發(fā)布時(shí)間：2018-02-22 22:22

  本文關(guān)鍵詞： 自發(fā)性腦室出血 Nestin CD133 室管膜下區(qū) 腦積水 免疫熒光染色 潛在分化細(xì)胞　出處：《河北醫(yī)科大學(xué)》2012年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的： 自發(fā)性腦室內(nèi)出血是由于非外傷性因素所致的顱內(nèi)血管破裂，血液進(jìn)入腦室系統(tǒng)所出現(xiàn)的臨床常見(jiàn)急癥，其發(fā)病率占自發(fā)性顱內(nèi)出血的20％-60％[1]，死亡率一般在14％-83.3％[2]。臨床上因其出血程度不同而表現(xiàn)輕重不一，腦積水及腦血管痙攣是最常見(jiàn)的并發(fā)癥。目前，關(guān)于自發(fā)性腦室內(nèi)出血的研究多集中于出血后繼發(fā)性腦積水的成因方面，而針對(duì)出血后神經(jīng)組織損傷機(jī)制的研究尚不多見(jiàn)，此損傷過(guò)程的病理生理機(jī)制仍不清楚。為此，本實(shí)驗(yàn)研究通過(guò)建立大鼠腦室出血模型，重點(diǎn)觀察了腦室出血后室管膜下區(qū)不同時(shí)間點(diǎn)Nestin及CD133的表達(dá)變化，并依此探討了Nestin和CD133在腦室出血后神經(jīng)組織損傷過(guò)程中可能發(fā)揮的作用機(jī)制。 方法： 1.55只成年SD雄性大鼠（體重300g±10g）隨機(jī)分為三組，側(cè)腦室注血組（n=25），生理鹽水對(duì)照組（n=25），空白對(duì)照組（n=5）。 2.大鼠腦室出血模型參照K.R.Lodhia報(bào)道的方法并加以改進(jìn)。將160μl非抗凝自體尾動(dòng)脈血分次注入到側(cè)腦室建立側(cè)腦室注血組，生理鹽水對(duì)照組則將等量生理鹽水注入到側(cè)腦室中，空白對(duì)照組除不進(jìn)行腦室注射處理外，余操作同其他兩組，所有大鼠在同一環(huán)境下喂養(yǎng)。 3.設(shè)立術(shù)后1、2、3、7、14天五個(gè)時(shí)間點(diǎn)將實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組大鼠進(jìn)行神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分并稱重后處死斷頭取腦，將標(biāo)本置于4％多聚甲醛PBS液中固定24h，自前囟后0.40mm冠狀切開腦組織，觀察并測(cè)量側(cè)腦室寬度(冠狀面的側(cè)腦室寬度≥1.0mm為腦積水)，隨后進(jìn)行石蠟包埋，做5μm厚連續(xù)切片，行HE染色觀察比較側(cè)腦室注血組、生理鹽水對(duì)照組、空白對(duì)照組腦組織病理變化并做免疫組化染色，高倍鏡下分別計(jì)數(shù)不同時(shí)間點(diǎn)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組Nestin及CD133陽(yáng)性細(xì)胞的個(gè)數(shù)； 4.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：使用SPSS15.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。組間計(jì)量資料比較采用t檢驗(yàn)，以P0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果： 1.一般觀察：各個(gè)時(shí)間點(diǎn)腦室注血組大鼠體重下降分別為5.75±1.50g、10.75±2.99g、21.25±6.29g、45.00±5.77g、71.25±2.50g，生理鹽水對(duì)照組大鼠在術(shù)后1、2、3天體重下降分別為4.50±0.58g、6.00±1.83g、8.63±1.11g，術(shù)后2、3天腦室注血組與生理鹽水對(duì)照組有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。術(shù)后7天及14天體重分別增加4.33±1.15g、11.25±2.99g；空白對(duì)照組大鼠體重均增加52.75±3.20g。各個(gè)時(shí)間點(diǎn)對(duì)大鼠進(jìn)行神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分，腦室注血組分別為11.8±0.8、15.2±0.8、16.6±0.5、16.0±0.7、15.4±0.5，生理鹽水對(duì)照組分別為13.0±1.0、17.6±0.5、18.0±0.7、18.6±0.5、18.8±0.4，空白對(duì)照組大鼠評(píng)分無(wú)異常。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)，注血1天及14天與生理鹽水對(duì)照組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）； 2.腦室擴(kuò)張：腦室注血組1天及3天、7天及14天四個(gè)時(shí)間點(diǎn)側(cè)腦室寬度分別為1.24±0.11mm、1.43±0.08mm、1.28±0.08mm、1.61±0.05mm，生理鹽水對(duì)照組在1天及3天、7天及14天四個(gè)時(shí)間點(diǎn)側(cè)腦室寬度分別為1.09±0.09mm、1.04±0.05mm、1.10±0.03mm、1.06±0.05mm，同一時(shí)間點(diǎn)兩組比較均有顯著性差異（P0.05）�？