本文關(guān)鍵詞： 皮層神經(jīng)干細(xì)胞 支持細(xì)胞 神經(jīng)白細(xì)胞素 共培養(yǎng) 神經(jīng)元分化 神經(jīng)元軸突生長　出處：《華東理工大學(xué)》2011年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：睪丸組織的支持細(xì)胞(Sertoli Cell, SCs)作為一種滋養(yǎng)型細(xì)胞,能夠分泌多種活性物質(zhì),包括生長因子、營養(yǎng)因子和生理調(diào)節(jié)蛋白等。同時,支持細(xì)胞在正常的生長環(huán)境中不僅能夠創(chuàng)造出適合其他多種細(xì)胞生長發(fā)育的有利微環(huán)境(如生精細(xì)胞和神經(jīng)干細(xì)胞),還能誘導(dǎo)胚胎皮層神經(jīng)干細(xì)胞(neural stem cell, NSCs)分化并維持PTujⅢ陽性神經(jīng)元生長。因此,本文對睪丸支持細(xì)胞和神經(jīng)干細(xì)胞的分離、共培養(yǎng)條件,及神經(jīng)元細(xì)胞誘導(dǎo)分化和軸突生長的機(jī)制進(jìn)行初步研究。具體結(jié)果如下： (1)從ICR小鼠分離睪丸支持細(xì)胞,并通過蘇木精伊紅染色和DAPI核染色法鑒定了具有獨(dú)特雙核仁結(jié)構(gòu)的支持細(xì)胞。 (2)采用機(jī)械法和酶消化法,從ICR胎鼠腦皮層分離了神經(jīng)干細(xì)胞。通過免疫細(xì)胞化學(xué)熒光染色進(jìn)行驗(yàn)證分離的原代胚胎皮層神經(jīng)干細(xì)胞,結(jié)果顯示其可形成帶特異性抗原蛋白Nestin的神經(jīng)球,并經(jīng)傳代培養(yǎng)后純度達(dá)到92%(P0.05)。 (3)支持細(xì)胞與原代胚胎皮層神經(jīng)干細(xì)胞共培養(yǎng)能有效誘導(dǎo)神經(jīng)元分化并促進(jìn)軸突生長。免疫細(xì)胞化學(xué)熒光染色分析表明在培養(yǎng)皿中生長的胚胎皮層神經(jīng)干細(xì)胞在共培養(yǎng)7天后有60%(P0.05)分化為成熟的神經(jīng)元。同時,共培養(yǎng)模式能夠促進(jìn)原代誘導(dǎo)神經(jīng)元的軸突生長(在第7天時為140μm)(P0.05)和存活率(在第7天時為82%)(P0.05)。與在分化培養(yǎng)基中生長分化的神經(jīng)元(陽性對照)相比較,其軸突的平均長度增長了43%(P0.05)而存活率提高了58%(P0.05)。 (4)實(shí)驗(yàn)首次發(fā)現(xiàn)神經(jīng)白細(xì)胞素(neuroleukin)是支持細(xì)胞分泌的促進(jìn)軸突生長的活性物質(zhì)之一。為了驗(yàn)證支持細(xì)胞分泌的促進(jìn)軸突生長的活性物質(zhì),通過總RNA提取和逆轉(zhuǎn)錄PCR驗(yàn)證了支持細(xì)胞表達(dá)神經(jīng)白細(xì)胞素(NLK)的mRNA,并通過超高效液相串聯(lián)二級質(zhì)譜驗(yàn)證NLK存在于支持細(xì)胞上清液中。在支持細(xì)胞飼養(yǎng)層中外源添加抗神經(jīng)白細(xì)胞素抗體后,培養(yǎng)到第7天時神經(jīng)元軸突長度減少到了108μm,與外源添加NLK的支持細(xì)胞直接共培養(yǎng)條件達(dá)到的176μm相比較要少得多,所以NLK對促進(jìn)軸突生長和提高神經(jīng)元存活率有很大的貢獻(xiàn),是支持細(xì)胞分泌的一種重要活性物質(zhì)。 因此,分化自皮層神經(jīng)干細(xì)胞的神經(jīng)元的軸突生長和神經(jīng)元存活率的提高都能夠由支持細(xì)胞所調(diào)節(jié),并且發(fā)現(xiàn)由支持細(xì)胞分泌的神經(jīng)白細(xì)胞素(neuroleukin)起到了重要作用。這不僅能夠提供大量的可供移植治療用的神經(jīng)元來源,還能強(qiáng)化神經(jīng)元之間的相互作用,從而提高移植的效率。
[Abstract]:Sertoli cell (SCS), the Sertoli cell of testicular tissue, as a trophoblast, can secrete a variety of active substances, including growth factor, nutrition factor and physiological regulatory protein. Sertoli cells can not only create a favorable microenvironment (such as spermatogenic cells and neural stem cells) suitable for the growth and development of many other cells in normal growth environment, but also induce differentiation of neural stem cells (NSCs) from embryonic cortical neural stem cells. And maintain the growth of PTuj 鈪，

本文編號：1504738