本文關(guān)鍵詞： 乳桿菌 細菌性陰道炎 rep-PCR基因分型 過氧化氫 粘附　出處：《重慶醫(yī)科大學》2012年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：細菌性陰道炎（BV）是育齡期婦女常見的陰道感染性疾病，發(fā)病率占整個婦女人群的10%～29%。BV危害較大，容易引起輸卵管炎、盆腔炎、宮外孕、不孕癥、泌尿系感染、術(shù)后感染及婦科腫瘤等一系列并發(fā)癥。BV的發(fā)生主要是健康陰道微生態(tài)平衡被破壞所致，主要表現(xiàn)為是陰道乳桿菌的減少或缺失。 乳桿菌是健康陰道微環(huán)境中的優(yōu)勢菌群，它對維持陰道微生態(tài)平衡起著重要作用。陰道乳桿菌主要通過與病原菌競爭營養(yǎng)物質(zhì)；競爭陰道上皮細胞表面粘附受體；刺激機體產(chǎn)生局部免疫；產(chǎn)生乳酸、過氧化氫和抗菌素類活性物質(zhì)來抑制病源微生物的侵入和過度生長，調(diào)節(jié)微生態(tài)平衡。研究表明，陰道乳桿菌具有拮抗病原菌的能力，在預(yù)防治療陰道細菌性感染方面起著重要作用。目前，國內(nèi)外雖然已有商品化用于BV治療的乳桿菌制劑，并在臨床應(yīng)用上取得了一定療效，但與理想還有差距，可能是因為有效成分菌株不產(chǎn)H_2O_2、粘附定植能力差或拮抗病原菌能力弱等因素影響所致。因此，本研究擬通過基因測序、rep-PCR基因分型等分子生物學方法，分離鑒定乳桿菌株，在乳桿菌亞種水平上篩選具有益生菌特征的優(yōu)秀菌株為豐富臨床乳桿菌制劑，開發(fā)一種安全、有效、實用性更強的臨床用于BV臨床治療的高效安全的生態(tài)制劑奠定實驗基礎(chǔ)。 我們用MRS乳桿菌專用培養(yǎng)基對150例健康婦女陰道分泌物樣本中的乳桿菌進行分離培養(yǎng)，通過rep-PCR基因分型和16S rRNA基因測序，分離鑒定獲得12種乳桿菌共170株，其中最常見的有彎曲乳桿菌L. crispatus、詹氏乳桿菌L. jensenii、加氏乳桿菌L. gasseri和發(fā)酵乳桿菌L. fermentum四種，統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)L. crispatus、L. jensenii亞種較多，L.gasseri、L. fermentum種類較單一，大部分健康婦女陰道中只有一種優(yōu)勢乳桿菌。在此基礎(chǔ)上，我們篩選具有益生菌特征的乳桿菌，分別從以下幾個方面進行：首選檢測了乳桿菌產(chǎn)酸的能力，通過測量了乳桿菌發(fā)酵液的PH值，皆在4左右，說明乳桿菌產(chǎn)酸能力普遍較強。其次，檢測了乳桿菌產(chǎn)H_2O_2能力，其中H_2O_2弱陽性有59株，陽性有28株，強陽性有46株。統(tǒng)計結(jié)果表明：75%以上健康婦女陰道乳桿菌產(chǎn)H_2O_2。然后,進一步對產(chǎn)H_2O_2強陽性的46株乳桿菌做粘附能力檢測試驗，其中有13株乳桿菌粘附HeLa細胞能力較強，粘附細菌數(shù)均在200CFU/個以上。然后，我們做了乳桿菌拮抗金葡菌生長實驗，比較乳桿菌抑菌圈直徑與Amp陽性參照抑菌圈直徑比值大小，比值在0.8以上的菌株對金葡菌具有較強拮抗作用，共有7株。最后，我們模擬陰道內(nèi)環(huán)境，初步探討了乳桿菌與陰道上皮細胞（VEC）的粘附能力，結(jié)果表明，具有粘附VEC能力的乳桿菌能粘附大部分個體的VEC證實本研究篩選出來的功能乳桿菌具有普遍實用性，能治療大部分BV。 本研究主要通過分子生物學方法分離鑒定陰道乳桿菌株，，檢測了乳桿菌產(chǎn)酸、產(chǎn)H_2O_2、粘附HeLa細胞和拮抗金葡菌的能力，共篩選出7株具有較強產(chǎn)酸、產(chǎn)H_2O_2、粘附HeLa細胞和拮抗金葡菌能力的乳桿菌，這7株乳桿菌可作為治療BV的候選菌株進行深入研究。
[Abstract]:Bacterial Vaginitis ( BV ) is a common vaginal infectious disease among women of childbearing age . The incidence of BV is 10 % 锝

本文編號：1520974