本文關鍵詞： 人冠狀病毒NL63 人冠狀病毒229E 核衣殼蛋白基因 聚合酶鏈式反應 酶聯(lián)免疫吸附試驗　出處：《福建醫(yī)科大學》2012年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：目的 分別建立人冠狀病毒NL63（Human Coronavirus NL63, HCoV-NL63）和人冠狀病毒229E （Human Coronavirus229E, HCoV-229E）的血清酶聯(lián)免疫吸附檢測法（Enzyme-linked ImmunosorbentAssay，ELISA），檢測兩種病毒血清IgG抗體，對其在福州地區(qū)兒童和青少年人群中的感染情況進行流行病學調查。 方法 分別設計HCoV-NL63核衣殼蛋白基因3’端463bp、HCoV-229E核衣殼蛋白基因3’端514bp片段的引物。擴增這兩個片段并將其克隆到pET-22b(+)載體上，，并轉化到表達宿主大腸桿菌BL21，然后對克隆菌進行鑒定。通過誘導劑誘導蛋白表達，對表達的重組蛋白進行純化、鑒定。以經(jīng)過鑒定的純化重組蛋白為抗原建立血清ELISA法。以此法檢測收集到的442份0-20歲血清標本中兩種病毒抗體，最后對結果進行比較分析。 結果 1、442份血清樣本中，HCoV-NL63抗體陽性277份(62.7%)。其中，≤6月嬰兒陽性率50.6%（40/79）；6～12月嬰兒陽性率67.1%(19/28)；1～5歲個體陽性率73.1%（125/171）；5～10歲個體陽性率62.5%（55/88）；10～20歲個體陽性率50%（38/76）。 2、 HCoV-229E抗體陽性241份(54.5%)。其中，≤6月嬰兒陽性率49.4%（39/79）；6～12月嬰兒陽性率64.3%（18/28）；1～5歲個體陽性率70.8%（121/171）；5～10歲個體陽性率48.9%（43/88）；10～20歲個體陽性率26.3%（20/76）。 結論 1、成功建立了HCoV-NL63和HCoV-229E血清抗體的ELISA檢測法。 2、HCoV-NL63與HCoV-229E是福州地區(qū)兒童和青少年呼吸道感染的常見病原體，不同年齡段的陽性率可能有差異。 3、本研究結果為福州地區(qū)兒童和青少年呼吸道感染的防治提供了重要資料。所建立的檢測方法具有進一步用于相關臨床檢測與研究的前景。
[Abstract]:Purpose Enzyme - linked ImmunosorbentAssay ( ELISA ) was established to detect the infection of human coronavirus NL63 ( HCoV - NL63 ) and human coronavirus 229E ( HCoV - 229E ) . method The 3 ' end 463bp of HCoV - NL63 nuclear capsid protein gene and 514bp fragment of HCoV - 229E nuclear capsid protein gene were designed respectively . The two fragments were amplified and cloned into pET - 22b ( + ) vector , and then cloned into pET - 22b ( + ) vector . Results Among the 1,442 serum samples , 277 ( 62.7 % ) of HCoV - NL63 antibody were positive . Among them , the positive rate of infants 鈮

本文編號：1444057