本文關鍵詞： 基底剛度 創(chuàng)面愈合相關細胞 增殖 遷移 整合素β1　出處：《重慶大學》2011年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：在創(chuàng)面愈合階段,表皮細胞首先遷移至受創(chuàng)真皮,內皮細胞形成新的血管,并用新生毛細血管交聯(lián)成纖維細胞和巨噬細胞代替由纖維蛋白基質組成的肉芽組織。接著表皮細胞、內皮細胞和成纖維細胞開始增殖和成熟,并最終恢復上皮屏障功能。在創(chuàng)面愈合過程中,創(chuàng)面的剛度發(fā)生明顯的改變,而力學變化對細胞增殖、遷移和分化有著調控作用。因此,基底剛度的變化對創(chuàng)面愈合相關細胞的影響值得探討。本文采用人表皮細胞(HACAT)、人臍靜脈內皮細胞(HUVEC)和成纖維細胞三種創(chuàng)面愈合相關細胞,以不同剛度的硅膠作為基底,將其接種在硅膠基底上,探索不同剛度基底對創(chuàng)面愈合相關細胞的影響,探索人表皮細胞、內皮細胞與成纖維細胞對外部力學刺激的應激反應,以期為闡明創(chuàng)面愈合機制,促進創(chuàng)面愈合提供可靠的依據(jù)和參考意見。 本文主要的研究內容和結果為: (1)了解創(chuàng)面愈合過程中剛度的變化,采用不同濃度的硅膠配制不同剛度的硅膠基底以模擬其愈合過程中的剛度變化,觀察硅膠基底表面形貌。結果顯示以16 kPa、20 kPa、200 kPa來分別模擬正常皮膚的剛度、創(chuàng)面愈合第7天肉芽組織的剛度、創(chuàng)面愈合后期的剛度。掃描電鏡觀察到不同濃度硅膠基底并未引起表面形貌的差別。 (2)將表皮細胞、內皮細胞和成纖維細胞接種在三種不同剛度的硅膠基底上。通過細胞生長曲線、MTT法和細胞周期檢測其增殖情況;用細胞劃痕法進行表皮細胞、內皮細胞和成纖維細胞遷移率的測定。發(fā)現(xiàn)在剛度高的基底上表皮細胞、內皮細胞和成纖維細胞增殖速度更快,且三種細胞的遷移率遠遠高于低剛度基底上的細胞。同時發(fā)現(xiàn)表皮細胞與成纖維細胞對于基底剛度的變化敏感,而內皮細胞雖然受基底剛度的影響,但其敏感程度不如表皮細胞與成纖維細胞。 (3)應用構建好的整合素β1小RNA干擾載體轉染表皮細胞與成纖維細胞,通過瞬時轉染,用Western blot檢測轉染后表皮細胞與成纖維細胞整合素β1蛋白的改變。通過潮霉素持續(xù)加壓篩選已轉染細胞,直到轉染細胞株單克隆形成。通過蛋白質印跡發(fā)現(xiàn)重組質粒siIntegrinβ1轉染表皮細胞與成纖維細胞后,能夠抑制細胞中整合素β1的蛋白表達。 (4)將干擾整合β1的表皮細胞和成纖維細胞接種在高剛度的硅膠基底上,以正常表皮細胞與成纖維細胞作為對照。通過細胞生長曲線、MTT法和細胞周期檢測其增殖情況;用細胞劃痕法進行細胞遷移率的測定。發(fā)現(xiàn)在高剛度的基底上干擾整合素β1的表皮細胞和成纖維細胞增殖能力和遷移速度與正常表皮細胞和成纖維細胞相比均有所降低,尤其是遷移速率明顯下降。
[Abstract]:At the stage of wound healing, epidermal cells first migrate to the damaged dermis, and endothelial cells form new blood vessels. New capillary crosslinked fibroblasts and macrophages were used to replace granulation tissue composed of fibrin matrix. Then epidermal cells endothelial cells and fibroblasts began to proliferate and mature. And finally restore the function of epithelial barrier. In the process of wound healing, the stiffness of wound changes obviously, while the mechanical changes of cell proliferation, migration and differentiation have a regulatory role. The effect of changes in basal stiffness on wound healing related cells is worth to be explored. Human epidermal cells were used in this paper. Human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) and fibroblasts (HUVECs) and fibroblasts (HUVECs) and fibroblasts were inoculated on silica gel substrate with different stiffness silica gel as the substrate. To explore the effects of different stiffness substrates on wound healing related cells, and to explore the stress response of human epidermal cells, endothelial cells and fibroblasts to external mechanical stimulation in order to elucidate the mechanism of wound healing. To promote wound healing to provide reliable basis and reference. The main contents and results of this paper are as follows: 1) to understand the change of stiffness during wound healing, different concentrations of silica gel were used to prepare different stiffness of silica gel substrate to simulate the change of stiffness during the healing process. The surface morphology of silica gel substrate was observed. The results showed that the stiffness of normal skin was simulated by 16kPa20kPa200kPa200, and the stiffness of granulation tissue was observed on the 7th day of wound healing. It was observed by SEM that the surface morphology of different concentrations of silica gel substrate was not different. (2) Epidermal cells, endothelial cells and fibroblasts were inoculated on three kinds of silica gel substrates with different stiffness. The proliferation of epidermal cells, endothelial cells and fibroblasts were detected by MTT assay and cell cycle analysis. The migration rates of epidermal cells, endothelial cells and fibroblasts were measured by cell scratch method. It was found that the proliferation rate of endothelial cells and fibroblasts was faster in the high stiffness basal epidermal cells. Moreover, the mobility of the three cells was much higher than that of the cells on the low stiffness substrate. It was also found that epidermal cells and fibroblasts were sensitive to the change of basal stiffness, while the endothelial cells were affected by the substrate stiffness. But its sensitivity is inferior to that of epidermal cells and fibroblasts. The constructed small RNA interference vector of integrin 尾 1 was used to transfect epidermal cells and fibroblasts by transient transfection. The changes of integrin 尾 1 protein in epidermal cells and fibroblasts after transfection were detected by Western blot, and the transfected cells were screened by hygromycin continuous pressure. The recombinant plasmid siIntegrin 尾 1 was found to be transfected into epidermal cells and fibroblasts by Western blotting. It can inhibit the protein expression of integrin 尾 1 in cells. (4) Epidermal cells and fibroblasts which interfere with integration of 尾 1 were inoculated on a high rigidity silica gel substrate, and normal epidermal cells and fibroblasts were used as control. Cell growth curve was used. The proliferation was detected by MTT and cell cycle. Cell migration was measured by cell scratch method. It was found that the proliferation and migration rate of integrin 尾 1 interfering with the epidermal cells and fibroblasts on the high stiffness substrate were both higher than those of normal epidermal cells and fibroblasts. A little lower. In particular, the migration rate decreased obviously.
【學位授予單位】：重慶大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2011
【分類號】：R363

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本文編號：1491031