本文關(guān)鍵詞： 白色念珠菌 CaTIP基因 高表達(dá)　出處：《中國病原生物學(xué)雜志》2017年09期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的構(gòu)建白色念珠菌CaTIP41基因高表達(dá)菌株,并觀察其高表達(dá)對細(xì)胞耐受遺傳毒性試劑MMS的影響。方法將白色念珠菌CaTIP41基因的ORF置于高表達(dá)質(zhì)粒載體pCaEXP的MET3啟動(dòng)子后,構(gòu)建pCaEXP-CaTIP41高表達(dá)質(zhì)粒,線性化后整合到基因組的RP10位點(diǎn),利用半定量PCR和RT-PCR方法檢測CaTIP41基因轉(zhuǎn)錄水平,利用平板表型試驗(yàn)結(jié)合菌株存活率試驗(yàn)檢測CaTIP41基因高表達(dá)對細(xì)胞耐受遺傳毒性試劑的影響。結(jié)果成功構(gòu)建了高表達(dá)載體pCaEXP-CaTIP41;線性化后的載體成功整合到基因組上RP10位點(diǎn),其中4號(hào)轉(zhuǎn)化子中CaTIP41基因轉(zhuǎn)錄水平較高,為野生型菌株的4.23倍;在MMS脅迫條件下,CaTIP41基因高表達(dá)菌株存活率明顯下降。結(jié)論利用pCaEXP載體成功構(gòu)建了CaTIP41基因高表達(dá)菌株,且CaTIP41基因高表達(dá)會(huì)抑制細(xì)胞對遺傳毒性試劑MMS的耐受。
[Abstract]:Objective to construct a high expression strain of Candida albicans CaTIP41 gene and to observe the effect of its overexpression on the cytotoxic reagent MMS. Methods the ORF of CaTIP41 gene of Candida albicans was placed in the MET3 promoter of the high expression plasmid pCaEXP. The high expression plasmid of pCaEXP-CaTIP41 was constructed and linearized and integrated into the RP10 site of the genome. The transcription level of CaTIP41 gene was detected by semi-quantitative PCR and RT-PCR methods. The effect of high expression of CaTIP41 gene on cell tolerance to genotoxicity reagent was detected by plate phenotypic test and strain survival test. Results the high expression vector pCaEXP-CaTIP41 was successfully constructed, and the linearized vector was successfully integrated into the RP10 site of the genome. The transcription level of CaTIP41 gene in transformant No. 4 was 4.23 times as high as that of wild-type strain, and the survival rate of high expression strain of CaTIP41 gene was significantly decreased under MMS stress. Conclusion High expression strain of CaTIP41 gene was successfully constructed by using pCaEXP vector. The overexpression of CaTIP41 gene can inhibit the tolerance of cells to the genotoxic reagent MMS.
【作者單位】： 南通大學(xué)醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)系;
【基金】：江蘇省高校自然科學(xué)研究面上項(xiàng)目(No.16KJB310012) 南通市科技計(jì)劃項(xiàng)目(No.MS12015107) 南通大學(xué)大學(xué)生創(chuàng)新訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目(No.2016095&2017145)
【分類號(hào)】：R379.4

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本文編號(hào)：1529974