本文關(guān)鍵詞： 慢性乙型肝炎病毒感染 樹突狀細(xì)胞 乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg) 白細(xì)胞介素(IL-) p絲裂原激活蛋白激酶(pMAPK)　出處：《細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志》2017年03期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的探討重組人乙型肝炎病毒核心抗原(rhHBcAg)誘導(dǎo)髓源性樹突狀細(xì)胞(mDC)分泌白細(xì)胞介素15(IL-15)的機(jī)制。方法采用人單核細(xì)胞磁珠負(fù)分選試劑盒分選外周血單核細(xì)胞,采用粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)、IL-4和腫瘤壞死因子α(TNF-α)誘導(dǎo)分化為mDC,10μg/m L rhHBcAg刺激mDC 1~6 d;分別用25μmol/L磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信號(hào)通路抑制劑LY294002、1μmol/L p38絲裂原激活蛋白激酶(p38MAPK)信號(hào)通路抑制劑SB203580、100 nmol/L c-Jun N末端激酶(JNK)信號(hào)通路抑制劑SP600125和150 nmol/L胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(ERK)信號(hào)通路抑制劑U0126預(yù)處理1 h,再給予10μg/m L rhHBcAg刺激48 h。之后收集細(xì)胞和細(xì)胞培養(yǎng)上清,實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)IL-15 mRNA水平,ELISA檢測(cè)IL-15蛋白水平,Western blot法檢測(cè)PI3K/Akt和MAPK信號(hào)通路分子磷酸化水平。結(jié)果與rhHBcAg未刺激組比較,rhHBcAg刺激組IL-15 mRNA和蛋白水平顯著升高;與rhHBcAg刺激組比較,p38抑制劑預(yù)處理組IL-15水平明顯降低,但PI3K/Akt、JNK和ERK抑制劑預(yù)處理組IL-15水平未見顯著性改變。結(jié)論 rhHBcAg通過p38MAPK信號(hào)通路上調(diào)外周血mDC IL-15的分泌。
[Abstract]:Objective to investigate the mechanism of recombinant human hepatitis B virus core antigen rhHBcAg-induced interleukin-15 (IL-15) secretion by myelogenous dendritic cells (mDCs). Methods Human monocyte magnetic beads negative sorting kit was used to separate peripheral blood monocytes. Granulocyte-macrophage colony stimulating factor (GM-CSF) IL-4 and tumor necrosis factor 偽 (TNF- 偽) were used to induce differentiation into mDC10 渭 g / mL rhHBcAg for 6 d, and 25 渭 mol/L phosphatidylinositol 3-kinase / protein kinase Pi _ 3K / Akt signal pathway inhibitor LY294002K / Akt1 渭 mol/L p38 mitogen-activated, respectively. Protein kinase p38 MAPK signal pathway inhibitor SB203580 / 100 nmol/L c-Jun N-terminal kinase (SP600125) and 150 nmol/L extracellular signal-regulated kinase (U0126) signal pathway inhibitor U0126 were pretreated for 1 h and then stimulated with 10 渭 g / mL rhHBcAg for 48 h. Then the cells were collected. And cell culture supernatant, Real time quantitative PCR was used to detect the level of IL-15 mRNA and Elisa was used to detect the level of IL-15 protein. Western blot assay was used to detect the phosphorylation of PI3K/Akt and MAPK signaling pathway. Results the IL-15 mRNA and protein levels in rhHBcAg stimulated group were significantly higher than those in unstimulated rhHBcAg group. Compared with the rhHBcAg stimulation group, the level of IL-15 in the P38 inhibitor pretreatment group was significantly lower, but the IL-15 level in the PI3K / Aktnk preconditioning group and the ERK inhibitor pretreatment group was not significantly changed. Conclusion rhHBcAg up-regulates the secretion of mDC IL-15 in peripheral blood through p38 MAPK signaling pathway.
【作者單位】： 上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬曙光醫(yī)院肝病科細(xì)胞免疫實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(81473477,81403354,81473629,81403351,81503545) 國(guó)家“艾滋病和病毒性肝炎等重大傳染病防治”科技重大專項(xiàng)(2012ZX10005004-002) 上海市科委科技支撐項(xiàng)目(16401970600);上海市科委揚(yáng)帆計(jì)劃(14YF1411600,15YF1412300);上海市科委生物引導(dǎo)項(xiàng)目(16401931300) 上海市中醫(yī)藥事業(yè)發(fā)展三年行動(dòng)計(jì)劃項(xiàng)目(ZY3-LCPT-1-1001,ZY3-CCCX-3-3027,ZY3-CCCX-3-3029,CY3-CCCX-3-2006) 上海中醫(yī)藥大學(xué)預(yù)算內(nèi)項(xiàng)目(2014YSN39) 上海申康市級(jí)醫(yī)院新興前沿技術(shù)聯(lián)合攻關(guān)項(xiàng)目(SHDC12016121)
【分類號(hào)】：R392

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