發(fā)布時(shí)間：2018-02-08 20:15

  本文關(guān)鍵詞： 肝竇內(nèi)皮細(xì)胞 肝竇毛細(xì)血管化 蛋白質(zhì)組　出處：《北京工業(yè)大學(xué)》2012年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：肝竇內(nèi)皮細(xì)胞(Liver sinusoidal endothelial cell, LSEC)是肝臟非實(shí)質(zhì)主要細(xì)胞群，約占肝非實(shí)質(zhì)細(xì)胞的總量的50%，它們將肝細(xì)胞與血流分隔開，并在肝臟微循環(huán)中發(fā)揮重要作用．這些細(xì)胞缺乏基底膜，形成孔型單層結(jié)構(gòu)，并表達(dá)多種清道夫受體，調(diào)節(jié)肝臟薄壁細(xì)胞與血液之間的物質(zhì)交換，構(gòu)成機(jī)體中最強(qiáng)大的清道夫系統(tǒng)．肝臟在遭到多種病原侵襲時(shí)，肝竇內(nèi)皮細(xì)胞窗孔逐漸減少或消失，內(nèi)皮下基膜形成，產(chǎn)生類似于連續(xù)型毛細(xì)血管的結(jié)構(gòu)，這一過程稱為肝竇毛細(xì)血管化．它由多種因素引起，其過程極復(fù)雜，而如果肝竇毛細(xì)血管化持續(xù)發(fā)展，將進(jìn)一步發(fā)展為肝纖維化，由于肝纖維化可以起始多種肝病，因此肝竇毛細(xì)血管化現(xiàn)象在多種肝病的發(fā)病前期階段均有出現(xiàn)，近年來受到廣泛關(guān)注，而目前關(guān)于肝竇內(nèi)皮細(xì)胞的生理功能及病理機(jī)制方面仍少有研究．用亞砷酸鈉加入飲水中喂養(yǎng)C57BL/6J小鼠可以成功復(fù)制肝竇毛細(xì)血管化的動(dòng)物模型，本研究采用蛋白質(zhì)組學(xué)的技術(shù)手段，系統(tǒng)分析了肝竇毛細(xì)血管化發(fā)生發(fā)展過程中肝竇內(nèi)皮細(xì)胞蛋白質(zhì)組的動(dòng)態(tài)變化，發(fā)掘了一批與肝竇毛細(xì)血管化密切相關(guān)的功能蛋白質(zhì)組，結(jié)合生物信息學(xué)手段系統(tǒng)分析差異蛋白的功能和調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，從而為深入探討肝竇毛細(xì)血管化發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制奠定了基礎(chǔ)． 用亞砷酸鈉飲水喂養(yǎng)C57/BL6J小鼠5周，肝臟病理表現(xiàn)為肝竇毛細(xì)血管化及輕度纖維化．隨后，我們利用密度梯度離心結(jié)合CD146免疫磁珠分選的方法原位分離正常組和模型組小鼠的肝竇內(nèi)皮細(xì)胞，利用差異凝膠電泳技術(shù)(DIGE)分析正常組和模型組小鼠LSEC全蛋白的差異，所得到的差異蛋白質(zhì)點(diǎn)用MALDI-TOF/TOF-MS質(zhì)譜儀進(jìn)行檢測(cè)，目前共鑒定了8個(gè)差異蛋白，其中7個(gè)表達(dá)量下調(diào)，1個(gè)表達(dá)量上調(diào)．在下調(diào)的差異蛋白中，Anp32A是G蛋白信號(hào)通路相關(guān)的細(xì)胞因子，可作為S1P的作用靶點(diǎn)，參與多種細(xì)胞活動(dòng)，包括細(xì)胞增殖，細(xì)胞分化，細(xì)胞凋亡，，腫瘤抑制等生理功能；而RhoGDI2是Rho蛋白家族GDP解離抑制因子，可調(diào)節(jié)Rho家族蛋白GDP與GTP的結(jié)合與轉(zhuǎn)換，從而實(shí)現(xiàn)Rho蛋白活性的調(diào)控，它的下調(diào)可以激活NADPH氧化酶亞基Rac1，進(jìn)而活化NADPH氧化酶；S100a9可與S100a8共同介導(dǎo)NF-κB活性的調(diào)控，通過活性氧簇(ROS)的表達(dá)調(diào)節(jié)肝臟惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展，它們對(duì)形成肝竇毛細(xì)血管化有著重要的調(diào)控作用．上述研究為進(jìn)一步闡明肝竇毛細(xì)血管化發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制，發(fā)現(xiàn)多種肝病早期診斷標(biāo)志物和潛在的藥物靶點(diǎn)奠定了基礎(chǔ)．
[Abstract]:Liver sinusoidal endothelial cell ( LSEC ) is a non - essential main cell population of the liver , which accounts for 50 % of the total liver non - essential cells , which separates the liver cells from blood flow and plays an important role in liver microcirculation . These cells lack the basement membrane , form the pore - type single - layer structure , express a variety of scavenger receptors , regulate the exchange of substances between the thin - walled cells of the liver and the blood , and form the most powerful scavenger system in the organism . When the liver is invaded by a variety of pathogens , the portal pores of the hepatic sinusoidal endothelial cells are gradually reduced or disappeared , and the subcutaneous basement membrane is formed to produce a structure similar to the continuous capillary vessel , and the process is called the capillary vessel of the hepatic sinus . It is caused by a variety of factors , its process is very complex , and if the capillary of hepatic sinusoid continues to develop , it will be further developed into hepatic fibrosis . In this study , the dynamic changes of hepatic sinusoid endothelial cells were successfully reproduced by adding sodium arsenite to drinking water , and the dynamic changes of the protein groups in the hepatic sinus endothelial cells were analyzed by means of proteomic technique . The function and control network of the differential protein were analyzed by means of bioinformatics , which laid the foundation for further exploring the molecular mechanism of the development of capillary vessel in the liver . The liver and pathology of C57 / BL6J mice were fed with sodium arsenite drinking water for 5 weeks . Subsequently , we used the density gradient centrifugation combined with CD146 immunomagnetic bead sorting method to separate normal and model group mouse liver sinus endothelial cells in situ . The difference of total protein of LSEC in normal group and model group was analyzed by differential gel electrophoresis ( DIGE ) . The difference protein spots were detected by MALDI - TOF / TOF - MS mass spectrometer . Eight differentially expressed proteins were identified , 7 of them were down - regulated and 1 expression was up - regulated . In the down - regulated difference protein , Anp32A is a cytokine related to G protein signaling pathway , and can be used as the target of S1P to participate in various cellular activities , including cell proliferation , cell differentiation , apoptosis , tumor inhibition and other physiological functions . In order to further clarify the molecular mechanism of the development of capillary vessel in hepatic sinus , this study lays a foundation for the early diagnosis of liver diseases and potential drug targets .

【學(xué)位授予單位】：北京工業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R341

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