本文關(guān)鍵詞： 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 血管緊張素Ⅱ 誘導(dǎo)分化 神經(jīng)元樣細(xì)胞 多巴胺能神經(jīng)元　出處：《遼寧醫(yī)學(xué)院》2011年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的 本實(shí)驗(yàn)聯(lián)合應(yīng)用不同生長因子與血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)體外誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,探討體外hBMSCs向神經(jīng)元和多巴胺神經(jīng)元分化的潛能,為其治療PD等神經(jīng)變性疾病提供理論依據(jù)。 方法 利用Ficoll密度梯度離心的方法與貼壁培養(yǎng)法聯(lián)合應(yīng)用,獲得正常人骨髓中的單個(gè)核細(xì)胞以及對(duì)BMSCs進(jìn)行純化,用流式細(xì)胞儀(flow cytometer,FCM)測定CD29、CD44、CD166、CD14、CD34和CD45等表面抗原在BMSCs上的表達(dá)。在體外先用堿性成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF)和表皮細(xì)胞生長因子(EGF)進(jìn)行預(yù)誘導(dǎo)BMSCs后,用膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(GDNF)和血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)聯(lián)合誘導(dǎo)第3代生長良好的BMSCs向神經(jīng)元分化。利用倒置顯微鏡觀察BMSCs分化過程中細(xì)胞形態(tài)的變化;通過RT-PCR方法檢測誘導(dǎo)前后BMSCs神經(jīng)干細(xì)胞的標(biāo)記物巢蛋白(Nestin)、神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的特異性標(biāo)記物酸性纖維蛋白(GFAP)以及多巴胺能神經(jīng)元特異性標(biāo)記物酪氨酸羥化酶(TH)等標(biāo)志物的表達(dá)情況;利用免疫熒光法檢測誘導(dǎo)組與對(duì)照組BMSCs的NSE、TH和GFAP蛋白表達(dá)情況。 結(jié)果 BMSCs經(jīng)三代培養(yǎng)后在光鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)呈均一的成纖維細(xì)胞樣,經(jīng)FCM檢測獲得較高純度的BMSCs,其中造血干細(xì)胞的表面標(biāo)志CD34和CD45不表達(dá)或低表達(dá),而骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的標(biāo)志物CD29、CD44和CD166高表達(dá),其陽性率可達(dá)到95%以上;在不同濃度的AngⅡ誘導(dǎo)2w后,倒置顯微鏡觀察各組BMSCs形態(tài),具有典型神經(jīng)元細(xì)胞形態(tài),大多呈雙極、多極和錐形;RT-PCR方法檢測Nestin、NSE、TH的基因表達(dá)量,誘導(dǎo)組相較于對(duì)照組,有顯著性差異(P0.05);免疫熒光細(xì)胞化學(xué)檢測結(jié)果表明誘導(dǎo)分化后表達(dá)NSE、Nestin、TH蛋白的細(xì)胞數(shù)明顯增加(P0.05),但誘導(dǎo)前后的細(xì)胞都不表達(dá)GFAP蛋白。 結(jié)論 聯(lián)合利用密度梯度離心法、貼壁篩選法可以獲得較高純度的BMSCs,不表達(dá)或低表達(dá)造血干細(xì)胞表面標(biāo)志物CD34和CD45,而骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)志物CD29、CD166、CD44的表達(dá)率在95%以上;生長因子和AngⅡ聯(lián)合應(yīng)用可以體外誘導(dǎo)BMSCs分化為神經(jīng)元樣細(xì)胞,表達(dá)Nestin和NSE,不表達(dá)星型膠質(zhì)細(xì)胞的標(biāo)記物GFAP,且大部分表達(dá)多巴胺能神經(jīng)元的特異標(biāo)志物TH,進(jìn)一步證明BMSCs成為神經(jīng)系統(tǒng)疾病細(xì)胞治療的種子細(xì)胞的潛能。
[Abstract]:Purpose In this study, bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) were induced by different growth factors and angiotensin 鈪，

本文編號(hào)：1482897