本文關(guān)鍵詞： 乳桿菌 細(xì)菌性陰道炎 rep-PCR基因分型 過(guò)氧化氫 粘附　出處：《重慶醫(yī)科大學(xué)》2012年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：細(xì)菌性陰道炎（BV）是育齡期婦女常見(jiàn)的陰道感染性疾病，發(fā)病率占整個(gè)婦女人群的10%～29%。BV危害較大，容易引起輸卵管炎、盆腔炎、宮外孕、不孕癥、泌尿系感染、術(shù)后感染及婦科腫瘤等一系列并發(fā)癥。BV的發(fā)生主要是健康陰道微生態(tài)平衡被破壞所致，主要表現(xiàn)為是陰道乳桿菌的減少或缺失。 乳桿菌是健康陰道微環(huán)境中的優(yōu)勢(shì)菌群，它對(duì)維持陰道微生態(tài)平衡起著重要作用。陰道乳桿菌主要通過(guò)與病原菌競(jìng)爭(zhēng)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)；競(jìng)爭(zhēng)陰道上皮細(xì)胞表面粘附受體；刺激機(jī)體產(chǎn)生局部免疫；產(chǎn)生乳酸、過(guò)氧化氫和抗菌素類活性物質(zhì)來(lái)抑制病源微生物的侵入和過(guò)度生長(zhǎng)，調(diào)節(jié)微生態(tài)平衡。研究表明，陰道乳桿菌具有拮抗病原菌的能力，在預(yù)防治療陰道細(xì)菌性感染方面起著重要作用。目前，國(guó)內(nèi)外雖然已有商品化用于BV治療的乳桿菌制劑，并在臨床應(yīng)用上取得了一定療效，但與理想還有差距，可能是因?yàn)橛行С煞志瓴划a(chǎn)H_2O_2、粘附定植能力差或拮抗病原菌能力弱等因素影響所致。因此，本研究擬通過(guò)基因測(cè)序、rep-PCR基因分型等分子生物學(xué)方法，分離鑒定乳桿菌株，在乳桿菌亞種水平上篩選具有益生菌特征的優(yōu)秀菌株為豐富臨床乳桿菌制劑，開(kāi)發(fā)一種安全、有效、實(shí)用性更強(qiáng)的臨床用于BV臨床治療的高效安全的生態(tài)制劑奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 我們用MRS乳桿菌專用培養(yǎng)基對(duì)150例健康婦女陰道分泌物樣本中的乳桿菌進(jìn)行分離培養(yǎng)，通過(guò)rep-PCR基因分型和16S rRNA基因測(cè)序，分離鑒定獲得12種乳桿菌共170株，其中最常見(jiàn)的有彎曲乳桿菌L. crispatus、詹氏乳桿菌L. jensenii、加氏乳桿菌L. gasseri和發(fā)酵乳桿菌L. fermentum四種，統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)L. crispatus、L. jensenii亞種較多，L.gasseri、L. fermentum種類較單一，大部分健康婦女陰道中只有一種優(yōu)勢(shì)乳桿菌。在此基礎(chǔ)上，我們篩選具有益生菌特征的乳桿菌，分別從以下幾個(gè)方面進(jìn)行：首選檢測(cè)了乳桿菌產(chǎn)酸的能力，通過(guò)測(cè)量了乳桿菌發(fā)酵液的PH值，皆在4左右，說(shuō)明乳桿菌產(chǎn)酸能力普遍較強(qiáng)。其次，檢測(cè)了乳桿菌產(chǎn)H_2O_2能力，其中H_2O_2弱陽(yáng)性有59株，陽(yáng)性有28株，強(qiáng)陽(yáng)性有46株。統(tǒng)計(jì)結(jié)果表明：75%以上健康婦女陰道乳桿菌產(chǎn)H_2O_2。然后,進(jìn)一步對(duì)產(chǎn)H_2O_2強(qiáng)陽(yáng)性的46株乳桿菌做粘附能力檢測(cè)試驗(yàn)，其中有13株乳桿菌粘附HeLa細(xì)胞能力較強(qiáng)，粘附細(xì)菌數(shù)均在200CFU/個(gè)以上。然后，我們做了乳桿菌拮抗金葡菌生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)，比較乳桿菌抑菌圈直徑與Amp陽(yáng)性參照抑菌圈直徑比值大小，比值在0.8以上的菌株對(duì)金葡菌具有較強(qiáng)拮抗作用，共有7株。最后，我們模擬陰道內(nèi)環(huán)境，初步探討了乳桿菌與陰道上皮細(xì)胞（VEC）的粘附能力，結(jié)果表明，具有粘附VEC能力的乳桿菌能粘附大部分個(gè)體的VEC證實(shí)本研究篩選出來(lái)的功能乳桿菌具有普遍實(shí)用性，能治療大部分BV。 本研究主要通過(guò)分子生物學(xué)方法分離鑒定陰道乳桿菌株，，檢測(cè)了乳桿菌產(chǎn)酸、產(chǎn)H_2O_2、粘附HeLa細(xì)胞和拮抗金葡菌的能力，共篩選出7株具有較強(qiáng)產(chǎn)酸、產(chǎn)H_2O_2、粘附HeLa細(xì)胞和拮抗金葡菌能力的乳桿菌，這7株乳桿菌可作為治療BV的候選菌株進(jìn)行深入研究。
[Abstract]:Bacterial Vaginitis ( BV ) is a common vaginal infectious disease among women of childbearing age . The incidence of BV is 10 % 锝

本文編號(hào)：1520974