瞻讓�(duì)照組腦室為0.94±0.04mm，各個(gè)時(shí)間點(diǎn)無(wú)明顯變化。 3.免疫組織化學(xué)染色：腦室注血后1、2、3、7、14天五個(gè)時(shí)間點(diǎn)室管膜下區(qū)的Nestin陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞數(shù)量占總細(xì)胞數(shù)量的比例分別為：24.71±4.76%、15.27±4.04%、15.69±2.13%、15.99±8.45%、16.77±1.42%；生理鹽水對(duì)照組各個(gè)時(shí)間點(diǎn)室管膜下區(qū)的Nestin陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞數(shù)量占總細(xì)胞數(shù)量的比例分別為：7.33±2.66%、7.79±1.52%、8.09±2.18%、8.62±7.50%、8.56±6.05%;腦室注血后1、2、3、7、14天五個(gè)時(shí)間點(diǎn)室管膜下區(qū)的CD133陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞數(shù)量占總細(xì)胞數(shù)量的比例分別為：11.49±3.78%、7.16±2.72%、8.53±4.30%、8.64±1.35%、12.34±2.67%；生理鹽水對(duì)照組各個(gè)時(shí)間點(diǎn)室管膜下區(qū)的CD133陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞數(shù)量占總細(xì)胞數(shù)量的比例分別為：4.11±1.13%、4.08±0.57%、3.97±3.55%、3.98±0.77%、3.40±1.08%,二者相同時(shí)間點(diǎn)Nestin及CD133陽(yáng)性細(xì)胞比例做t檢驗(yàn)比較，術(shù)后1天及以后各時(shí)間點(diǎn)，腦室注血組和生理鹽水對(duì)照組陽(yáng)性細(xì)胞比例有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P0.05）。 4.免疫熒光檢測(cè)Nestin陽(yáng)性細(xì)胞：將石蠟切片行免疫熒光染色，于熒光顯微鏡下觀察，室管膜下區(qū)發(fā)現(xiàn)較多Nestin陽(yáng)性細(xì)胞，腦室注血組Nestin陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)均多于生理鹽水對(duì)照組；同一腦組織標(biāo)本中注血側(cè)與對(duì)側(cè)室管膜下區(qū)熒光表達(dá)量在3天時(shí)有明顯區(qū)別，而在其他時(shí)間點(diǎn)未見(jiàn)明顯差異。 結(jié)論： 1.本實(shí)驗(yàn)采用尾動(dòng)脈分次注血法制備大鼠腦室出血模型，模型穩(wěn)定，使用非抗凝自體動(dòng)脈血更加符合自然發(fā)病過(guò)程，故能夠較好地模擬臨床腦室出血后的變化。 2. Nestin在室管膜下區(qū)的表達(dá)具有時(shí)間相關(guān)性，腦室注血1天Nestin表達(dá)急劇增高，2天時(shí)Nestin表達(dá)略有下降，3天時(shí)表達(dá)又有所升高，，7天時(shí)表達(dá)進(jìn)一步增高，14天時(shí)表達(dá)較前升高但低于1天時(shí)水平，Nestin表達(dá)在生理鹽水對(duì)照組輕度增高。 3. CD133的表達(dá)亦具有時(shí)間相關(guān)性，在腦室注血1天達(dá)到高峰，2天時(shí)表達(dá)下降，隨后3天時(shí)表達(dá)增高，7天時(shí)表達(dá)較3天時(shí)小幅度增高，14天表達(dá)水平較7天時(shí)升高，對(duì)照組表達(dá)平穩(wěn)。 4.注血1天時(shí)右側(cè)腦室明顯擴(kuò)張，3天時(shí)見(jiàn)雙側(cè)腦室擴(kuò)張，7天時(shí)雙側(cè)腦室擴(kuò)張較3天時(shí)明顯，14天時(shí)腦室較之前時(shí)間點(diǎn)進(jìn)一步擴(kuò)大但仍呈輕度腦積水狀態(tài)。生理鹽水對(duì)照組腦室變化不明顯�？瞻讓�(duì)照組大鼠腦室大小無(wú)變化。 5.腦室注血能夠激活室管膜下區(qū)潛在分化細(xì)胞。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R651.1;R-332

【參考文獻(xiàn)】

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1 徐曦,肖新莉,羅秀成,楊世照,李保利,劉勇;永久性腦缺血神經(jīng)干細(xì)胞遷移及nestin蛋白表達(dá)的變化[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2002年05期

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本文編號(hào)：1525457