本文關(guān)鍵詞： 晶狀體上皮細(xì)胞 熱休克蛋白60 熱休克預(yù)處理 SYBR GreenⅠ 實(shí)時(shí)熒光定量PCR　出處：《南昌大學(xué)》2011年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的 采用SYBR Green I實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測人晶狀體上皮細(xì)胞在不同環(huán)境刺激處理后HSP60mRNA的表達(dá)的變化,探討HSP60mRNA表達(dá)變化規(guī)律以及不同環(huán)境刺激處理后表達(dá)是否有差異。 方法 采用正常人組織源性晶狀體上皮細(xì)胞HUM-CELL-0098進(jìn)行細(xì)胞傳代培養(yǎng)后,將傳代培養(yǎng)后的細(xì)胞進(jìn)行分組實(shí)驗(yàn),在氧化條件以及熱休克處理后加氧化條件下培養(yǎng)細(xì)胞30min后,在正常培養(yǎng)條件下繼續(xù)培養(yǎng)并且選取不同時(shí)間點(diǎn)(Oh、2h、4h、6h、16h、24h)的細(xì)胞采用SYBR Green I實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測HSP60mRNA的表達(dá)情況。 結(jié)果 觀察到晶狀體上皮細(xì)胞在不同環(huán)境刺激下均表達(dá)HSP60mRNA,但熱休克預(yù)處理后的細(xì)胞HSP60mRNA的表達(dá)較未熱休克處理細(xì)胞高。氧化應(yīng)激條件下HSP60mRNA的表達(dá)明顯增加,在刺激結(jié)束后表達(dá)含量為最高,以后逐漸下降；在熱休克預(yù)處理組中HSP60mRNA的表達(dá)含量也明顯增加,但在4h表達(dá)量最高,以后逐漸下降。兩組細(xì)胞在不同時(shí)段HSP60mRNA表達(dá)量變化趨勢不同F(xiàn)=178.786,P=0.007,P0.05,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。此外,熱休克預(yù)處理組與單純氧化應(yīng)激組中HSP60mRNA表達(dá)含量有顯著差異,熱休克處理組的表達(dá)含量較單純氧化應(yīng)激組高,存在組間差別F=193.118,P=0.001,P0.05,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。時(shí)間與分表交互作用F=124.939,P=0.003,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。兩組細(xì)胞HSP60mRNA表達(dá)量進(jìn)行各個(gè)時(shí)間兩兩對比發(fā)現(xiàn)這兩組數(shù)據(jù)在統(tǒng)計(jì)學(xué)上有差異。此外,還發(fā)現(xiàn)熱休克處理后的細(xì)胞表達(dá)HSP60mRNA可能具有時(shí)間依賴性。 結(jié)論 人晶狀體上皮細(xì)胞在不同應(yīng)激條件下,均能誘導(dǎo)HSP60mRNA的合成,但在不同應(yīng)激條件下的HSP60mRNA的表達(dá)是具有差異的,熱休克預(yù)處理后的細(xì)胞HSP60mRNA的表達(dá)高于氧化損傷處理的細(xì)胞,給予預(yù)先的熱休克處理可通過提高HSP60mRNA表達(dá)來保護(hù)晶狀體。
[Abstract]:Purpose. SYBR Green I real-time quantitative PCR was used to detect the changes of HSP60mRNA expression in human lens epithelial cells treated with different environmental stimuli, and to investigate the changes of HSP60mRNA expression and whether there were differences in the expression of HSP60mRNA after different environmental stimuli. Method. Normal human tissue-derived lens epithelial cells (HUM-CELL-0098) were cultured by subculture. The cultured cells were divided into two groups. The cells were cultured for 30 minutes under the conditions of oxidation and heat shock. SYBR Green I real-time fluorescence quantitative PCR was used to detect the expression of HSP60mRNA. Results. It was observed that HSP60mRNAs were expressed in lens epithelial cells under different environmental stimuli, but the expression of HSP60mRNA was higher in HSP60mRNAs treated with heat shock than that in cells without heat shock. The expression of HSP60mRNAs was significantly increased under oxidative stress. The expression level of HSP60mRNA increased significantly in heat shock preconditioning group, but the highest expression level was observed at 4 h after heat shock preconditioning. The change trend of HSP60mRNA expression in the two groups was different at different time, there was significant difference in the expression of HSP60mRNA between heat shock preconditioning group and oxidative stress group, and there was significant difference between heat shock preconditioning group and oxidative stress group. The expression level in heat shock treatment group was higher than that in oxidative stress group. There was a significant difference between the two groups (P 0.05). The interaction between time and time was statistically significant. The expression of HSP60mRNA in the two groups was compared at different times. In addition, there was statistical difference between the two groups. It was also found that the expression of HSP60mRNA in the cells treated with heat shock may be time dependent. Conclusion. Human lens epithelial cells could induce the synthesis of HSP60mRNA under different stress conditions, but the expression of HSP60mRNA was different under different stress conditions. The expression of HSP60mRNA in cells pretreated with heat shock was higher than that in cells treated with oxidative damage. Preconditioning with heat shock can protect the lens by increasing the expression of HSP60mRNA.
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R363

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本文編號：1506017