本文關(guān)鍵詞： 登革病毒 抗原蛋白 原核表達(dá) 血清學(xué)評價　出處：《中國人獸共患病學(xué)報》2017年01期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的在原核表達(dá)系統(tǒng)中對登革病毒包膜蛋白(E蛋白)和非結(jié)構(gòu)蛋白1(NS1)融合的B細(xì)胞抗原表位進(jìn)行表達(dá)、純化及血清學(xué)評價。方法將B細(xì)胞抗原表位用形成α螺旋的連接肽(EAAAK)2作為接頭,串聯(lián)合成1條全新的多表位融合重組基因rE,將其克隆到原核表達(dá)載體pET-28a(+)中,轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3)后經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)融合蛋白,用鎳柱對重組蛋白純化,并用SDS-PAGE和Western blot方法鑒定表達(dá)產(chǎn)物。以融合蛋白為抗原,用間接ELISA檢測登革熱病人血清IgM抗體。結(jié)果重組表達(dá)載體pET28a-rE構(gòu)建成功,并在大腸桿菌BL21(DE3)中成功表達(dá)。融合蛋白主要以包涵體形式存在,用鎳柱純化獲得高純度的目的蛋白,SDS-PAGE和Western blot檢測結(jié)果顯示蛋白分子量大小與預(yù)期結(jié)果相符,建立的間接ELISA具有較高的準(zhǔn)確性。結(jié)論原核表達(dá)的登革病毒多表位融合蛋白具有良好的血清學(xué)檢測價值。
[Abstract]:Objective to express B cell antigen epitopes fused with dengue virus envelope protein (E) and nonstructural protein 1 (NS1) in prokaryotic expression system. Methods A novel multiepitope fusion recombinant gene, rEE, was synthesized from B cell antigen epitope using 偽 helix ligated peptide, AAAKN 2, as a junction. The recombinant gene was cloned into prokaryotic expression vector pET-28a(), and the recombinant gene was cloned into the prokaryotic expression vector pET-28a (pET-28a ()). Expression of the fusion protein was induced by IPTG. The recombinant protein was purified by nickel column and identified by SDS-PAGE and Western blot. The fusion protein was used as antigen. Results the recombinant expression vector pET28a-rE was successfully constructed and successfully expressed in E. coli BL21DE3. The fusion protein was mainly in the form of inclusion body. The results of SDS-PAGE and Western blot analysis showed that the molecular weight of the protein was in accordance with the expected results. Conclusion the polyepitope fusion protein expressed in prokaryotic cells has good serological value.
【作者單位】： 廣東醫(yī)科大學(xué)檢驗醫(yī)學(xué)研究所;東莞市第八人民醫(yī)院;
【分類號】：R373.33

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