本文關鍵詞： 臍血 造血干/祖細胞 體外擴增 細胞狀態(tài) 遺傳穩(wěn)定性　出處：《華東理工大學》2011年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：體外擴增技術是解決新鮮臍血中造血干/祖細胞數量稀少問題的有效策略,而擴增后細胞的質量和安全性是影響其臨床應用的重要因素。本文以臍血CD34+細胞為對象,分別采用有或無血清培養(yǎng)體系,對體外培養(yǎng)細胞的生理狀態(tài)、遺傳穩(wěn)定性、染色體核型和克隆形成能力進行了系統(tǒng)的分析,獲得下列結果：(1)無論細胞培養(yǎng)基有無血清,細胞的比生長速率、S/G2/M期細胞比例、以及細胞內端粒酶活性均有相似的變化趨勢,存在一定的相關性；(2)與CD34-細胞相比,在培養(yǎng)過程中CD34+細胞的凋亡率始終維持在較低水平上,低于新鮮分離的CD34+細胞中的凋亡率,表明CD34+細胞具有很強的抗凋亡特性；(3)在細胞培養(yǎng)過程中,與遺傳穩(wěn)定性相關基因Bmil、hTERT和Survivin mRNA的表達水平隨培養(yǎng)時間延長均有不同程度的上調,但與K562細胞中的穩(wěn)定高表達不同,提示細胞培養(yǎng)沒有產生細胞惡化的信號;(4)6個臍血樣本用含血清培養(yǎng)體系擴增,染色體核型異常比例較高,達2/3。但是這些異常的發(fā)生不具有定向性和穩(wěn)定遺傳性,且未表現出異常增殖的特征,提示有血清培養(yǎng)體系擴增的臍血造血干/祖細胞可能有臨床安全性風險,但沒有足夠證據顯示培養(yǎng)細胞出現了惡性轉化。這些研究對確保培養(yǎng)細胞移植的安全性與有效性具有重要意義。
[Abstract]:In vitro amplification technique is an effective strategy to solve the problem of rare number of hematopoietic stem / progenitor cells in fresh umbilical cord blood. The quality and safety of expanded cells are the important factors affecting its clinical application. In this paper, umbilical cord blood CD34 cells were used as the object, with or without serum-free culture system, the physiological status of cultured cells in vitro. Genetic stability, chromosome karyotype and clone forming ability were systematically analyzed. The following results were obtained: 1: 1) the specific growth rate of cells in S- / G _ 2 / M phase, regardless of whether the cell culture medium had serum or not, was obtained. The telomerase activity in the cells showed a similar change trend, and there was a certain correlation between the telomerase activity and the telomerase activity. (2) compared with CD34- cells, the apoptotic rate of CD34 cells was maintained at a lower level during the culture process, which was lower than that in freshly isolated CD34 cells. The results showed that CD34 cells had strong anti-apoptotic properties. 3) during cell culture, the expression levels of Bmila hTERT and Survivin mRNA, which are related to genetic stability, were upregulated in varying degrees with the extension of culture time. However, different from the stable high expression in K562 cells, cell culture did not produce the signal of cell deterioration. 6 umbilical cord blood samples were amplified by serum-containing culture system, and the chromosome karyotype abnormality rate was 2 / 3. But the occurrence of these abnormalities was not directional and stable. There was no abnormal proliferation, which suggested that the umbilical cord blood hematopoietic stem / progenitor cells expanded with serum culture system might be at risk of clinical safety. However, there is not enough evidence to indicate the malignant transformation of cultured cells. These studies are important to ensure the safety and effectiveness of cultured cells transplantation.
【學位授予單位】：華東理工大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2011
【分類號】：R329

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