發(fā)布時(shí)間：2018-01-25 10:53

  本文關(guān)鍵詞： 蠟樣芽孢桿菌 非溶血型腸毒素 原核表達(dá) 多克隆抗體　出處：《中國(guó)病原生物學(xué)雜志》2017年07期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的分別對(duì)非溶血性腸毒素基因(Nhe)的3個(gè)亞基進(jìn)行原核表達(dá),并對(duì)蠟樣芽孢桿菌分泌的非溶血性腸毒素蛋白進(jìn)行免疫學(xué)鑒定。方法根據(jù)NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)非溶血性腸毒素NheA、NheB、NheC基因序列設(shè)計(jì)引物,以蠟樣芽孢桿菌的基因組為模板,PCR擴(kuò)增NheA、NheB、NheC基因。分別將3個(gè)基因克隆到原核表達(dá)載體pET-30a(+)后轉(zhuǎn)化到大腸埃希菌BL21(DE3),IPTG誘導(dǎo)表達(dá)目的蛋白,進(jìn)行SDS-PAGE分析以及Western blot分析,并免疫新西蘭大白兔,制備多克隆抗體。結(jié)果經(jīng)PCR和酶切鑒定,成功構(gòu)建重組表達(dá)載體。重組表達(dá)載體分別轉(zhuǎn)化至BL21(DE3),經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)相應(yīng)的目的蛋白,分子質(zhì)量單位分別為NheA 40ku,NheB 44ku,NheC 40ku。經(jīng)電離飛行時(shí)間質(zhì)譜鑒定,重組蛋白NheA、NheB和NheC表達(dá)正確。3種目的蛋白經(jīng)SDS-PAGE電泳后分別割膠回收,免疫新西蘭大白兔,獲得重組多克隆抗體。結(jié)論成功構(gòu)建了NheA、NheB、NheC基因重組表達(dá)載體,表達(dá)的重組蛋白免疫新西蘭兔獲得相應(yīng)的克隆抗體,為進(jìn)一步研究非溶血型腸毒素的結(jié)構(gòu)和功能奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:Objective to express three subunits of non-hemolytic enterotoxin gene (NHE) in prokaryotic expression. The nonhemolytic enterotoxin protein secreted by Bacillus cereus was identified by immunology. Methods Primer was designed according to the sequence of NheAn NheBnheC gene in NCBI database. The genomic DNA of Bacillus cereus was amplified by PCR. Three genes were cloned into the prokaryotic expression vector pET-30a () and transformed into Escherichia coli BL21DE3 / IPTG to induce the expression of the target protein. The polyclonal antibodies were prepared by immunizing New Zealand white rabbits with SDS-PAGE analysis and Western blot analysis. The results were identified by PCR and enzyme digestion. The recombinant expression vector was transformed into BL21DE-3G, and the target protein was induced by IPTG. The molecular weight unit was NheA 40ku. NheB 44kuN NheC40ku. the recombinant protein NheA was identified by ionization time of flight mass spectrometry. NheB and NheC were correctly expressed. 3 kinds of target proteins were extracted by SDS-PAGE electrophoresis and then immunized with New Zealand white rabbits to obtain recombinant polyclonal antibodies. Conclusion NheA was successfully constructed. The recombinant expression vector of NheC gene was obtained by immunizing New Zealand rabbits with the recombinant protein, which laid a foundation for further study on the structure and function of non-hemolytic enterotoxin.
【作者單位】： 江蘇大學(xué)生命科學(xué)研究院;
【分類號(hào)】：R392
【正文快照】： 蠟樣芽孢桿菌(Bacillus cereus)是一種革蘭陽性菌,能產(chǎn)生芽孢,廣泛存在于人類的周圍環(huán)境中[1]。蠟樣芽孢桿菌被認(rèn)為是一種條件致病菌[2],可引起眼內(nèi)炎、敗血癥等,而其引起的食物中毒最為常見也最為重要[3]。蠟樣芽孢桿菌能產(chǎn)生多種毒素,引起腹瀉或嘔吐。引起腹瀉類型的毒素包

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 儀淑敏;李遠(yuǎn)釗;張培正;梁浩;朱英蓮;;蠟樣芽孢桿菌在營(yíng)養(yǎng)肉湯和維也納香腸中的生長(zhǎng)模型及控制[J];食品工業(yè)科技;2007年09期

【共引文獻(xiàn)】

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【相似文獻(xiàn)】

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相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 郭欣欣;單核細(xì)胞增生李斯特菌感染模型的建立及一株蠟樣芽胞桿菌的鑒定和毒性研究[D];華中師范大學(xué);2015年

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本文編號(hào)：1462674