本文關(guān)鍵詞： A型流感病毒 蛋白抗體芯片技術(shù) 環(huán)加氧酶-2(COX-2) 白細(xì)胞介素-27(IL-27) 非結(jié)構(gòu)蛋白1(NS1) DNA甲基轉(zhuǎn)移酶3B(DNMT3B)　出處：《武漢大學(xué)》2011年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：在A型流感病毒感染和宿主免疫應(yīng)答研究中,對宿主蛋白表達(dá)和功能的研究,尤其是對病毒感染后,宿主血清中免疫相關(guān)蛋白的表達(dá)和功能的研究十分重要。蛋白抗體芯片技術(shù)提供了高通量篩選蛋白的平臺。運用此項技術(shù),我們檢測了85名A型流感病毒感染者血清中507種免疫相關(guān)蛋白的表達(dá)水平,并用病毒體外感染外周血單個核細(xì)胞(PBMCs)驗證。因為環(huán)加氧酶(COX-2)是重要的炎癥因子,并且在A型流感病毒感染后大量表達(dá),接著我們用COX-2的特異性抑制劑NS-398篩選了A型流感病毒感染后,由COX-2調(diào)控的免疫相關(guān)蛋白。實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn),和正常人相比,在流感病人的血清中,有138蛋白的表達(dá)差異大于2倍；其中有102種蛋白表達(dá)上調(diào),36種蛋白表達(dá)下調(diào)。在用流感病毒體外感染PBMCs和COX-2抑制劑篩選實驗中,血清實驗中106種表達(dá)差異大于2倍的蛋白得到了驗證。而在這106種蛋白中,有48種蛋白的表達(dá)是受COX-2調(diào)控的。 根據(jù)蛋白抗體芯片的結(jié)果,我們選擇了IL-27做進(jìn)一步的研究。實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn),IL-27在A型流感病毒感染的A549細(xì)胞和PBMCs中,表達(dá)顯著上調(diào)。啟動子活性和細(xì)胞信號通路傳導(dǎo)實驗發(fā)現(xiàn),A型流感病毒通過COX-2/PGE2-PKA-CREB信號通路來激活I(lǐng)L-27/EBI3啟動子,進(jìn)而誘導(dǎo)IL-27的表達(dá)。進(jìn)一步實驗發(fā)現(xiàn),A型流感病毒上調(diào)的IL-27在機體中起到類似I型干擾素的作用。IL-27通過促進(jìn)抗病毒信號因子STAT1/STAT2的磷酸化來激活抗病毒因子PKR,最終反過來抑制流感病毒的復(fù)制。此外,臨床樣本的檢測證實IL-27在季節(jié)性流感病人和2009-HIN1感染者的血清中大量表達(dá),并且和血清前列腺素(PGE2)的表達(dá)量呈正相關(guān)。綜合實驗結(jié)果,我們得出A型流感病毒感染后,IL-27的高表達(dá)是宿主對病毒感染的免疫應(yīng)答。 病毒感染誘導(dǎo)表觀遺傳修飾的改變,尤其是DNA甲基化的改變,在很多的研究中已有報道。我們此前曾報道過A型流感病毒感染通過對DNA甲基化的影響來誘導(dǎo)IL-32的表達(dá)。流感病毒感染后,DNA甲基轉(zhuǎn)移酶DNMT3B的表達(dá)被下調(diào),但其機制卻并不清楚。為了進(jìn)一步研究流感病毒感染是通過怎樣的機制來下調(diào)DNMT3B的表達(dá),我們用哺乳動物雙雜交、免疫共沉淀和His-pull down的方法,證實了DNMT3B能和A型流感病毒的非結(jié)構(gòu)蛋白NS1相互作用。免疫熒光和激光共聚焦實驗則顯示流感病毒感染后,通過NS1和DNMT3B的相互作用,改變了DNMT3B的細(xì)胞核定位,誘導(dǎo)其從細(xì)胞核轉(zhuǎn)位到細(xì)胞質(zhì),和NS1共定位在一起。而這種誘導(dǎo)DNMT3B亞細(xì)胞定位的改變,需要NS1的核輸出信號(NES),使NS1可以定位到細(xì)胞質(zhì)。當(dāng)NS1的核輸出信號(NES)突變后,流感病毒感染不能改變DNMT3B的細(xì)胞核定位。此外,我們也探討了NS1和DNMT3B相互作用的生物學(xué)意義。流感病毒感染后,NSl改變DNMT3B的定位,導(dǎo)致細(xì)胞核DNMT3B的表達(dá)量降低,抑制了細(xì)胞核內(nèi)DNMT3B的甲基轉(zhuǎn)移酶活性,誘導(dǎo)了多種促炎細(xì)胞因子和趨化因子的大量表達(dá)。而NS1核輸出信號(NES)突變的流感病毒,對DNMT3B甲基轉(zhuǎn)移酶活性的抑制和對促炎癥細(xì)胞因子及趨化因子的誘導(dǎo)都顯著降低。根據(jù)這些結(jié)果,我們得出,DNMT3B和NS1相互作用,是宿主應(yīng)對流感病毒感染,調(diào)控免疫相關(guān)蛋白表達(dá)的一種機制。
[Abstract]:In the study of influenza A virus infection and host immune response , it is very important to study the expression and function of the host protein . In particular , it is very important to study the expression and function of the immune - related protein in the host serum after virus infection . According to the results of the protein antibody chip , we chose IL - 27 as a further study . The results showed that the expression of IL - 27 was significantly up - regulated in A549 cells and PBMCs infected by influenza A virus . The results showed that the expression of IL - 27 was positively correlated with the expression of IL - 27 . In addition , the detection of clinical samples confirmed that the high expression of IL - 27 was the immune response to viral infection after influenza A virus infection . In order to further study the effects of influenza A virus infection on DNA methylation , the expression of DNMT3B can be regulated by the interaction between DNA methyltransferase DNMT3B . In addition , we also discussed the biological significance of DNMT3B . In order to further study the effect of DNA methyltransferase DNMT3B , we also studied the expression of DNMT3B . In addition , we found that the interaction between DNA MT3B and NMT3B induced by influenza virus was a mechanism for host to deal with influenza virus infection and regulate the expression of immune - related protein .

【學(xué)位授予單位】：武漢大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R373.13

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 徐眉;周曉明;;流感病毒感染機制的研究進(jìn)展[J];國外醫(yī)學(xué)(微生物學(xué)分冊);2003年01期

2 王歡,吳中明;流感病毒誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的研究進(jìn)展[J];國外醫(yī)學(xué).病毒學(xué)分冊;2005年04期

3 孫小片;;甲型H1N1流感疫情問答[J];少兒科技;2009年06期

4 鄭雪花;田勇;徐彤;孫秀梅;馬龍;;流感病毒誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡相關(guān)因子的研究進(jìn)展[J];中國牧業(yè)通訊;2009年19期

5 朱宇同;王維祥;曾子安;楊汝才;陳德華;;流感病毒感染成年樹，

本文編號：1520342