本文關(guān)鍵詞： 間充質(zhì)干細(xì)胞 脊髓缺血再灌注損傷 鋅 凋亡　出處：《吉林大學(xué)》2011年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：脊髓缺血再灌注損傷(spinal cord ischemia-reperfusion injury, SCII)是外科手術(shù)常見并發(fā)癥之一,特別是主動脈瘤、骶管腫瘤的手術(shù)后,常需要阻斷主動脈,從而導(dǎo)致脊髓損傷,胸主動脈手術(shù)治療引發(fā)的脊髓缺血再灌注損傷所致的截癱,其發(fā)病率高達(dá)3～18%。其發(fā)生機(jī)制比較復(fù)雜,氧化應(yīng)激損傷和凋亡是SCⅡ發(fā)生的主要機(jī)制。目前SCⅡ還沒有理想的預(yù)防方法,治療方法以對癥支持為主,不能從根本上杜絕癱瘓的發(fā)生。患者住院時(shí)間長,花費(fèi)大,給家庭和社會帶來沉重的負(fù)擔(dān),且治療效果不理想。間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cell, MSCs)是屬于中胚層的一類多能干細(xì)胞,具有強(qiáng)大的增殖能力和多向分化潛能、免疫源性弱、來源方便、易于分離培養(yǎng)、進(jìn)入體內(nèi)后可定位于受損部位并能分化成定位組織的細(xì)胞類型等特性。但是干細(xì)胞在受損部位的存活率受到缺血、炎癥因子等不利因素的影響,導(dǎo)致干細(xì)胞存活率降低,影響治療效果。鋅是人或動物體內(nèi)的必需微量元素,對各種生物膜都具有穩(wěn)定作用,可緩解多種器官的缺血再灌注損傷,具有抗氧化應(yīng)激、抗凋亡作用,能改善局部受損的微環(huán)境。本研究擬通過鋅預(yù)處理,再制備SCⅡ大鼠模型,然后移植間充質(zhì)干細(xì)胞,探討鋅和MSCs對脊髓缺血再灌注損傷的防治作用以及鋅對MSCs治療脊髓缺血在再灌損傷的增強(qiáng)作用。 本研究采用貼壁培養(yǎng)法分離、純化、擴(kuò)增骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs),應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期。第3代BMSCs通過血清饑餓,然后在含有bFGF、EGF和RA的誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基中培養(yǎng)6d誘導(dǎo)其向神經(jīng)元分化,免疫組織化學(xué)和免疫熒光檢測神經(jīng)元表面標(biāo)志NSE和NeuN的表達(dá)。用CM-Dil標(biāo)記BMSCs,流式細(xì)胞儀檢測其標(biāo)記率。選用成年雌性SD大鼠,分為細(xì)胞治療組(CM-Dil標(biāo)記的BMSCs0.1 mL,約107個(gè)經(jīng)球后靜脈注射,鋅組(制模前每天給予大鼠10mg·kg-1體重ZnSO4,連續(xù)5天腹腔注射),鋅加細(xì)胞組(同時(shí)給予鋅預(yù)處理和細(xì)胞移植),模型組,假手術(shù)組和正常大鼠。采用夾閉腹主動脈的方法制備SCⅡ模型。分別于再灌注后1d、2d、3d、4d、5d、6d對四組模型進(jìn)行Basso Beattie Bresnahan (BBB)運(yùn)動功能評分。缺血再灌注損傷7天后,取大鼠脊髓進(jìn)行HE染色、尼氏體染色、Tunel法、免疫熒光化學(xué)和免疫組織化學(xué)檢測,觀察各組脊髓組織形態(tài)和凋亡情況及凋亡相關(guān)基因表達(dá)。缺血再灌注第4天利用小動物活體成像系統(tǒng)觀察BMSCs在大鼠體內(nèi)分布情況；缺血再灌注第7天后,利用激光共聚焦顯微鏡觀察BMSCs在大鼠脊髓中的分布和分化情況。 本研究結(jié)果顯示：貼壁培養(yǎng)法得到的BMSCs細(xì)胞活力好,傳代以后擴(kuò)增速度快。BMSCs被誘導(dǎo)分化后表達(dá)神經(jīng)元特異性標(biāo)志NeuN和NSE,表明其分化成神經(jīng)元樣細(xì)胞。4μg·mL-1CM-Dil標(biāo)記BMSCs對細(xì)胞無毒性,標(biāo)記率達(dá)93.9%。細(xì)胞治療組、鋅組和鋅加細(xì)胞組BBB運(yùn)動功能評分顯著高于模型組(P0.05)。HE染色和尼氏體染色表明各干預(yù)組病理組織形態(tài)改變明顯好于模型組。Tunel結(jié)果表明各干預(yù)組細(xì)胞凋亡率顯著低于模型組(P0.05)。Bcl-2/Bax比值各干預(yù)組顯著高于模型組(P0.05),Caspase-3, Caspase-9, C-fos蛋白表達(dá)各干預(yù)組顯著低于模型組(P0.05)。小動物成像系統(tǒng)和激光共聚焦顯微鏡觀察結(jié)果表明BMSCs在再灌注第3天聚集在受損部位,再灌注第7天激光共聚焦顯微鏡觀察到BMSCs在脊髓內(nèi)分化為神經(jīng)元和星形膠質(zhì)細(xì)胞。 結(jié)論： 鋅可預(yù)防脊髓缺血再灌注的損傷；BMSCs可促進(jìn)脊髓缺血再灌注損傷的修復(fù)；鋅能促進(jìn)BMSCs對脊髓缺血再灌注損傷的修復(fù)作用；BMSCs在受損脊髓組織內(nèi)的定植及向神經(jīng)細(xì)胞的分化可能是BMSCs修復(fù)脊髓缺血再灌注損傷的機(jī)制之一；抗凋亡作用可能是鋅和BMSCs防治脊髓缺血再灌注損傷及鋅促進(jìn)BMSCs治療脊髓缺血再灌注損傷的作用機(jī)制之一。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R363

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1467317