RIF組患者子宮內(nèi)膜著床窗期LPAR3和HB-EGF mRNA低表達,灰度值比較顯著小于對照組(LPAR3：0.481±0.167vs.0.647±0.177,P=0.001；HB-EGF:0.961±0.312vs.1.514±0.346,P0.001)。 4.兩組的患者年齡與LPAR3和HB-EGF mRNA表達之間成負(fù)相關(guān)性P(LPAR3:r=-3.575,P0.001;HB-EGF:r=-6.025,P0.001)。根據(jù)目前的數(shù)據(jù),尚不能認(rèn)為Gn使用天數(shù)、Gn劑量、獲卵數(shù)、著床窗期血E2和P值與兩組LPAR3和HB-EGF mRNA表達之間存在顯著相關(guān)性。 結(jié)論 1. LPAR3在子宮內(nèi)膜著床窗期的表達部位及特點與HB-EGF相似,可以作為預(yù)測人子宮內(nèi)膜容受性的良好參考指標(biāo)。 2.RIF患者著床窗期血清P水平降低、子宮內(nèi)膜組織中LPAR3和HB-EGF低表達,可能是反復(fù)種植失敗不孕的原因。 3.隨著患者年齡的增長,著床窗期子宮內(nèi)膜組織中LPAR3和HB-EGF的表達降低。
[Abstract]:Research background
When the embryo to implantation endometrial state, also by non state to accept the receiving state, which allows the implantation of an embryo - short period known as the "implantation window". Over the years, through continuous improvement of controlled ovarian hyperstimulation and laboratory embryo culture technique, the number and quality of embryos greatly optimization, especially in 1992 of intracytoplasmic sperm injection (Intracytoplasmic sperm injection ICSI) technology in clinical application, solve a lot of problems due to the quality of embryo sperm egg binding barriers. But in vitro fertilization and embryo transfer (in vitro fertilization and embryo transfer, IVF-ET) the implantation rate is still hovering around 30% and the endometrial receptivity defects during the implantation window in which a very important reason is that some patients with infertility, which affects the success of embryo implantation. At present, many researchers believe that Transplantation of more than 3 times or more than 10 high-quality embryo transplantation still failed to pregnancy, the embryo can be called repeated implantation failure (repeated implantation failure, RIF). These patients usually embryos of good quality, no other clear infertility could be found, endometrial receptivity defects has become the reason of repeated implantation failure is the most likely. How to predict and improve endometrial receptivity to improve their pregnancy when the pregnancy rate again, become a hot and difficult research field. The reproductive assistive technology in recent thirty years, domestic and foreign scholars suffer in the aspects of endometrial do a lot of research, found a series of hormones that influence endometrial receptivity, cell the relationship between factors and growth factors, these factors constitute a large and perplexing, in order of the molecular network, two-way regulation affect each other. This experiment selected by lysophosphatidic acid 3 (lysophosphatidic acid receptor3, LPAR3) and heparin binding epidermal growth factor (heparin-binding epidermal, growthfactor, HB-EGF) as the starting point for the research of endometrial receptivity.
research objective
To explore the possible mechanism of RIF in patients with endometrial receptivity decreased, searching for suitable evaluation index, provide experimental evidence for clinical interventions to improve the endometrial receptivity.
Materials and methods
In the experimental group (group RIF), 23 cases were failed to repeat embryo transfer from October 2010 to June October 2010 in the reproductive medicine center of the Third Affiliated Hospital of Zhengzhou University. 31 cases in the control group received IVF for the first time.
Obtain endometrial hyperstimulation: in a menstrual cycle before ovulation by transvaginal color Doppler ultrasound monitoring of follicular, pre transplant 7 days after ovulation, while collecting the endometrial implantation window. The endometrium specimens separated into two parts, the first with 10% neutral formalin fixed, gradient ethanol dehydration, xylene transparent, paraffin wax embedded and sectioned by immunohistochemical detection by LPAR3 and HB-EGF; second will draw fresh endometrial tissue directly frozen in liquid nitrogen for semi quantitative RT-PCR detection of LPAR3 and HB-EGF mRNA.
Collection of peripheral blood: obtain endometrial morning fasting venous blood by chemiluminescence (estradiol, E2) examination of estrogen and progesterone (progestogen, P). The patients were recorded age, body mass index, transplantation cycles and the causes of infertility and type, endocrine basis, implantation window period E2 value the value of P, and the thickness of the endometrium, IVF hyperstimulation, number of oocytes and embryo quality.
Data were analyzed by SPSS17.0 statistical software. The comparison of two groups of quantitative data, consistent with the normal distribution with two independent samples t test; non normal distribution using the rank sum test. Two groups of qualitative data were compared with four table analysis of x2 test. Correlation analysis using Pearson correlation analysis. The bilateral a =0.05 as the test level.
Result
The body mass index of 1., the causes of infertility, infertility type, basic condition (second -4 days of menstrual cycle) serum follicle stimulating hormone (follicle stimulatin, ghormone, FSH), luteinizing hormone (luteotropic, hormone, LH) and the level of E2, implantation window blood E2 level, endometrial thickness, pituitary down-regulation protocol, laboratory embryo quality and the difference between the two groups were not statistically significant compared with the control group, RIF group of patients (age 31.652 + 3.284vs.29.839 + 2.423, P=0.023), ovulation drugs (gonadotropin, Gn) days (11.261 + 1.137vs.10.484 + 1.262, P=0.024) and dose (2311.967 + 565.290vs.1930.694 + 511.993, P=0.012) were significantly increased however, during the window of implantation blood P level (11.365 + 3.612vs.15.039 + 4.127, P=0.001) was significantly reduced.
2. LPAR3 and HB-EGF in two patients with endometrial tissues, and the expression of similar parts and characteristics, mainly distributed in the cytoplasm of endometrial glandular epithelial cells and stromal cells, with apocrine secretion. The average optical density value comparison, RIF group was significantly lower than the control group (LPAR3:0.255 + 0.105vs.0.359 + 0.102, P=0.001; HB-EGF:0.298 + 0.126vs.0.554 + 0.197, P0.001).
Group 3.RIF had low expression of LPAR3 and HB-EGF mRNA in the implantation window stage of endometrium, and the gray value was significantly smaller than that in the control group (LPAR3:0.481 + 0.167vs.0.647 + 0.177, P=0.001; HB-EGF:0.961 + 0.312vs.1.514 + 0.346, P0.001).
The 4. group of two patients with LPAR3 and HB-EGF age mRNA expression between the negative correlation between P (LPAR3:r=-3.575, P0.001; HB-EGF:r=-6.025, P0.001). According to the present data, still can not believe that the days of using Gn, Gn dose, number of oocytes, there is a significant correlation between the expression of LPAR3 and HB-EGF two group and mRNA window period of blood E2 and P the value of implantation.
conclusion
Similar to 1. LPAR3 expression in endometrial implantation window location and characteristics and HB-EGF, can be used as a good reference index to predict endometrial receptivity.
The decrease of serum P level in 2.RIF patients and low expression of LPAR3 and HB-EGF in endometrium may be the cause of repeated failure of infertility.
3. with the age of the patients, the expression of LPAR3 and HB-EGF in the endometrium of the bed window decreased.

【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R321

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本文編號：1531547