本文關(guān)鍵詞： Gibson Assembly連接法 狂犬病病毒 感染性cDNA 連接　出處：《基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué)》2017年06期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：本研究為高效構(gòu)建狂犬病SRV9ψ區(qū)缺失株感染性cDNA克隆,在細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行重組狂犬病病毒的拯救提供幫助。按照Isothermal in vitro recombination system or"Gibson Assembly"連接方法設(shè)計(jì)引物,分別擴(kuò)增得到去除狂犬病SRV9標(biāo)準(zhǔn)疫苗株的偽基因區(qū)(ψ區(qū))的首尾均存在互補(bǔ)序列的5個結(jié)構(gòu)蛋白基因的目的片段。利用T5核酸外切酶、DNA聚合酶及T4連接酶的協(xié)同作用,兩步即可獲得狂犬病SRV9ψ區(qū)缺失株的感染性cDNA。本研究利用Gibson Assembly連接法成功高效構(gòu)建了狂犬病SRV9ψ區(qū)缺失株的感染性cDNA。此方法避免了傳統(tǒng)的酶切連接方法中繁瑣的實(shí)驗(yàn)步驟,實(shí)現(xiàn)了多個基因片段間的無縫連接,大大提高了載體構(gòu)建的效率,為進(jìn)一步研究狂犬病病毒的基因功能提供高效的方法。同時也為Gibson Assembly法應(yīng)用于其它載體的構(gòu)建提供借鑒。
[Abstract]:The aim of this study was to construct an infectious cDNA clone of rabies SRV9 蠄 deletion strain. The rescue of recombinant rabies virus in the cell was carried out according to Isothermal in vitro recombination system or. The primer was designed by Gibson Assembly. Five structural protein genes with complementary sequences were amplified from the pseudo gene region (蠄 region) of rabies SRV9 standard vaccine strain. T5 nucleic acid exonuclease was used. The synergism of DNA polymerase and T4 ligase. Infectious cDNA of rabies SRV9 蠄 deletion strain could be obtained in two steps. Gibson was used in this study. The infectious cDNA of rabies SRV9 蠄 deletion strain was successfully constructed by Assembly ligation method. This method avoids the tedious experimental steps in the traditional enzyme ligation method. The seamless connection between multiple gene fragments is realized, and the efficiency of vector construction is greatly improved. It provides an efficient method for further study on the gene function of rabies virus, and also provides a reference for the application of Gibson Assembly method in the construction of other vectors.
【作者單位】： 新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)學(xué)院;新疆農(nóng)墾科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所;
【基金】：國家自然科學(xué)基金“犬瘟熱病毒N基因-犬細(xì)小病毒VP2基因構(gòu)建重組狂犬病病毒的研究”(31360623)資助
【分類號】：R373
【正文快照】： 狂犬病病毒(rabies virus,RV)為單股負(fù)鏈RNAprotein,N)、磷酸化蛋白(phosphoprotein,P)、基質(zhì)蛋白病毒,基因組共編碼五個結(jié)構(gòu)蛋白:核蛋白(nucleo-(matrix protein gene,M)、糖蛋白(glycoprotein gene,G) 和多聚酶蛋白(RNA dependent RNA polymerase,L)因的PCR產(chǎn)物條帶大小分

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本文編號：1455829