發(fā)布時間：2018-01-18 11:27

  本文關(guān)鍵詞：鼠李糖乳桿菌顆粒表面展示系統(tǒng)的構(gòu)建　出處：《生物工程學(xué)報》2017年01期 　論文類型：期刊論文

  更多相關(guān)文章： 鼠李糖乳桿菌LGG GEM顆粒 錨定蛋白 表面展示 鑒定

【摘要】：為了比較不同錨鉤蛋白基序結(jié)合活性,構(gòu)建新型的鼠李糖乳桿菌顆粒表面展示系統(tǒng)。首先,用熱酸處理法制備鼠李糖乳桿菌GEM(Gram-positive enhancer matrix,GEM)顆粒,并通過電鏡觀察、RT-PCR檢測和SDS-PAGE檢測鑒定其處理效果;同時,利用大腸桿菌表達了錨定蛋白PA3-EGFP和P60-EGFP并將其與GEM顆粒共同孵育結(jié)合;最后,使用免疫印跡、電鏡觀察、熒光顯微鏡觀察和熒光分光光度法評價鼠李糖乳桿菌GEM顆粒與錨定蛋白的結(jié)合效率。結(jié)果表明,使用10%的TCA處理鼠李糖乳桿菌得到了滅活的肽聚糖骨架(GEM顆粒),經(jīng)鑒定其大小形態(tài)均一,絕大部分無蛋白殘留,3.8×10~6個GEM顆粒樣品中的DNA拷貝數(shù)僅為32;免疫印跡和熒光顯微鏡觀察均可檢測到融合蛋白PA3-EGFP和P60-EGFP錨定在GEM顆粒上,且結(jié)合在GEM顆粒表面的錨定蛋白呈絮狀。熒光分光光度計法檢測結(jié)果顯示錨定蛋白PA3-EGFP結(jié)合GEM的效率稍高于P60-EGFP,但差異不顯著(P0.05)。以上結(jié)果表明由鼠李糖乳桿菌制得的GEM顆粒與錨定蛋白PA3、P60的結(jié)合效率良好,可用于構(gòu)建新型的外源蛋白表面展示系統(tǒng),進而為后續(xù)的細菌樣顆粒疫苗的研究與應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。
[Abstract]:In order to compare the motif binding activity of different motifs, a new surface display system of Lactobacillus rhamnoides granules was constructed. Lactobacillus rhamnoides GEM(Gram-positive enhancer matrixGem granules were prepared by thermal acid treatment and observed by electron microscope. RT-PCR detection and SDS-PAGE detection were used to identify the treatment effect. At the same time, the anchored protein PA3-EGFP and P60-EGFP were expressed by E. coli and incubated with GEM particles. Finally, the binding efficiency of Lactobacillus rhamnoides GEM particles with anchoring protein was evaluated by Western blot, electron microscope, fluorescence microscope and fluorescence spectrophotometry. The inactivated peptidoglycan skeleton gem granules were obtained by treating Lactobacillus rhamnoides with 10% TCA. The copy number of DNA in 3.8 脳 10 ~ 6 GEM particles was only 32. The fusion proteins PA3-EGFP and P60-EGFP were anchored on GEM particles by Western blot and fluorescence microscopy. The results of fluorescence spectrophotometer showed that the binding efficiency of anchored protein PA3-EGFP to GEM was slightly higher than that of P60-EGFP. However, the difference was not significant (P 0.05). The above results showed that the binding efficiency of GEM granules made from Lactobacillus rhamnoides to the anchoring protein PA3P60 was good. It can be used to construct a new surface display system of exogenous protein and lay a foundation for the further research and application of bacterial-like granulocyte vaccine.
【作者單位】： 天津農(nóng)學(xué)院動物科學(xué)與動物醫(yī)學(xué)學(xué)院;軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院生物工程研究所;
【分類號】：R392
【正文快照】： 鼠李糖乳桿菌(Lactobacillus rhamnosus GG,LGG)為革蘭氏陽性菌,是研究最廣泛的乳酸菌之一,具有生長速度快、生物安全性高等優(yōu)點,能夠有效調(diào)節(jié)腸道菌群和提高機體克疫力[1]。近些年,在基因工程技術(shù)的推動下,Qr于包括鼠李糖乳桿菌在內(nèi)的多種乳酸菌(Lactis acid bacteria,LAB)已

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本文編號：1440746